8.Хроматография

Хроматография – это физико-химический метод разделения и анализа смесей, основанный на распределении их компонентов между двумя фазами: неподвижной - сорбентом и подвижной – элюентом или газом носителем.

8.1.Классификация хроматографических методов

8.1.1.Классификация по агрегатному состоянию фаз

1. Газо-жидкостная (ГЖХ).

2. Газо-твердофазная (газо-адсорбционная).

3. Жидко-твердофазная.

4. Жидко-жидкостная. На поверхности сорбента находится слой неподвижной жидкой фазы.

5. Сверхкритическая флюидная хроматография (сорбент – твердое тело).

Поскольку газовые разновидности хроматографии могут использоваться исключительно для летучих соединений, далее мы будем рассматривать только жидкостную хроматографию.

8.1.2.Классификация по технике исполнения

1. Планарная

   1. Бумажная

   2. Тонкослойная (ТСХ)

2. Колоночная

   1. Низкого давления (на открытых колонках)

   2. Среднего давления

   3. Высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ, HPLC).

Тонкослойная хроматография применяется для быстрого разделения смесей и, как правило, не требует сложного аппаратного обеспечения. Допускает параллельный анализ большого числа проб, однако дает не очень хорошие результаты при количественном анализе.

Колоночная хроматография низкого давления – это препаративный метод.

Колоночная хроматография среднего давления уже требует достаточно сложной аппаратуры и широко используется в химии белков и нуклеиновых кислот для препаративных выделений, реже используется как аналитический метод.

ВЭЖХ подразумевает использование специальных приборов – жидкостных хроматографов и может использоваться и в аналитическом и в препаративном варианте.

8.1.3.Классификация по принципам разделения

1. Адсорбционная и нормально-фазная на модифицированных сорбентах

   1. Разделение слабо- и среднеполярных соединений вследствие разницы в адсорбционных свойствах (в полярных частях молекул)

   2. Взаимодействие обеспечивают Ван-дер-ваальсовые взаимодействия (диполь-дипольное притяжение, дисперсионное притяжение и индукционное притяжение).

   3. Жидко-твердофазная хроматография.

2. Распределительная

   1. Разделение средне- и сильнополярных соединений за счет разницы в общей полярности молекулы и, соответственно, разницы в коэффициенте распределения между подвижной и неподвижной жидкой фазами.

   2. Взаимодействие обеспечивают гидрофобно-гидрофильные взаимодействия.

   3. Жидко-жидкофазная хроматография.

3. Эксклюзионная

   1. Разделение молекул за счет разницы в размерах.

   2. Взаимодействие обеспечивают ситовые эффекты.

   3. Формально - жидко-жидкофазная хроматография.

4. Ионообменная

   1. Разделение заряженных соединений за счет разницы в количестве и природе заряженных групп.

   2. Взаимодействие обеспечивают Кулоновские взаимодействия.

   3. Жидко-твердофазная хроматография.

5. Обращенно-фазная (фазовая)

   1. Разделение молекул за счет разницы в гидрофобной части молекулы, в меньшей степени за счет разницы в общей полярности молекулы.

   2. Взаимодействие обеспечивают гидрофобно-гидрофильные и Ван-дер-ваальсовые взаимодействия.

   3. Жидко-твердофазная хроматография.

6. Аффинная

   1. Разделение молекул за счет сродства биологических пар (фермент-субстрат, антиген-антитело, рецептор-лиганд и др.).

   2. Взаимодействие обеспечивают все вышеупомянутые взаимодействия и стерические ограничения.

   3. Жидко-твердофазная хроматография.

Эта классификация является основной с точки зрения выбора метода разделения.