1. Экспресс-диагностика аденовирусной инфекции: Экспресс диагностика аденовирусной инфекции методом иммунофлюоресценции (ИФ). Принцип метода состоит во взаимодействии антигена и антитела, меченного флюорохромом. Материалом для исследования служат мазки со слизистой. Сухой препарат флуоресцирующего иммуноглобулина разводят в 1 мл дистиллированной воды, затем готовят рабочее разведение в 0,15 м растворе натрия хлорида каплю рабочего флуоресцирующего разведения иммуноглобулина наносят на зафиксируемый материал и инкубируют во влажной камере 30 мин. Окрашенный препарат ополаскивают дистиллированной водой, 2 раза промывают в фосфатно-солевом буфере pH 7,2-7,5. После высушивания препарат покрывают покровным стеклом и наносят не флуоресцирующее иммерсионное масло. На основании увиденного в микроскоп сделать вывод об обнаружении антигенов аденовируса.

2. Серологическая диагностика аденовирусной инфекции в РСК: Провести серологическую диагностику аденовирусной инфекции, учесть результаты РСК. Для исследования берут разведение парных сывороток от 1:8 до 1:128, которые в объеме 0,1 мл вносят в лунки планшета и прибавляют к ним по 0,1 мл антигена и комплемента. Ставят также контроли исследуемых сывороток, антигена, нормальной кроличьей сыворотки, антигена с иммунной сывороткой для проверки специфичности реакции. Планшеты взбалтывают и оставляют на 18 ч. при 4⁰С, потом выдерживают при 18-20⁰С на протяжении 30 мин. и после добавления гемолитической системы ставят в термостат на 15-30 мин. При сравнении показателей содержимого антител в сыворотке в начале и в конце заболевания диагностически значимым считается не менее чем четырехкратное увеличение титра антител. Отметить титр сыворотки в начале и в конце заболевания, сделать вывод о подтверждении или опровержении предыдущего клинического диагноза.

3. Лабораторная диагностика вируса простого герпеса

а) Микроскопический метод.

Отметить в протоколе какой материал используется для выделения вируса простого герпеса.

Микроскопия мазков, окрашенных по Романовскому-Гимзе с целью выявить наличие гигантских много ядерных клеток (проба Цанка). Отметить результат в протоколе.

б) Вирусологическая диагностика простого герпеса. Ознакомиться с принципом вирусологического метода диагностики на примере метода бляшек (негативных колоний). Метод позволяет производить количественное определение вирусов. Монослой клеток заражают вируссодержащим материалом и покрывают слоем агара, содержащего индикатор нейтральный красный. Флаконы инкубируют при t- 37 Через 48-96 часов выявляются пятна-бляшки, они имеют диаметр 1-3 мм и выглядят неокрашенными на розовом фоне. Пятна возникают за счет цитопатического действия. Отметить результаты в протокол.

в) Серологическая диагностика Простого герпеса. Поставить и учесть реакцию гемагглютинации с материалом от больного для индикации вирусов герпеса. РПГА ставят в специальных пластинках с луночками. При использовании ее для серо- диагностики в этих луночках готовят двукратные разведения в физиологическом растворе исследуемой сыворотки, и затем добавляют к ней в качестве диагностикума взвесь сенсибилизированных эритроцитов. Учет результатов проводят через 2 часа по четырех крестной системе. При положительной реакции агглютинировавшие эритроциты оседают на дно луночки и равномерно покрывают его в виде перевернутого зонтика. При отрицательной реакции эритроциты тоже оседают, жидкость становится прозрачной, осадок выглядит в виде маленького диска в центре луночки. Титром сыворотки считается последнее ее разведение, которое дает еще ярка выраженную гемагглютинацию без значительных признаков наличия диска. Результаты занести в протокол.

После ознакомления с теоретическими вопросами и ходом проведения эксперимента Вам предлагается выполнить следующие задания:

1. На прием к врачу пришел мужчина 23 г. с жалобами на пузырьковые высыпания на коже половых органов переходящие в эрозии, заживающие без рубцов. Высыпания сопровождаются зудом, жжением. Какое заболевание предположил врач и какие методы лабораторной диагностики он использует для подтверждения диагноза?

2. В женскую консультацию обратилась женщина 24 г. на 10 нед. беременности, жалоб не предъявляет. При обследовании на ЦМВ был получен положительный результат методом ПЦР. Какой метод лабораторной диагностики порекомендует врач для установления «давности» инфицирования?

3. Больной М. 18 лет жалуется на заложенность носа, боль в горле, глазах, слезотечение, слабость, t-38,5 *, увеличение шейных, околоушных, подчелюстных лимфоузлов. Врач предположил аденовирусную инфекцию. С какими заболеваниями врач должен провести дифференциальную диагностику и какие методы исследования будут использованы для подтверждения диагноза?

Короткие методические указания к работе студентов на практическом занятии.

В начале занятия проверяется входной уровень знаний-умений (проверка выполнения домашнего задания по эталонам ответов). Потом путем тестового контроля проверяется усвоение необходимого теоретического материала; понимание методики проведения опытов выясняется в ходе опрашивания. После этого студенты приступают к практическим задачам, ход выполнения которых контролируется преподавателем. Полученные результаты фиксируются в протоколе (приложение 2), проводится их анализ, делаются выводы, которые высокомерничают в протокол. Для обобщения и систематизации полученных теоретических знаний и практических навыков студенты выполняют учебные задачи, полученные результаты обсуждаются. Занятие завершается подведением итогов самостоятельной и аудиторной работы студентов, оценка студента выводится на основании результатов всех видов работ по обработке данной темы.

Студенты, которые выполнили меньше 50% тестов, или не представили результатов выполнения практических задач получают оценку „2”, т.е. 0 баллов. Оценку „3” (5баллов) студенты получают при выполнении 50-70% тестов и наличия оформленного протокола работы, если они не брали участия в устном опрашивании и обсуждении обучающих задач, или давали ошибочные ответы. Оценку „4” (8 баллов) студенты получают при выполнении не меньше 70% тестов, наличия оформленного протокола работы, если они дают правильный развернутый ответ на один из обсуждаемых вопросов. Оценку „5” (13 баллов) студенты получают при выполнении не меньше 80% тестов, безошибочном выполнении практических задач и оформлении их результатов, а также при условиях активного участия в обсуждении теоретических и практических вопросов.