Клеточного сока плазмолитическим методом

(по Де-Фризу)

Материалы и оборудование: 1) луковица синего лука 2) бритвы, 3) препаровальные иглы, 4) предметные и покровные стекла, 5) микроскопы, 6) стеклянные палочки, 7) кусочки фильтровальной бумаги, 8) баночки или тигельки для растворов 8 шт., 9) часовое стекло, 10) бюретки с воронками 2 шт., 11) раствор NaCl 1 M, 12) дистиллированная вода, 13) раствор нейтральной красной краски 1:5000, 14) лезвия бритвы, 15) карандаш по стеклу.

Если поместить кусочки исследуемой ткани в растворы различной концентрации, то плазмолиз можно наблюдать только в гипертонических растворах. Изотонические и гипотонические растворы плазмолиза не вызывают. Просмотрев кусочки тканей после выдержки в растворах разной концентрации, можно заметить, что в клетках одних кусочков будет силь-

ная степень плазмолиза, в некоторых наблюдается начальный плазмолиз, а в других он не наблюдается. Начальный (уголковый) плазмолиз свидетельствует, что концентрация окружающего раствора лишь немного превышает концентрацию клеточного сока. Более слабый раствор не вызывает плазмолиза и имеет осмотическое давление меньше осмотического давления клеточного сока. Концентрация изотонического раствора будет лежать между концентрациями этих двух растворов. Цель работы – определить изотонический раствор и вычислить его осмотическое давление по формуле Вант-Гоффа:

Р = RTCi

Где: P – осмотическое давление в атм.,

R – газовая постоянная (0,0082),

T – абсолютная температура (273 + t C),

t – температура окружающей среды,

C – молярная концентрация растворов,

i – изотонический коэффициент, представляющий собой отношение осмотического давления раствора электролита к осмотическому давлению раствора неэлектролита той же молярной концентрации.

Ход работы: Приготовить растворы концентрации 0,8; 0,7; 0,6; 0,5; 0,4; 0,3; 0,2; 0,1 М. Для этого налить в баночки или тигельки соответствующие количества молярного раствора и воды (например, для приготовления 10 мл раствора 0,1 М нужно взять 9 мл воды и 1 мл молярного раствора NaCl, 0,2 М раствора соответственно 0,2 мл раствора и 8 мл воды и т.д.). Одна чашечка должна быть заполнена дистиллированной водой. Приготовить 18 срезов эпидермы чешуи синего лука и поместить их на часовое стекло в воду. Если лук обычный, то срезы на часовое стекло помещают в раствор нейтрального красного на 10 мин. Этим достигается одинаковая окраска и состояние клеток. Затем извлекают срезы из раствора краски, обсушивают фильтровальной бумагой и погружают по 2 среза в каждый раствор, при этом следят, чтобы срезы были закрыты раствором. Погружение начинают с самого концентрированного раствора и отмечают время. Через 20 – 30 мин рассматривают срезы в микроскоп в капле того же раствора, в той же последовательности, в какой помещали их в раствор. Стеклянную палочку или кисточку, которыми наносится капля раствора, и кусочек ткани после каждого раствора споласкивают водой и вытирают салфеткой или фильтровальной бумагой. Результаты опыта занести в таблицу.

Концентрация раствора, М	1,0	0,8	0,7	0,6	0,5	0,4	0,3	0,2	0,1	Вода
Изотонический коэффициент	1,62	1,64	1,66	1,68	1,70	1,73	1,75	1,78	1,83
Степень плазмолиза
Рисунки клетки

В третьей строке указать, в каком состоянии находится большинство клеток, в четвертой строке сделать схематический рисунок клетки в том состоянии, в котором находится большинство клеток. Выявить осмотическое давление по уравнению Вант-Гоффа. В выводах объяснить связь между концентрацией раствора и степенью плазмолиза клеток.