Для приготовления раствора резорцин-спирта (для измерения фруктозы) необходимо в колбу мерную на 250 мл засыпать 100 г резорцина и добавить 100 мл этилового спирта (96%).

2.2. Подготовка к работе ферментера BioFlo115 (7,5л.)

Стерилизация ферментера

Для подготовки ферментера к стерилизации (рис.5), необходимо:

-произвести помывку ферментера мыльным раствором с ополаскиванием дистиллированной водой;

-залить в ферментёр 1 л фосфатного буфера;

-установить датчик pH (11), место присоединение кабеля закрыть колпачком;

-установить датчик DO (6), место присоединения кабеля закрыть фольгой;

-взять из ремкомплекта ферментера резиновую/силиконовую мембрану, установить в порт технологический (10) и закрепить с помощью шестигранника на 2 мм;

-установить пробоотборник (рис. 6);

-установить воздушные фильтры PTFE 0.2 µm ø73 mm (воздух должен подаваться от направления надписи на фильтре) на систему подачи

(2)и выпуска воздуха (1);

-установить на трипорт подачи питательных сред (8) отрезки шлангов и обернуть фольгой;

-закрыть фольгой гнездо двигателя мешалки;

-закрыть зажимы на пробоотборнике;

-поставить ферментёр в автоклав. Для предотвращения накопления избыточного

давления - гайки ферментёра (14) завинтить не плотно;

-стерилизовать ферментер в автоклаве при давлении 1 атм., температуре 121°С, продолжительности 30 минут, после чего оставить остывать в автоклаве до комнатной температуры;

-извлечь ферментер из автоклава после остывания, предварительно закрутив гайки на крышке ферментера, и установить на рабочую платформу.

21

Рис. 5 – Ферментер перед стерилизацией (1-фильтр системы выпуска воздуха, 2- фильтр системы подачи воздуха, 3-выход воды из холодильника, 4-вход воды в холодильник, 5-штуцер входа и выхода системы охлаждения, 6-датчик DO, 7- термокарман датчика температуры, 8-трипорт подачи питательных сред, 9-гнездо двигателя мешалки, 10-порт технологический, 11-датчик pH, 12-порт загрузочный, 13порт пробоотборника, 14-гайка крепления крышки)

Рис. 6 – Пробоотборник (1-шприц с фильтром, 2-емкость для сбора проб, 3- зажим, 4-штуцер пробоотборника)

22

Сборка ферментера

Для подготовки ферментера к работе (рис. 7, рис. 8), необходимо:

-установить и закрепить в рабочем положении пробоотборник, подсоединить шприц в сборе с фильтром;

-залить 5 мл глицерина в термокарман датчика температуры (рис. 5), вставить датчик температуры в термокарман до упора. Кабель датчика температуры вставить в гнездо «TEMPERATURE» на блоке управления и закрепить;

-подключить и закрепить кабель к датчику pH и гнезду рН на блоке управления ферментера;

-подключить и закрепить кабель к датчику DO и гнезду DO на блоке управления ферментера;

-установить и закрепить нагревательную рубашку на емкости ферментера, кабель подключить в гнездо «HEATER»;

-установить двигатель мешалки в гнездо на крышке ферментера и подключить кабель в гнездо «MOTOR»;

-подключить шланг подачи воздуха с блока управления (гнездо «SPARGE») к фильтру подачи воздуха (поз. 2, рис. 5);

-подключить шланги с блока управления подачи/отвода воды системы охлаждения (гнезда «COOL LOOP IN» и «COOL LOOP RETURN») к штуцерам системы охлаждения (поз. 5, рис. 5), положение шлангов значения не имеет;

-подключить шланг блока управления подачи воды в холодильник («EXH. COND. IN» поз. 4, рис. 8) к нижнему штуцеру холодильника системы выпуска воздуха (поз. 4, рис. 5), а шланг отвода воды из холодильника («EXH. COND. RETURN», поз. 5, рис. 8) к верхнему штуцеру (поз. 3, рис. 5).

