Агглютинацией называется обнаруживаемое невооружен­ным глазом склеивание и выпадение в осадок микробных тел при взаимодействии их со специфическими антителами — агглюти­нинами. Видимая фаза агглютинации наступает в присутствии раствора электролита. Агглютинины содержатся в сыворотке крови человека и животных, перенесших инфекцию или искусст­венно иммунизированных соответствующим видом микроба. Реакцию агглютинации исполь­зуют для определения антител в сыворотке крови больных, на­пример при брюшном тифе и паратифах (реакция Видаля), бру­целлезе (реакции Райта, Хеддлсона), туляремии и других инфек­ционных болезнях, а также для определения возбудителя, вы­деленного от больного. Эта же реакция применяется для опре­деления групп крови.

Существуют различные модификации постановки реакции агглютинации.

1. Макроскопическая объемная агглютинация в пробирках (классический метод).

2. Ускоренная ориентировочная реакция агглютинации на предметном стекле

Постановка развёрнутой реакции агглютинации объём­ным способом.

Для постановки реакции агглютинации требуются компонен­ты:

1. сыворотка крови, подлежащая исследованию, в количестве 0,1-0,2 мл;

1. изотонический раствор хлорида натрия;

2. корпускулярный антиген, взвесь живых или убитых бактерий (диагностикум).

Приготовление разведений сыворотки больного. Из иссле­дуемой сыворотки готовят ряд последовательных двукратных разведений, чаще всего от 1:50-1:100 до 1:1600-1:3200. В отдель­ной пробирке готовят первое, основное, разведение сыворотки, обычно 1:50 или 1:100. Основное разведение сыворотки исполь­зуют для приготовления ряда последовательных разведений.

Две последние пробирки ряда предназначены для контроля антигена и сыворотки (КА - контроль антигена и КС - контроль сыворотки).

Во все пробирки, за исключением первой и последней (КС), наливают по 1 мл изотонического раствора хлорида на­трия. Затем из пробирки с основным разведением сыворотки (например, 1: 100) берут З мл и наливают по 1мл в 1-ю, 2-ю и в последнюю пробирку (КС). Далее 1 мл содержимого 2-й пробир­ки переносят в 3-ю, из 3-й пробирки такое же количество - в 4-ю, из 4-й - в 5-ю. Из 5-й пробирки (последняя опытная) 1мл со­держимого выливают в банку с дезинфицирующим раствором для сохранения одинакового объема (1мл) во всех пробирках.

Таким образом, разведение сыворотки в первой пробирке соответствует основному ее разведению (1:100); в последующих пробирках получается ряд последовательных двукратных разве­дений: 1:200, 1:400, 1:800, 1:1600.

По окончании разведений во все пробирки ряда, за исключе­нием КС, прибавляют по 1-3 капли антигена, содержащего 2 млрд. живых или убитых микробных тел в 1 мл. После этого жидкость в пробирках становится слегка мутноватой.

После добавления антигена к разведенной сыворотке штатив с пробирками встряхивают для лучшего перемешивания сыво­ротки с изотоническим раствором хлорида натрия, ставят на 2 ч в термостат при 37 °С, а затем учитывают предварительный ре­зультат реакции. Окончательный результат регистрируют через 18-20 ч. Нахождения пробирок при комнатной температуре. Положительный результат реакции агглютинации характе­ризуется образованием на дне пробирки осадка с выраженным просветлением надосадочной жидкости. Остаток на дне пробир­ки, образовавшийся, в результате склеивания микробных тел, называется агглютинатом.

По характеру агглютината различают мелкозернистую (О) и крупнохлопчатую (Н) агглютинацию.

О-агглютинины, возникшие в организме под действием со­матического О-антигена, обусловливают склеивание микробных тел с образованием компактного мелкозернистого осадка, осе­дающего на дно пробирки в виде кучки. Мелкозернистая агглю­тинация протекает медленно, учитывается после 2-часового пребывания в термостате и 18-20-часового выдерживания про­бирок при комнатной температуре.

