16.3.2. Определение концентрации креатинина в биожидкостях с помощью тест-набора фирмы Lahema (Чехия)

Креатинин – ангидрид креатина, содержащийся в крови, мозге и особенно в мышцах, как в форме транспортного макроэрга - креатинфосфата, так и в свободном состоянии. Следы креатина есть в нормальной моче, но в мышцах, он неферментативно и необратимо распадается до креатинина. Эндогенный креатинин экскретируется в почках клубочковой фильтрацией и секрецией в микротрубочках, со скоростью ~ на 20 % больше клиренса инулина.

Его суточная экскреция удивительно пропорциональна массе мускулатуры (табл. 16.4) и составляет в моче женщин – 53-97 мкмоль/л и 61-115 мкмоль/л у мужчин.

Таблица 16.4

Возрастные нормы содержания (мг/кг) в суточной моче

(по Murray R.K. et al., 1990)

Обмен этих соединений азота связан с аминокислотой глицином и незаменимыми для консументов, аргинином и метионином (рис. 16.2).

Принцип метода: В щелочной среде креатинин взаимодействует с пикриновой кислотой, давая оранжево-красную окраску (реакция Jaffe), которую измеряют фотометрически. Метод малоспецифичен, т.к. восстановители типа глюкозы, вещества с активной метиленовой группой, кетокислоты, мочевина, мочевая кислота и пигменты: билирубин, Hb – могут завышать результаты. Поэтому определение ведут после осаждения белков биожидкостей.

Рис. 16.2. Схема обмена креатина и креатинина

Ход работы: 1. В соответствии с таблицей, внести в 3 пронумерованных центрифужных пробирки:

* - В связи с необходимостью экономии стандартного раствора креатинина, пробу 3 – Стандарт, с концентрацией креатинина 177 мкмоль/л и добавкой СА, на группу студентов, выполняет лишь одна рабочая пара.

2. Растворы перемешать и точно через 20 мин фотометрировать при λ 490 нм, в кювете толщиной 10 мм против контроля, абсорбцию пробы и стандарта.

3. По формуле: Креатинин, мкмоль/л = 177 х А опыта/А стандарта,

рассчитать концентрацию креатинина в исследуемой сыворотке.

Нормальное содержание креатинина в плазме крови здоровых людей: 0,7-1,5 мг/дл или 60-132 мкмоль/л. Оно может повышаться при приеме ряда лекарств и острых и хронических воспалительных болезнях почек.

16.4. Вопросы для самоконтроля

16.4.1. Объясните, почему азот концентрируется не в соединениях, а в атмосфере Земли?

16.4.2. Зачем и какие соединения азота нужны организмам?

16.4.3. Что такое синтрофия и чем она вызвана?

16.4.4. Что вы знаете о генах азотфиксации?

16.4.5. Какие соединения азота способны усваивать клетки-консументы?

16.4.5. Что такое витамины?

16.4.6. Каким показателем оценивают динамические состояния организмов и популяций?

16.4.7. Объясните понятия заменимые и незаменимые аминокислоты и, какова их роль с позиций питания человека?

16.4.8. Объясните причины зависимости консументов от внешних источников аминокислот.

16.4.9. В чем заключается полноценность пищевых белков для человека?

16.4.10. Что общего у сериновых протеиназ, входящих в системы пептидгидролаз ЖКТ, свертывания крови и комплемента?

16.4.11. Назовите основные источники аминокислот для клеток животных.

16.4.12. Что такое остаточный азот крови и зачем нужен этот критерий?

16.4.13. Какую роль играет определение мочевины в крови?

16.4.14. Есть ли смысл определять количество мочевины в моче и, при каких условиях?

16.4.15. Что такое креатинин и, какую информацию может дать его определение в плазме крови?