23

Рис. 7 – Ферментер в сборе (1-нагревательная рубашка, 2-пробоотборник, 3- датчик DO, 4-холодильник системы выпуска воздуха, 5-двигатель мешалки, 6-блок управления ферментером, 7-панель управления, 8-датчик рН, 9-расходомеры газов, 10перистальтические насосы)

24

Рис. 8 – Боковая панель блока управления ферментером (1-«SPARGE», гнездо подачи газа в ферментер, 2-«DO», гнездо датчика DO, 3-«MOTOR», гнездо подключения двигателя мешалки, 4-«EXH. COND. IN», шланг подачи воды в холодильник, 5-«EXH. COND. RETURN», шланг отвода воды из холодильника, 6- «COOL LOOP IN», шланг подачи воды в систему охлаждения, 7-«COOL LOOP RETURN», шланг отвода воды из системы охлаждения, 8-«HEATER», гнездо подключения нагревательной рубашки, 9-«TEMPERATURE», гнездо подключения датчика температуры, 10-«pH», гнездо подключения pH-метра)

Подготовка рабочей платформы

Для удобства пользования ферментерами и ведения процесса биосинтеза, разработана и используется передвижная рабочая платформа на которой установлены два ферментера BioFlo115, объемом 7,5 л и 14 л. Подключение платформы позволяет вести культивирование как на одном из указанных ферментеров, так и на обоих сразу. Для подготовки к работе рабочей платформы необходимо:

-установить платформу на место подключения воды, канализации, сжатого воздуха, электричества. Закрепить платформу фиксаторами на колесах;

-подключить вилку (поз. 2, рис. 9) в розетку (поз. 5, рис. 10). При необходимости, в электрическом щитке включить автомат «CIP»;

25

-открыть клапан подачи воздуха в ферментер (поз. 8, рис. 10). Регулятором (поз. 9, рис. 10) выставить давление 0,2 МПа по манометру (поз. 7, рис. 10). Закрыть клапан подачи воздуха. Подключить шланг подачи воздуха (поз. 3, рис. 9) к быстросъемному соединению (поз. 6, рис. 10). Перед открытием клапана подачи воздуха, убедиться, что вентили расходомеров газов на блоке управления (поз. 9, рис. 7) закрыты;

-подключить шланг канализации (поз. 6, рис. 9) к канализационному коллектору (поз. 1, рис. 10), открыть кран канализации (поз. 2, рис. 10);

-подключить шланг подачи воды (поз. 4, рис. 9) к штуцеру (поз. 3,

рис. 10).

Рис. 9 – Задняя панель рабочей платформы ферментеров – (1-регулятор давления, 2-вилка, 3-шланг подачи воздуха, 4-шланг подачи воды, 5-кран подачи воды на платформу, 6-шланг канализации)

26

Рис. 10 – (1-коллектор канализации, 2-кран канализации, 3-штуцер подачи воды, 4-кран подачи воды, 5-розетка, 6-быстросъемное соединение, 7-манометр подачи воздуха, 8-клапан подачи воздуха, 9-регулятор подачи воздуха)

Включение ферментера

Перед включением ферментера в работу, необходимо произвести помывку, стерилизацию, подготовку к работе ферментера, а также подключить рабочую платформу. Для включения ферментера и калибровки датчика DO необходимо:

-включить тумблер на боковой панели блока управления ферментера;

-перевести все контролируемые параметры (поз. 2, рис. 11) в режим «Off» (поз. 6, рис. 11), для чего необходимо зайти на панели в каждый параметр и в открывшемся окне («Agit», «Temp», «DO») нажать кнопку

«Off» (рис. 14);

-открыть на 1/5 кран штуцера подачи воды (поз. 4, рис. 10), затем полностью открыть кран подачи воды на платформе (поз. 5, рис. 9);

-проверить герметичность шлангов с водой.

27

Рис. 11 – Панель управление ферментера (1-нижняя панель управления («Summary» главный экран управления, «Calibraion» меню калибровки, «Cascade» меню управления каскадом, «Pumps» меню управления перистальтическими насосами, «Setup»-меню настроек), 2-контролируемые параметры («Agit»-вращение мешалки, «Temp»- температура культивирования, «pH»-кислотность, «DO»-растворенный кислород.), 3-текущее значение, 4-установленное значение, 5-процент управляющего параметра, 6-режим, 7-единица измерения)

Подключение системы подачи питательных растворов

Для подключения к ферментеру банок с подпитками через перистальтические насосы (до 3-х банок с растворами) и проведения калибровки подачи растворов в условиях стерильности, необходимо:

