6. Биуретовая реакция белков

Материалы и оборудование: растворы белков – желатина, яичного альбумина, молочного альбумина, лейкозина, 17,15% (насыщенный) раствор сульфата меди, 2н раствор NaOH, пробирки, штативы для пробирок, пипетки, резиновые груши.

ХОД ОПЫТА

К 1 - 2 мл раствора белка добавляют равный объем кон­центрированного раствора щелочи и затем 1-2 капли (не больше!) раствора сульфата меди. Жидкость окрашивается в ярко-фиолето­вый цвет.

ОБЪЯСНЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ОПЫТА

Биуретовая реакция обнаруживает наличие в молекуле бел­ка пептидных групп —СО—NН—. Продукты распада белка - полипептиды так­же дают биуретовую реакцию, причем цвет образующихся медных комплексов определяется числом аминокислот, связанных пептидной связью. Дипептиды дают синюю окраску, трипептиды - фиолетовую, а тетрапептиды и более сложные пептиды - красную.

Некоторые другие атомные группы, например —СS—NH—, —СН—NН—, при накоплении их в молекуле также могут обусловить положительную биуре­товую реакцию. При ее проведении следует избегать избытка медной соли, так как образующаяся в этом случае синяя гидроокись меди (II) маскирует появление фиолетовой окраски.

7. Ксантопротеиновая реакция белков

Материалы и оборудование: растворы белков – яичного альбумина, молочного альбумина, лейкозина, концентрированная азотная кислота, 2н раствор NaOH, пробирки, штативы для пробирок, пипетки, резиновые груши, спиртовки, пробиркодержатели.

ХОД ОПЫТА

К 1 мл раствора белка добавляют 0,3 мл концентрирован­ной азотной кислоты; появляется белый осадок или раствор мут­неет. Затем нагревают смесь на спиртовке до кипе­ния и кипятят ее 1 мин; при этом раствор и осадок окрашива­ется в ярко-желтый цвет. При кипячении осадок может частично или полностью раствориться в результате гидролиза, но характер­ная желтая окраска раствора сохраняется. Охладив смесь, осто­рожно, по каплям, добавляют к кислой жидкости избыток (1,5 мл) 2н раствора NaOH. Выпадает осадок кислотного альбумината, образующий с избытком щелочи ярко-оранжевый раствор.

ОБЪЯСНЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ОПЫТА

Ксантопротеиновая реакция обнаруживает наличие в белке одиночных или конденсированных ароматических ядер, т. е. остатков таких аминокислот, как фенилаланин, тирозин, триптофан. Желтое окрашивание появляется в результате нит­рования этих ядер азотной кислотой и образования полинитросоединений. Пе­реход в щелочной среде желтой окраски подобных веществ в оранжевую обу­словлен образованием более интенсивно окрашенных анионов. Вместо едкой щелочи можно применять водный аммиак.

Кислотные альбуминаты, образующиеся при энергичном действии кислот на белки, нерастворимы в воде и разбавленных растворах солей, но хорошо рас­творимы в растворах щелочей и разбавленных кислотах. Кислотные альбуми­наты связывают значительно большее количество щелочи, чем исходный белок.

Чистый желатин не содержит многих аминокислот, в том числе и перечис­ленных выше, и не дает ксантопротеиновой реакции.

Лабораторная работа № 4 некоторые свойства карбоновых кислот

ЦЕЛЬ: изучение некоторых химических и физических свойств карбоновых кислот.

МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ: муравьиная кислота, уксусная кислота, щавелевая кислота, янтарная кислота, фумаровая кислота, молочная кислота, винная кислота, пробирки и штативы для пробирок, пипетки, резиновые груши, трубки газотоотводные, спиртовки, пробиркодержатели, весы.