35. Способы вегетативного размножения. Размножение способом in vitro.

Вегетативное размножение — это увеличение числа организмов данного вида при помощи отделения от вегетативного тела жизнеспособных частей с дальнейшей регенерацией частей до целого дочернего организма.

Способы вегет размн:

• Делением куста

• Отпрысками

• Отводками

• Черенками

• Клубнями

• Луковицами

• Прививками

• Корневищами и др

В качестве растительного материала для размножения м.-дом культуры тканей, по-видимому, можно брать любые ткани содержащие живые клетки. Ближайшая задача заключается в том, чтобы создать условия, при которых живые клетки культивируе­мой ткани начали делиться. В результате многократного деления живых клеток образуется каллюс. Этот процесс называется про­лиферацией. В дальнейшем задача сводится к созданию условий для дифференциации каллюса, образования специализирован­ных органов и тканей, присущих размножаемому виду, получе­ния полноценных растений.

Ткани в культуре выращивают в стерильных условиях, поэто­му необходимы специальные помещения и оборудование.

В помещениях необходим набор посуды из стекла, автоклавы, холодильные камеры, термостаты, инструменты для изоляции растительных объектов, встряхиватели, вытяжные шкафы, водопровод, канализацию, искусственное (дополнительное) освещение, набор химикатов для составления питательных сред.

Питательная среда должна включать такой набор веществ и в таких пропорциях, которые обеспечивают деление, рост и диф­ференциацию размножаемой растительной ткани.

Раствор добавляют к средам в количестве от нескольких ка­пель до 1 мл на 1 л;

Питательная среда состоит из раствора минеральных солей, раствора микроэлементов и различных до­бавок. Компоненты питательной среды и сами среды готовят на бидистиллированной воде. Питательную среду готовят в день стерилизации.

В культуре тканей, могут быть использо­ваны зародыши семян и корешки проростков. В любом случае семена стерилизуют, предварительно удалив твердые покровы. Семена обмывают мыльной пеной, горячей водой, споласкива­ют несколько раз водопроводной, затем дистиллированной во­дой, обрабатывают стерилизующим веществом и про­мывают стерильной водой.

Если в культуре используются корешки от проростков, то стерилизованные семена помещают на питательную среду, про­ращивают при определенной температуре (как правило, опти­мальная температура составляет 20-27°С), отрезают кончик поя­вившегося корешка (длиной около 1 см) и пересаживают на пи­тательную среду.

Для выращивания в культуре зародышей семена надрезают или обрезают в халазальной части, зародыши осторожно выдав­ливают или извлекают шпателем и переносят на питательную среду. При работе с любыми растительными объектами необхо­димо пользоваться стерильными инструментами. Извлеченные зародыши пересаживают на питательную сре­ду так, чтобы они оказались в центре пробирки или колбы под небольшим слоем среды. Пальцами прикасаться к зародышу не­льзя.

Части листа предварительно промывают теплой водой с мы­лом и стерилизуют.

Отрезки побегов стерилизуют, как правило, спиртом, обжи­гают над спиртовкой, снимают кору, разрезают на кусочки, ко­торые пересаживают на питательную среду.

Нежные ткани пыльников обрабатывают слабыми раствора­ми стерилизаторов и переносят на питательную среду.

Для успешного роста тканей в изолированной культуре необ­ходимо создать благоприятный температурный и световой ре­жим, а также режим влажности.

Тепловой режим зависит от вида растения и культивируемой ткани. Оптимальная температура для культуры корней составля­ет у двудольных 25-27°С, однодольных 20-25°С, голосеменных 18-20°С. Свет не всегда является необходимым при выращивании куль­тур in vitro.

Практически на всех этапах работы м.-дом культуры тканей требуется относительная влажность воздуха около 80%.

Наибольшие успехи достигнуты при выращивании зароды­шей у плодовых древесных растений.

М.-дом изолированной культуры тканей решаются разно­образные практические задачи:

• получения большой биологической массы с содержанием оп­ределенных веществ (например, разведение корня женьшеня);

• получения взрослых растений из недоразвитых зародышей, как правило, у отдаленных гибридов;

• получения гаплоидных растений для генетико-селекционных работ;

• размножение редких форм растений без изменения генотипа и др.

Применительно к большинству видов древесных растений ос­новной практической задачей культуры тканей является выра­щивание жизнеспособных растений, вовлекаемых в дальнейший селекционный процесс или непосредственно используемых в производстве. Для этого необходимо перевести растение из ус­ловий стерильной изолированной культуры в условия открытого грунта. Осуществляется это путем укоренения придаточных по­бегов, образовавшихся в культуре in vitro, и последующего ступен­чатого переноса их в грунт или путем прививки.

Для укоренения образовавшихся придаточных побегов- пересаживают на питательную среду с добавлением нафтил- или индолилуксусной кислоты.

Укоренившийся побег пересаживают в вазон с почвой или песком. В течение 5-6 дней растение поливают стерильной водой (если оно высажено в поч­ву) или стерильным питательным раствором (если растение вы­сажено в песок).

Когда растения достигают хорошего развития, их пересажи­вают в открытый грунт.

Второй путь переноса растений из изолированной культуры в грунт заключается в прививке части придаточного побега или проростка (из зародыша) на подвой. Во избежание отрицатель­ного воздействия резкой смены условий выращивания желатель­но прививать в условиях теплицы.