-проверить направление вращение соответствующего перистальтического насоса (поз. 10, рис. 7), удерживая кнопку «Prime» в окне «Pumps» (поз. 6, рис. 12). Учитывать направление вращения для правильного подключения подпиток;

-взять из ламинарного шкафа банку для подпиток с питательной средой в сборе с закрытым фольгой шлангом для малолитражных ферментеров;

-установить банку для подпиток на рабочую платформу, затем шланг подключить к перистальтическому насосу (поз. 10, рис. 7);

28

-стерильно (с помощью ваты, смоченной спиртом) закрыть конец шланга и, удерживая кнопку «Prime» в окне «Pumps», прокачать питательный раствор через систему до полного заполнения шланга. Излишки питательного раствора собрать в емкость;

-выбрать в окне «Pumps» кнопку «Calibrate» (поз. 7, рис. 12), затем в открывшимся окне «Calibrate» (рис. 13) выбрать время калибровки (15, 30 или 60 секунд) и нажать кнопку «Start». Подачу питательного раствора необходимо производить стерильно в мерный цилиндр (25 мл). По истечении выбранного времени калибровки, ввести в окно «AmountPumped» (поз. 4, рис. 13) количество набранного в цилиндр раствора и нажать кнопку «Set» (поз. 5, рис. 13);

-сбросить значение поданного объёма раствора (поз. 8, рис. 12)

кнопкой «Reset»;

-стерильно (с помощью ваты, смоченной спиртом) удерживая шланг банки, снять одну заглушку с трипорта (поз. 8, рис. 5) и установить шланг на штуцер трипорта.

Таким образом, для обеспечения питания бактерий необходимо соблюдать стерильность при операциях подключения и калибровки системы подачи растворов, чтобы исключить контаминацию и получить точные данные о потреблении питательных растворов.

Рис. 12 – Окно управления перистальтическими насосами (1-номер насоса, 2- установленное значение, 3-текущее значение, 4-включение насоса, 5-выключение насоса, 6-ручная прокачка насоса, 7-калибровка перистальтического насоса, 8- поданный объём раствора, 9-сброс значения «Total», 10-периодичность работы насоса)

29

Рис. 13 – Калибровка перистальтического раствора (1-время калибровки перистальтического насоса, 2-запуск калибровки, 3-отмена калибровки, 4-панель для ввода значения вылитого раствора, 5-установка введенных данных)

Внесение инокулята в ферментер

Основным требованием к данной процедуре является соблюдение стерильности. Для обеспечения стерильного вноса инокулята в ферментер необходимо:

-создать избыточное давление воздуха в ферментёре, для чего вентиль расходомера (поз. 9, рис. 7) открыть против часовой стрелки до показания расходомера 3;

-включить ротор мешалки кнопкой «Auto» в меню «Agit»;

-открыть загрузочный порт и положить вокруг его отверстия вату смоченную спиртом;

-под пламенем спиртовки вставить в отверстие загрузочного порта стерильную стеклянную воронку;

-под пламенем спиртовки внести инокулят в ферментер, предварительно колбы с инокулятом аккуратно взболтать для смыва культуры со дна колбы;

-достать воронку и вату из загрузочного порта, под пламенем спиртовки прожечь крышку загрузочного порта и закрыть его.

Ведение процесса биосинтеза

Для обеспечения оптимальной скорости роста культуры необходимо поддерживать следующие параметры процесса – температура 30˚С, количество растворенного кислорода (DO) 30%, для этого:

-в меню «Cascade» (поз. 1, рис 11) выбрать «Agit»;

-в параметрах «Agit» (поз. 2, рис. 11) нажать кнопку «Auto» (поз. 2,

рис. 14);

30

-в параметрах «Temp» (поз. 2, рис 11) ввести значение 30 и нажать кнопку «Auto»;

-в параметрах «DO» (поз. 2, рис. 11) ввести значение 30 и нажать кнопку «Auto», автоматически включится мешалка.

