Тема 3. Дыхание Работа 16. Определение интенсивности дыхания по количеству поглощенного кислорода.

Материалы и оборудование: 1) проросшие и непроросшие семена каких-либо растений, 2) весы, 3) разновес, 4) две бунзеновские колбы, соединенные с вертикальной градуиро­ванной трубкой, 5) пробки к колбами, 6) два стакана с под­крашенной водой, 7) насыщенный раствор щелочи, 8) две маленькие пробирки, 9) пинцет, 10) черная бумага, 11) пла­стилин, 12) штатив для колб,

Манометрический метод определения интенсивности ды­хания основан на учете количества кислорода, поглощенного исследуемым объектом, В замкнутый сосуд, соединенный с манометрической трубкой, помещают навеску исследуемого материала и крепкий раствор щелочи. Подъем воды

в трубке будет происходить за счет разряжения, возникающего в ре­зультате поглощения кислорода семенами. Объем поглощен­ного в опыте кислорода будет соответствовать объему воды, поднявшейся в трубке.

Ход работы. В колбы с вертикальной градуированной трубкой поместить; навески (50—100 г) сухих и проросших семян. Поставить пинцетом в колбы пробирки с крепким раствором щелочи для поглощения выделяемого в процессе дыхания СО2. Погрузить концы градуированных трубок в подкрашенную воду и замазать пробку пластилином. Колбу с проросшими семенами закрыть черной бумагой. Подождать минут 10, чтобы колбы охладились после прикосновения рук. Отметить, исходный уровень воды в трубке. Через определен­ное время произвести повторный отсчет.

Сделать три отсчета через равные промежутки времени. Средние результаты записать в таблипу.

Объект	Навеска семян, г	Продолжитель- ность опыта, мин	Уровень воды в трубке, мкл.		Мкл поглощенного кислорода	Интенсив-ность дыхания мкл. О2/г х ч.
			1-й	2-й
Проросшие семена
Сухие семена

Интенсивность дыхания вычислить по формуле:

V x 60 мкл.

а =

P x t г. х ч

V — объем поглощенного кислорода, мкл.;

Р — вес взятой пробы семян, г;

t — продолжительность опыта, мин.;

60 - коэффициент перевода времени в часы.

Сделать вывод, сравнив интенсивность дыхания сухих и прорастающих семян.

Работа 17. Определение интенсивности дыхания по количеству

Выделенной углекислоты.

Материалы и оборудование: 1) проросшие и непроросшие зерновки ячменя или пшеницы, набухшие и покоящиеся почки, листья, цветки или другие объекты, 2) раствор Ва(ОН)2 0,1 н, 3) раствор НС1 0,1 н в бюретке, 4) фенол­фталеин в капельнице, 5) весы с разновесами, 6) три кони­ческие колбы с резиновыми пробками (в пробках должны быть отверстия, а в двух — металлические крючки, 7) два куска марли (10х10 см).

Определение интенсивности дыхания этим методом ос­новано на учете количества углекислого газа, выделяемого при дыхании растительного материала, помещенного в замк­нутый сосуд с некоторым количеством щелочи (материал и щелочь не должны соприкасаться). Углекислота, выделяю­щаяся при дыхании, реагирует со щелочью по уравнению:

Ва(ОН)2 + СО2 — ВаСОз+ Н2О

Избыток оттитровывают соляной кислотой:

Ва(ОН)2 + 2НС1 - BaCl2+ 2H2O

Ход работы: В марлевые салфетки помещают по 4—10 гр. исследуемого объекта (например, проросшие и непроросшие семена) и, завернув уголки, подвешивают на крючки, укреп­ленные в пробках. Проверяют плотность установки, обратив внимание на то, чтобы пробка плотно закрывала колбу,.. ме­шочек с материалом свободно проходил через горло, между мешочком и дном колбы было достаточно большое рас­стояние. Во все три колбы наливают по 10 мл 0,1 н раствора Ва(ОН)2, добавляют по 2 капли фенолфталеина и быстро закрывают — опытные колбы пробками с материалом, кон­трольную — просто пробкой. Отверстия в пробках должны быть заделаны или стеклянной. палочкой, или пластилином. Отмечают время начала опыта. Если используется фотосинтезирующий материал (листья), то колбу закрывают черной бумагой, чтобы исключить фотосинтез. Продолжительность опыта различна: от 30 мин. до 2 часов. В процессе опыта колбы осторожно покачивают, чтобы разрушить пленку ВаСОз, которая. препятствует поглощению углекислоты. По окончании опыта (время окончания фиксируют) материал вынимают, быстро закрывают колбу пробкой и оставшуюся щелочь осторожно титруют до обесцвечивания через отвер­стие в пробке. Результаты заносят в таблицу.

Объект	Навеска, гр.	Время		Продол-житель- ность опыта, мин	Количество НС1, израсходованное на титрование, мл		Интенсивность дыхания, мг.
					контроль	Опыт
		Начало опыта	Конец опыта
							г х час

1.

2.

3.

Интенсивность дыхания рассчитывают до формуле:

I = (а—в) х 2,2 х 60 мг СО2

р х t г х час

где:

а — количество мл 0,1 н НС1, израсходованное на

титрование контрольной колбы,

b — количество мл 0,1 н НС1, израсходованное на

титрование опытной колбы;

2,2—количество мг СО2, соответствующее мл 0,1 н НС1.

Р — навеска семян в гр.,

t - продолжительность опыта в мин.,

60—переводной коэффициент в часы.

Сделать выводы об интенсивности дыхания различных объектов.