Н-агглютинины, появляющиеся в организме в ответ на вве­дение жгутикового антигена, вызывают склеивание бактери­альных клеток посредством их жгутиков с образованием круп­ных хлопьев. Выпадая на дно пробирки, крупнохлопчатый агглютинат приобретает форму опрокинутого вниз зонтика. Круп­нохлопчатая агглютинация наступает и заканчивается в течение 2 ч. пребывания пробирок в термостате. Жгутиковые агглюти­нины, как правило, достигают более высокого титра, чем сомати­ческие. Крупнохлопчатый Н-агглютинат легко регистрируется.

Учет результатов реакции агглютинации начинают с про­смотра контрольных пробирок. Реакция может считаться поло­жительной лишь в том случае, если в пробирках с контролями жидкость остается совершенно однородной, в КА - слегка мут­ной, в КС - прозрачной.

Для регистрации результатов реакции агглютинации пользу­ются четырехкрестной системой обозначения:

+ + + + полная агглютинация, при которой большой оса­док на дне располагается кучкой или в форме открытого перевер­нутого зонтика, надосадочная жидкость в пробирке совершенно прозрачна,

+ + +почти полная агглютинация, осадок такой же, как

в предыдущем случае, жидкость почти прозрачная,

+ +слабая агглютинация, небольшой осадок, жидкость непрозрачная

+отмечают следы агглютинации, осадок едва заме-

тен, жидкость непрозрачная,

—отрицательная реакция, содержимое пробирок равномерно мутное, без осадка, по виду неотличимо от содержи­мого пробирки КА.

Последнее разведение сыворотки, в котором наблюдается агглютинация, считают ее титром.

Определение серологического типа выделенного микро­ба.

Серологическая идентификация микроба посредством агглю­тинации соответствующей специфической сывороткой является завершающим этапом в проведении идентификации микробных культур (серологическое типирование).

Ориентировочная (пластинчатая) реакция агглютина­ция. Пластинчатой реакцией агглютинации на предметном стек­ле часто пользуются для определения вида микроба. На поверх­ность обезжиренного предметного стекла наносят с помощью пастеровской пипетки 2 капли агглютинирующей сыворотки и 1 каплю изотонического раствора хлорида натрия. Капли распола­гают на некотором расстоянии друг от друга, чтобы исключить возможность их слияния.

Затем в каплю изотонического раствора хлорида натрия (КА) и в одну из капель агглютинирующей сыворотки вносят исследуемую бактериальную культуру, снятую с поверхности плотной питательной среды. Ко второй капле (КС) культуру не добавля­ют. Внесенную культуру тщательно перемешивают, чтобы капля жидкости сделалась равномерно мутной. Реакция протекает при комнатной температуре. Результат учитывают с помощью лупы через 5—10 мин. При положительной реакции в капле с сыворот­кой отмечается склеивание бактерий в виде зернышек или хлопь­ев, хорошо видимых при покачивании стекла.

Групповая реакция агглютинации и способ ее устранения по Кастеллани. Некоторые микроорганизмы, кроме специфиче­ских видовых антигенов, содержат групповые антигены, общие для родственных видов бактерий. При парентеральном введении таких бактерий в организме животного и человека появляются двоякого рода антитела-агглютинины: специфические, соответст­вующие видовым антигенам, и неспецифические, возникающие под действием групповых антигенов.

Сыворотка, содержащая групповые агглютинины, агглюти­нирует различные родственные между собой микробные виды, имеющие общий групповой антиген.

Реакция агглютинации, при которой один и тот же микроб агглютинируется различными сыворотками или одна сыворотка агглютинирует различные микробы, получила название группо­вой.

Для ее устранения итальянским ученым Кастеллани предло­жен метод специфической адсорбции антител. Сущность его за­ключается в том, что при насыщении иммунной сыворотки гомологической культурой бактерий на них адсорбируются как спе­цифические, так и групповые агглютинины, тогда как насыщение сыворотки гетерологическим штаммом делает возможным удале­ние из нее групповых и сохранение специфических антител.