Рис. 14 – Окно управления мешалкой (1-отключение мешалки, 2-включение мешалки, 3-окно ввода оборотов мешалки, 4-окна установки минимального и максимального предела оборотов мешалки)

Также, для обеспечения оптимальной скорости роста культуры, необходимо поддерживать концентрацию глюкозы (фруктозы) в диапазоне 2-5 г/л, азота (мочевины) в диапазоне 1-2 г/л, для чего необходимо регулярно (1 раз в час) отбирать пробу для проведения анализов. Во время анализов определяется оптическая плотность культуры, содержание в культуре глюкозы (фруктозы) и азота (мочевины). По результатам анализа количества субстратов (глюкоза, мочевина) принимается решение об увеличении или уменьшении (отключении) скорости подачи субстрата с помощью перистальтических насосов (поз. 2, рис. 12).

Дополнительно, через каждые 5 часов с начала культивирования отбирается дополнительная проба в флакон на 50 мл для определения концентрации биомассы, содержания ПГА и микроэлементов.

31

Отбор пробы

Для отбора пробы (рис. 6) необходимо:

-подсоединить емкость для сбора пробы;

-открыть зажим перед шприцом и шприцом создать вакуум в емкости для сбора пробы;

-открыть зажим возле штуцера пробоотборника;

-после наполнения емкости, закрыть зажим возле штуцера пробоотборника, затем закрыть зажим перед шприцом;

-отсоединить емкость для сбора пробы от пробоотборника.

Определение оптической плотности

Для определения оптической плотности необходимо:

-1 мл пробы развести 5 мл дистиллированной воды и перемешать;

-разведенную пробу залить в кювету на 1 мм и измерять в фотометре «КФК-3». В качестве контроля использовать дистиллированную воду. Измерения проводить при длине волны в 440 нм.

При достижении результатов измерения плотности 1:5 больше чем 1,2-1,4 необходимо перейти на измерение плотности 1:20, для этого:

-0,5 мл пробы залить 10 мл дистиллированной воды и перемешать;

-контроль, кюветы и длинна волны измерения не изменяются.

При результате измерения более чем 1,4 перейти на измерение 1:50 и

далее 1:100.

Измерение концентрации азота

-1 мл пробы залить 10 мл дистиллированной воды;

-добавить 1-2 капли 33% KOH и 0,5 мл реактива Нестлера;

-результат наблюдать по цветовой реакции.

Измерение концентрации глюкозы

Для измерения концентрации глюкозы необходимо:

-в 2-мл центрифужный стакан внести пробу и открутить на центрифуге «Hanil Micro-6» до полного осаждения пробы;

-к 1 мл надосадочной жидкости добавить 4 мл дистиллированной воды и взболтать;

-взять 3 пробирки и внести поочерёдно по 40 мкл, в первую пробирку - дистиллированную воду; во вторую пробирку - калибратор из

32

набора «Глюкоза - ФКД»; в третью пробирку - разведённую надосадочную жидкость;

-во все 3 пробирки добавить 2 мл ферментно-хромогенной смеси и оставить на 25 минут. Через 5-10 минут после добавления ФХС взболтать пробирки;

-измерение проводить через оптическую плотность с использованием фотометра «КФК-3», кюветы на 5 мм, длинной волны 490 нм, контроль - первая пробирка (ФХС+дист. вода);

-рассчитать результат по формуле (1)

где Кгл – концентрация глюкозы; О.П.пробы и О.П.калибратора – оптическая плотность пробы и калибратора соответственно.

Измерение концентрации фруктозы

Для измерения фруктозы необходимо:

-в 2-мл центрифужный стакан внести пробу и открутить на центрифуге «Hanil Micro-6» до полного осаждения пробы;

-0,5 мл надосадочной жидкости внести в 50 мл дистиллированной воды и смешать;

-1 мл разбавленной пробы внести в пробирку;

-в другую пробирку налить 1 мл дистиллированной воды (контроль);

-внести в обе пробирки 1 мл раствора «Резорцин - спирт» и 3 мл раствора 5 HCl : 1 Н2О;

-пробирки поставить на водяную баню (80˚С) на 20 минут;

-результат измерить через оптическую плотность на фотометре «КФК-3», используя кюветы на 5 мм и длину волны 540 нм. Концентрацию фруктозы определить по графику.

