78. Оборудование для культивирования вирусов

Термостат, Среда-199 (питание клеток), центрифуга (разделение фракций после трипсинизации (раздления клеток)), пробирки, матрасы (4х стенные футляры), чашки Петри, шприц (для куриного эмбриона), световой микроскоп.

78. Клеточные культуры: получение, классификация, методы культивирования, питательные среды.

Приготовление первичной культуры:

1. измельчение ткани

2. разъединение клеток трипсином

3. отмывание изотоническим раствором NaCl

4. суспендирование клеток в питательной среде

5. рост клеток

6. заражение вирусом

7. индикация (ЦПД, Гемагглютинация, гемадсорбция)

Используют культуры клеток, куриные эмбрионы и чувствительных лабораторных животных.

Куриный эмбрион заражают в аллантоисную и амниотическую полости, на хорион-аллантоисную оболочку, предварительно проделав в скорлупе отверстие, а после заражения заделав его воском или парафином.

Заражение животных лучше по сравнению с другими методами тем, что некоторые вирусы могут культивироваться только в первых.

78. Принципы индикации и идентификации вирусов.

ЦПД – цитопатическое действие – смотрим в светомикроскоп на изменение морфологии клеток (слияние с образованием синцития, сморщивание, агрегация). Часть клеток погибает и отслаивается от стенок пробирки. Остаются клеточные островки.

По включениям – в ядре или ЦП (результат дизьюнктивного размножения вирусов).

Реакция гемагглютинации (вирус склеивает соседние эритроциты с собой) и гемадсорбции (приклеивание эритроцитов к поверхности пораженных клеток за счет гемагглютинина).

78. Какие свойства вирусов используют для их индикации?

Наличие гемагглютинина, наличие F-белков(fusion-слияние), лизирование вирисом клеток, дизьюнктивное размножение…

78. Какие свойства вирусов используют для их идентификации? Линк-1, линк-2

В зараженных клеточных культурах вирусы можно обнаружить по изменению морфологии клеток, цитопатическому действию, которое может иметь специфический характер, появлению включений, путем определения вирусных антигенов в клетке и в культуральной жидкости; установления биологических свойств вирусного потомства в культуральной жидкости и титрования вирусов в культуре ткани, куриных эмбрионах или на чувствительных животных; путем выявления отдельных вирусных нуклеиновых кислот в клетках методом молекулярной гибридизации или скоплений нуклеиновых кислот цитохимическим методом с помощью люминесцентной микроскопии.