Ртга при типировании вируса

Компоненты реакции - известные иммунные противовирус­ные сыворотки, вируссодержащий материал, подлежащий типи-рованию, изотонический раствор хлорида натрия для приготов­ления разведений иммунных сывороток.

Постановка реакции. Готовят двукратные разведения им­мунных противовирусных сывороток. К каждому разведению до­бавляют равное количество вируссодержащего материала. Кон­троль реакции - взвесь вируса в изотоническом растворе хлорида натрия. Инкубация планшетов в термостате 30 мин. или при ком­натной температуре в течение 2 часов. После инкубации добав­ляют 1% взвесь эритроцитов. Регистрация реакции осуществля­ется через 30-45 мин. Устанавливают титр вируснейтрализую-щей сыворотки - максимальное разведение сыворотки, кото­рое вызвало торможение агглютинации эритроцитов.

Ртга с целью проведения серологической диагностики

При использовании РТГА с целью проведения серологиче­ской диагностики вирусных инфекционных заболеваний, берут парные сыворотки пациента, первую сыворотку получают в на­чале заболевания, вторую - спустя 2 недели и более.

Диагностическое значение имеет возрастание титра антител в 4 раза и более, что свидетельствует о положительной серологи­ческой диагностике вирусного инфекционного заболевания.

Для проведения серологической диагностики в РТГА в лун­ках планшета готовят двукратные разведения исследуемых сы­вороток пациента в изотоническом растворе хлорида натрия по 0,25 мл. Предварительно определяют титр вирусного антигена в реакции гемагглютинации с целью выбора рабочей дозы. Рабочее разведение берут в 16 раз меньше титра. К разведениям сыво­ротки добавляют по 0,25 мл рабочего разведения антигена, инку­бируют 2 часа при температуре 37°С и добавляют по 0,5 мл 1% взвеси куриных эритроцитов. После инкубирования в течение 2 часов регистрируют результат реакции. В положительном случае на дне лунки образуется плотный осадок эритроцитов в виде дис­ка с ровными краями. Устанавливают титр антител по последнему разведению сыворотки при котором отмечается поло­жительный: результат реакции, подавляется гемагглютини-рунлная активность антигена.

В РТГА ставят три контроля: I) контроль эритроцитов (0,5мл изотонического раствора хлорида натрия +0,5 мл использован­ной взвеси эритроцитов; 2) контроль используемой сыворотки на способность агглютинировать эритроциты (0,25 мл исходного разведения сыворотки + 0,25 мл изотонического раствора хлори­да натрия +0,5 мл взвеси эритроцитов); 3) контроль специфично­сти антигена (при ретроспективной диагностике инфекций) со стандартной иммунной сывороткой (0,25 мл иммунной сыворот­ки в разведении 1:10 + 0,25 мл рабочего разведения антигена + 0,5 мл взвеси эритроцитов.