Определение концентрации биомассы

Для определения концентрации биомассы необходимо:

-обеспечить во флаконах по 25 мл пробы (по метке);

-центрифугировать флаконы на центрифуге «Hanil Combi 514R» 10 мин при 8000 об/мин;

-после центрифугирования надосадочную жидкость слить во флаконы на 15 мл (для дальнейшего анализа), оставшуюся надосадочную жидкость слить в раковину;

33

-залить во флаконы с биомассой дистиллированную воду до метки 20 мл и встряхиваниями взболтать осажденную биомассу, затем центрифугировать на центрифуге «Hanil Combi 514R» 10 мин при 8000 об/мин;

-надосадочную жидкость слить в раковину, залить во флаконы с биомассой дистиллированную воду до метки 20 мл, встряхиваниями взболтать осажденную биомассу, затем центрифугировать флаконы на центрифуге «Hanil Combi 514R» 10 мин при 8000 об/мин;

-надосадочную жидкость слить в раковину, залить во флакон 5 мл дистиллированной воды, встряхиваниями взболтать осажденную биомассу, перенести в заранее взвешенный стеклянный стакан для взвешивания с крышкой и поставить в сушильный шкаф на 1 сутки при 105˚С;

-перенести стеклянный стакан для взвешивания в эксикатор до полного остывания;

-закрыть крышку стакана и взвесить на весах;

-рассчитать концентрацию биомассы по формуле (2)

пробы

где X – концентрация биомассы (г/л), a – масса сухого стакана для взвешивания (г); b – масса стакана с высушенной биомассой (г); Vпробы – объём осаждаемой пробы (мл);

- поместить биомассу в бумажный конверт для дальнейшего измерения содержания ПГА.

Определение содержания ПГА

Определение содержания ПГА в биомассе производится на газовом хроматографе. Для подготовки проб к исследованию на хроматографе, необходимо:

-20 мг биомассы перенести в сердцевидную колбу;

-залить 3 мл внутреннего стандарта, 2,55 мл метанола и 0,45 мл концентрированной серной кислоты;

-поставить на водяную баню с обратным холодильником на 5 часов;

-по истечению 5 часов снять колбы и залить 3 мл дистиллированной

воды;

-по осаждению биомассы в сердцевидной колбе, перенести пробу в делительную воронку, предварительно закрыв кран воронки;

34

-залить в сердцевидную колбу 0,5 мл хлороформа и перенести в делительную воронку для полного переноса пробы;

-залить в делительную воронку дистиллированную воду (15 мл) и тщательно взболтать, предварительно закрыв конус крышкой;

-подождать, пока хлороформная часть осядет, и перенести её в следующую делительную воронку;

-залить в делительную воронку дистиллированную воду (15 мл) и тщательно взболтать, предварительно закрыв конус крышкой;

-подождать, пока хлороформная часть осядет, и перенести её в чистую сердцевидную колбу через воронку, заполненную сернокислым натрием (носик воронки затыкается ватой и сверху засыпается сернокислым натрием).

Остановка и помывка ферментера

Для остановки ферментера необходимо:

-перевести все контролируемые параметры (рис. 11) в режим «Off», для чего необходимо зайти на панели в каждый параметр и в открывшемся окне («Agit», «Temp», «DO») нажать кнопку «Off»;

-отключить тумблер на боковой панели блока управления ферментера;

-закрыть клапан подачи воздуха в ферментер (поз. 8, рис. 10), отсоединить шланг подачи воздуха (рис. 9) и закрепить шланг на рабочей платформе;

-закрыть кран штуцера подачи воды (поз. 4, рис. 10), затем закрыть кран подачи воды на платформу (поз. 5, рис. 9);

-отсоединить шланг канализации (поз. 6, рис. 10) от канализационного коллектора (поз. 1, рис. 10), закрыть кран канализации (поз. 2, рис. 10) и закрепить шланг на рабочей платформе;

-отсоединить шланг подачи воды (поз. 4, рис. 9) от штуцера (поз. 3, рис. 10) и закрепить шланг на рабочей платформе;

-отключить вилку (поз. 2, рис. 9) от розетки (поз. 5, рис. 10) и закрепить провод на рабочей платформе. В электрическом щитке отключить автомат «CIP».

