1.Принципы хроматографии — явления на границе фаз.

Хроматография основана на следующем:

еcли две фазы находятся в контакте друг с другом, причем одна из них или обе содержат растворенное вещество, это вещество будет распределяться между двумя фазами. Этот процесс именуется распределением и количественно описывается коэффициентом распределения, представляющим собой отношение концентраций растворенного вещества в каждой из двух фаз.

Адсорбция — процесс концентрирования вещества из объёма фаз на границе их раздела.

Поглощаемое вещество, еще находящееся в объеме фазы, называют адсорбтив, поглощенное — адсорбат. В более узком смысле под адсорбцией часто понимают поглощение примеси из газа или жидкости твердым веществом — адсорбентом. Процесс, обратный адсорбции, то есть перенос вещества с поверхности раздела фаз в объем фазы, называется десорбция.

И адсорбция и десорбция происходят одновременно. Только скорости у них разные.

Адсорбционные силы. Не существует особых сил, вызывающих адсорбцию. Адсорбция молекул на поверхности твердого тела происходит за счет сил притяжения со стороны поверхностных частиц. Атомы, молекулы или ионы на поверхности адсорбента находятся в ином окружении, чем внутри объемной фазы, поскольку по крайней мере с одной стороны у них нет соседей. Газ можно представить как множество молекул, движущихся свободно по всем направлениям. Если в сосуд, в котором находится газ, поместить адсорбент, то во время своего движения часть молекул может удариться о поверхность адсорбента и остаться на ней на некоторое время. Продолжительность пребывания молекул на поверхности и величина адсорбции зависят от таких факторов, как природа поверхности и самой молекулы, а также температура и число молекул, ударяющихся о поверхность (пропорционально давлению газа). В случае тонкодисперсного или пористого твердого тела влияние поверхности может быть весьма значительным.

Кроме Адсорбции существует еще Абсорбция.

Если Адсорбция происходит на самой поверхности раздела, где адсорбированное вещество и остается, то при Абсорбции абсорбированное вещество уходит вглубь абсорбента.

2. Детекторы в жидкостной хроматографии.

ДЕТЕКТОРЫ ХРОМАТОГРАФИЧЕСКИЕ (лат. detector -тот, кто раскрывает, обнаруживает), устройства для количеств. И качественного определения в-в разделяемой смеси в потоке подвижной фазы на выходе из хромато графической колонки. В ВЭЖХ используют следующие два основных принципа детектирования.

• Измерение какого-либо общего свойства подвижной фазы, например, по­казателя преломления или электропроводности. Этот способ детектирова­ния является неселективным и потому универсальным.

• Измерение какого-либо специфического свойства разделяемых веществ

светопоглощения в УФ-области, интенсивность флуоресценции или сила тока при электролизе вещества на рабочем электроде.

Наряду с одноволновыми применяют и многоволновые детекторы — сканиру­ющие (с призменными или решеточными монохроматорами) и многоканальные. В многоканальных детекторах регистрацию осуществляют с помощью массива фотодиодов — диодной линейки (рис. 3.84). Информацию представляют в виде трехмерной диаграммы или проекции ее сечений-горизонталей (линий равной высоты) как зависимость светопоглощения от двух параметров — времени элю- ирования и длины волны (рис. 5.25). Представление хроматограммы в виде линий горизонтальных сечений очень удобно для выбора оптимальной длины волны де­тектирования.

Фотометрическое детектирование

Для измерения светопоглощения подвижной фазы на выходе из колонки исполь­зуют проточные фотометрические кюветы (ячейки) Z-образной формы (рис. 5.24). Для предотвращения размывания хроматографических пиков объем ячейки ста­раются сделать как можно меньше — 1-10 мкл. Длина оптического пути ячейки составляет от 2 до 10 мм. При измерениях в УФ-области оптические окна кюве­ты необходимо изготавливать из кварца.

Флуоресцентные детекторы

Использование флуоресцентного способа позволяет повысить чув­ствительность детектирования приблизительно в 1000 раз по сравнению с фо­тометрическим. В качестве источника возбуждения флуоресценции чаще всего применяют ртутную лампу (в приборах высокого класса — ксеноновую лампу высокого давления). Для выбора длин волн возбуждения и регистрации исполь­зуют светофильтры. Возможна и регистрация всего спектра флуоресценции в целом при помощи спектрофлуориметра. Для определения многих природных соединений, лекарственных препаратов и других физиологически активных ве­ществ можно использовать их собственную флуоресценцию. Для детектирования не флуоресцирующих веществ их химическим путем превращают во флуоресци­рующие.