- •ВВЕДЕНИЕ
- •1.1. Используемое сырье и материалы
- •1.2. Сведения о применяемом оборудовании
- •1.3. Содержание технологического процесса
- •1.3.1. Подготовка технологических сред
- •1.3.1.1. Получение сжатого воздуха
- •1.3.1.2. Получение воды очищенной
- •1.3.1.3 Подготовка питательных растворов
- •1.3.1.4. Паровая стерилизация в автоклаве MLS 3781L
- •1.3.2. Получение посевного материала
- •2. БИОСИНТЕЗ БАКТЕРИЙ В ФЕРМЕНТЕРЕ BIOFLO (7,5 л.)
- •2.1. Подготовка сырья, материалов и оборудования к биосинтезу бактерий Cupriavidus eutrophus В10646
- •2.2. Подготовка к работе ферментера BioFlo115 (7,5л.)
- •3. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСНОВНЫХ КИНЕТИЧЕСКИХ ПАРАМЕТРОВ МИКРОБНОГО БИОСИНТЕЗА
- •3.2. Удельная скорость роста микроорганизмов
- •3.3. Время удвоения биомассы
- •3.4. Экономический коэффициент
- •СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1.3. Содержание технологического процесса
1.3.1. Подготовка технологических сред
1.3.1.1. Получение сжатого воздуха
Воздух используется как источник кислорода в процессах ферментации. Воздух подаётся компрессором СБ4/Ф-150.OL150II давлением 0,8 МПа по трубопроводу условным диаметром 20 мм, материал полипропилен.
Подготовка компрессора к работе Перед началом работы компрессора необходимо проверить:
-наличие визуальных повреждений;
-правильность подключения к питающей сети и заземлению;
-целостность и надёжность крепления защитного ограждения клиноременной передачи;
-надёжность крепления опор компрессора;
-целостность и исправность предохранительного клапана, органов управления и контроля.
Начало и завершение работы Пуск и останов компрессора должны производиться только
выключателем на прессостате. После пуска компрессора, по мере расхода воздуха потребителем, реле давления прессостата автоматически выключает и включает его, поддерживая давление сжатого воздуха в ресивере.
При эксплуатации ресивера необходимо:
-правильно использовать ресивер в пределах давления и температуры, указанных на табличке технических данных заводаизготовителя;
-постоянно контролировать исправность и эффективность устройств защиты и контроля (прессостат, предохранительный клапан, манометры);
-по окончании работы полностью выпускать воздух из ресивера;
-сливать конденсат.
При эксплуатации ресивера необходимо соблюдать требования "Правил устройства и безопасной эксплуатации сосудов, работающих под давлением".
8
При эксплуатации компрессора должны соблюдаться "Общие правила пожарной безопасности для промышленных предприятий", а также проводиться своевременное техническое обслуживание.
1.3.1.2. Получение воды очищенной
Для получения воды очищенной и дальнейшего ее асептического хранения используется установка arium® comfort I и arium® bagtank «Sartorius Weighing Technology» (Германия). Для разбора очищенной воды необходимо на дисплее установки:
-включить установку кнопкой «Включение»;
-нажать кнопку «Меню»;
-с помощью кнопок «Вверх, Вниз, Вправо» выбрать необходимый объем разбора очищенной воды и нажать кнопку «Старт».
После окончания заданного разбора очищенной воды, установка выключится автоматически.
1.3.1.3Подготовка питательных растворов
В качестве минеральной среды используется смесь из четырёх маточных растворов: А, Б, В, Г (таблица 3). Растворы готовятся из расчёта на производственную программу.
Таблица 3 – Состав питательных сред
Раствор |
Компонент |
Концентрация, г/л |
|
А |
Na2HPO4×12H2O |
9,0 |
|
KH2PO4 |
1,5 |
||
|
|||
Б |
MgSO4×7H2O |
0,2 |
|
В |
С6Н5О7Fe×H2O |
5,0 |
|
|
H3BO3 |
0,228 |
|
|
COCl2×6 H2O |
0,03 |
|
|
CuSO4×5H2O |
0,008 |
|
Г |
MnCl2×4H2O |
0,008 |
|
|
ZnSO4×7H2O |
0,176 |
|
|
NaMoO4×H2O |
0,05 |
|
|
NiCl2 |
0,008 |
|
Карбамид |
(NH2)2CO |
20 |
|
Глюкоза |
C H O |
250 |
|
|
9 |
|
Раствор А – расчётное количество фосфорнокислого калия и фосфорнокислого натрия растворяют в дистиллированной воде при перемешивании.
Раствор Б – навеску сульфата магния растворяют в дистиллированной воде, после растворения доводят водой до метки.
Раствор В – навеску железа лимоннокислого вносят в мерный стакан, заливают дистиллированной водой и кипятят до полного растворения. Затем раствор переносят в мерную колбу и доводят водой до метки.
Раствор Г – в мерную колбу объёмом 2 л вносят поочередно навески солей, доводят до метки дистиллированной водой и перемешивают до полного растворения. Хранят в холодильнике.
Раствор карбамида – расчётное количество карбамида растворяют в дистиллированной воде.
Раствор глюкозы – расчётное количество глюкозы растворяют в дистиллированной воде при перемешивании.
Раствор хлорида натрия (2,5 %) – навеску 2,5 г помещают в мерную колбу на 50 мл и доводят до метки дистиллированной водой.
Пептонный агар – 10 г агара, 5 г пептона, 5 мл раствора хлорида натрия (2,5 %), заливают 0,5 л водопроводной водой, закрывают ватномарлевыми пробками, стерилизуют при 1 атм., 121 °С, 30 мин. Стерильный агар разогревают в микроволновой печи до полного расплавления, оставляют при комнатной температуре на 20 минут и затем наливают по 15 мл в стерильные пробирки, дают испариться конденсату.
Растворы: карбамида; А; Б; В; Г; стерилизуются при температуре плюс 120 °С, давлении 1 атм. в течение 45 минут. Для стерилизации лабораторной посуды, инструментария и материалов используется стерилизатор паровой MLS 3781L.
Раствор глюкозы, насосом ISM 1020A, прокачивают через стерильный фильтр Millipore Express SHC со скоростью не более 5 л/мин в стерильный бутыль.
Работу со стерильными растворами и посудой проводят только в асептических условиях в ламинарном шкафу MB 602WSL. Перед работой ламинарный шкаф в течение 15 минут следует обработать ультрафиолетом.
При подготовке среды для ферментации (полная среда Шлегеля) к одному литру раствора A следует добавить 5 мл раствора Б, 3 мл раствора В, 10 мл раствора Г.
10