Для помывки ферментера перед стерилизацией/после культивирования, необходимо:

-убедиться, что подача воздуха и воды отключена, блок управления выключен;

35

-отсоединить шланги с порта подачи питательных сред, системы охлаждения ферментера и системы охлаждения выпуска воздуха;

-отсоединить от ферментера двигатель мешалки, нагревательную рубашку, датчик температуры, кабели датчиков DO и pH;

-перенести ферментер для помывки в комнату средоподготовки;

-вытащить датчик pH, помыть его мыльным раствором, ополоснуть дистиллированной водой, протереть сухой салфеткой и надеть на стеклянную часть резиновый колпачок с буфером (5 н. KCl), на место присоединения кабеля – крышку;

-вытащить датчик DO, помыть его мыльным раствором, ополоснуть дистиллированной водой, протереть сухой салфеткой и надеть крышки на концы датчика;

-отвинтить гайки крепления крышки ферментёра, снять крышку, и помыть мыльным раствором. Промыть мыльным раствором штуцера подачи воздуха и питательных сред. Ополоснуть крышку дистиллированной водой и убрать;

-из емкости ферментера вынуть дефлектор, вымыть его мыльным раствором и ополоснуть дистиллированной водой;

-снять емкость ферментёра с подставки и помыть губкой с мыльным раствором, затем ополоснуть дистиллированной водой;

-после помывки собрать ферментёр (вставить дефлектор и закрыть крышкой) и установить на платформу.

Калибровка датчика pH

Датчик pH калибруется по двум буферным растворам с известной величиной pH (4,00 и 7,00). При калибровке датчика требуется, чтобы электрод был погружен в раствор и не касался стенок емкости.

Для калибровки датчика pH необходимо:

-установить лабораторный штатив на рабочей платформе ферментеров;

-закрепить датчик pH на лабораторном штативе и, сняв с электрода колпачок с буфером, поместить в емкость с чистой водой, чтобы электрод не касался стенок или дна емкости;

-подключить кабель к датчику и к гнезду pH на блоке управления

(рис. 8);

-подключить рабочую платформу к электросети (рис. 9, рис. 10);

36

-включить тумблер на боковой панели блока управления ферментера

иоставить ферментер включенным на 6 часов для поляризации датчика;

-на панели управления (рис. 11) открыть окно калибровки

«CALIBRATION» и выбрать параметр «pH» (рис. 15);

-налить в стеклянный стакан буфер с величиной pH = 4,00 и, протерев датчик салфеткой, опустить в буфер;

-через 5 минут в поле «SetZero» ввести значение 4,00 и нажать кнопку «SetZero»;

-вынуть электрод из буфера, ополоснуть его дистиллированной водой, протереть и поставить в буфер с pH = 7,00 на 5 минут;

-через 5 минут установить в поле «SetSpan» значение буфера (7,00) и нажать на кнопку «SetSpan»;

-процедуру необходимо выполнить 4-5 раз для установления точного значения;

-отключить кабель от датчика и блока управления, установить колпачок с буфером и убрать;

-отключить блок управления тумблером и электропитание рабочей платформы.

Рис.15 – Окно калибровки датчика pH

Калибровка датчика DO

На количество растворенного в воде кислорода оказывает влияние давление и температура в ферментере, состав буферного раствора, а также его состояние до и после стерилизации. Поэтому калибровка датчика DO проводится в условиях, максимально приближенных к процессу культивирования, для этого необходимо:

37

-залить 1 л буферного раствора;

-стерилизовать и подготовить ферментер, рабочую платформу к работе (см. «стерилизация ферментёра», «подготовка ферментера», «подготовка рабочей платформы», «включение ферментера») без датчика pH, его порт закрыть крышкой;

Калибровка нуля:

-зайти в экран калибровки «CALIBRATION» и выбрать параметр

DO (рис. 16);

-отключить датчик от источника питания, ввести 0 в поле ввода «SetZero» и далее нажать на соответствующую кнопку. После подключить датчик к питанию;

Примечание: При данном методе, убедитесь, что датчик не был отключён не более, чем на 2 минуты

Установка максимального диапазона:

-закрыть все возможные выходы воздуха, кроме фильтра системы выпуска воздуха (поз. 1, рис 5);

-на панели управления (поз. 2, рис 11) открыть «Agit» и установить скорость вращения 50 об/мин (RPM), режим перемешивания «AUTO» (рис. 14);

-усиленно продувать сосуд воздухом, пока значение DO не будет стабильным на протяжении 10 минут (примерно 30 минут продувки).

-в экране калибровки («CALIBRATION») выбрать «DO», установить в поле «SetSpan» значение 100 и нажать на соответствующую кнопку.

Рис. 16 – Окно калибровки датчика DO

38