Потребность животных в аминокислотах (По р. Марри и др., 1993, с изменениями)

¹ – Фактически, эти аминокислоты синтезируются, но со скоростью, недостаточной для обеспечения роста организмов.

² – Цифры против аминокислот – число ферментов, нужных для их биосинтеза.

^3-6 – Синтез аминокислот, соответственно из глутамата, аспартата, серина и фенилаланина.

Таким образом, основными источниками аминокислот для клеток консументов служат: 1) переваривание пищевого белка в ЖКТ; 2) внутриклеточный протеолиз, в т.ч. и убиквитинзависимый; 3) биосинтез заменимых аминокислот из кетокислот и аммиака, источником которого опять-таки, служат аминокислоты пищевых и тканевых белков. С другой стороны, клетки потребляют аминокислоты, прежде всего для: 1. Синтеза белков и пептидов, в т.ч. секреторных. 2. Синтеза заменимых аминокислот и 3. Биосинтеза небелковых азотсодержащих соединений: пуриновых и пиримидиновых оснований, гема и других кофакторов, аминоспиртов, аминосахаров, и ряда других молекул, в т.ч. с функциями гормонов и медиаторов.

16.2. Дополнительная литература

16.2.1. Игнатов В. В. Биологическая фиксация азота и азотфиксаторы. //Соросовский образовательный журнал, 1998. – № 9. – С. 28 – 33.

16.2.2. Проворов Н. А. Происхождение и эволюция бобово-ризо-биального симбиоза // Ж. Общ. Биол., 2001. – Т. 62. – С. 472 – 495.

16.2.3. http://www.ksu.ru/conf/botan200/s181.rtf

16.3 Экспериментальная часть

Собирательным термином небелковые соединения азота обозначают все низкомолекулярные азотсодержащие вещества, остающиеся в центрифугате или фильтрате после осаждения белков из биопробы. Синоним этого понятия в клинической биохимии – «остаточный азот крови», количество которого служит критерием азотвыделительной функции почек (табл. 16.3). Ряд компонентов остаточного азота: мочевина, креатинин, билирубин имеют самостоятельное диагностическое значение, в связи, с чем определяются с помощью стандартных тест-наборов реактивов.

Таблица 16.3

Компоненты остаточного азота крови

16.3.1. Определение количества мочевины в биожидкостях с помощью тест-набора фирмы Lachema (Чехия)

Мочевина – конечный продукт азотистого обмена у части беспозвоночных, многих позвоночных и большинства млекопитающих. Ее нормальная концентрация в плазме крови указана в таблице 16.3 и зависит от состава и количества пищи, интенсивности распада белков и др. азотистых соединений, обезвреживающей функции печени и азотовыделительной функции почек. Т.о., этот диагностический показатель имеет большое значение для экспериментальных и клинических лабораторий.

Одним из лучших по специфичности, чувствительности и воспроизводимости, является фотометрический метод определения мочевины с диацетилмонооксимом. Он основан на том, что в сильнокислой среде, присутствии ионов трехвалентного железа и тиосемикарбазида, мочевина образует с диацетилмонооксимом комплекс красного цвета, интенсивность окраски которого зависит от ее количества. Внимание!!! Тиосемикарбазид токсичен! При попадании раствора на кожу или в глаза - обильно промыть пораженное место водой. При попадании внутрь - сразу выпить не менее 0,5 л воды и вызвать рвоту. Оказывая первую помощь, пользоваться инструкциями ИОТ-001-05, ИОТ-002-КГУ-06 и немедленно поставить в известность лаборанта и преподавателя!

Ход анализа: 1. В соответствии с п. 3.3.1, с помощью полуавтоматического дозатора, соответственно таблице внести в 3 пробирки следующие растворы:

2. Содержимое пробирок перемешать, прикрыть горлышки колпачками из алюминиевой фольги и, выдержать на кипящей водяной бане точно 10 мин!

3. Тут же, хорошо охладить пробирки под краном и, не позже чем через 15 мин., измерить абсорбцию растворов на ФЭКе, при длине волны 540 нм (зеленый светофильтр), в кювете толщиной 10 мм.

4. По формуле: Мочевина, ммоль/л = 16,65 х Аопыта/А стандарта, рассчитать ее концентрацию в исследуемой сыворотке