- •2.Разрушение кл. И экстракция. Центр-е
- •3. Разделение белков путем осаждения
- •4.Буферные растворы и специальные добавки. Ультрафильтрация.
- •5.Общие принципы хроматографии, классификация хр. Методов
- •6.Материалы матриц сорбентов и обменников. Техника колоночной хр.
- •7.Адсорбционная и распределительная хр.
- •9. Ионообменная хр.
- •10.Аффинная хроматография
- •11. Гель-фильтрация
- •12.Теоретические и методические основы электрофореза
- •13.Обнаружение, количественное определение и характеристика макромолекул после электрофореза
- •14.Принцип иммунного электрофореза. Иммунофиксация
- •15. Электросинерез. Электроиммуноанализ
- •17. Спектрофотометрические методы анализа
- •20.Радиометрический анализ. Масс-спектроскопия
- •21. Блоттинг-анализ
- •22.Влияние рН на биологические процессы и применние буф р-ов для б-х исследований
- •24.Исследования на уровне целого организма.
- •25.Перфузия изолированных органов
- •26.Приготовление срезов органов и тканей
- •27. Использование растительного материала
- •28.Культуры тканей и клеток
- •29.Фракционирование клеток
- •30.Приготовление гомогенатов тканей и клеток
- •31.Выбор среды суспендирования
20.Радиометрический анализ. Масс-спектроскопия
Радиометрический анализ, метод анализа химического состава веществ, основанный на использовании радиоактивных изотопов и ядерных излучений. В Р. а. для качественного и количественного определения состава веществ используют радиометрические приборы (см. Детекторы ядерных излучений). Различают несколько способов Р. а. Прямое радиометрическое определение основано на осаждении определяемого иона в виде нерастворимого осадка избытком реагента известной концентрации, содержащего радиоактивный изотоп с известной удельной активностью. После осаждения устанавливают радиоактивность осадка или избытка реагента.
Радиометрическое титрование основано на том, что определяемый в растворе ион образует с реагентом малорастворимое или легкоэкстрагируемое соединение. Индикатором при титровании служит изменение, по мере введения реагента, радиоактивности раствора (в 1-м случае) и раствора или экстракта (во 2-м случае). Точка эквивалентности определяется по излому кривой титрования, выражающей зависимость между объёмом введённого реагента и радиоактивностью титруемого раствора (или осадка). Радиоактивный изотоп может быть введён в реагент или определяемое вещество, а также в реагент и определяемое вещество.
Метод анализа в-ва путем определения массы и относит. кол-ва ионов, получаемых при ионизации исследуемого в-ва или уже присутствующих в изучаемой смеси.
Масс-спектральные приборы характеризуются чувствительностью, к-рая определяется как отношение числа зарегистрированных ионов к числу атомов введенной пробы. Ионный источник предназначен для образования газообразных ионов исследуемого в-ва и формирования ионного пучка, к-рый направляется далее в масс-анализатор. наиб. универсальный метод ионизации в-ва - электронный удар.
Часто метод хим. ионизации более чувствительный, чем метод ионизации электронным ударом, т.к практически все имеющиеся в ионизационной камере электроны используются для ионизации. Метод позволяет анализировать пространств. и оптич. изомеры.
21. Блоттинг-анализ
Название методик, включающих этап переноса разделенных макромолекул из определенной среды (например,геля) на какой-либо носитель (специальная бумага, нитроцеллюлозные фильтры и т.п.); существует два основных типа блоттинга – капиллярный (например, Саузерн-блоттинг), в основе которого – перемещение молекул благодаря капиллярному эффекту, и электроблоттинг, при котором перенос молекул обеспечивается путем электрофореза.
Саузерн блоттинг (от англ. Southern blot) — метод, применяемый в молекулярной биологии для выявления определенной последовательности ДНК в образце. Метод Саузерн блоттинга сочетает электрофорез в агарозном геле для фракционирования ДНК с методами переноса разделенной по длине ДНК на мембранный фильтр для гибридизации. Метод называется по имени изобретателя, английского биолога Эдвина Саузерна.[1]
Другие технологии переноса (блота), например, вестерн блоттинг, нозерн блоттинг, саузвестерн блоттинг используют сходные методы, но для определения РНК или белка в образце, и называются по образцу метода, придуманного Саузерном. Так как Саузерн-блот назван по имени ученого, термин пишут с заглавной буквы, в то время как вестерн-блот и нозерн-блот — со строчной буквы.
Вестерн блоттинг — аналитический метод, используемый для определения специфичныхбелков в образце. На первом этапе использует электрофорез белков в полиакриламидном геле для разделения денатурированных полипептидов по длине (как правило, в присутствии SDS) или по трехмерной структуре белка (в нативном состоянии). Далее белки переносятся на нитроцеллюлозную мембрану или PVDF, затем детектируются с использованием антител, специфичных к заданному белку. Разработка гибридизационного метода Саузерном. Фундаментальные открытия, лежащие в основе гибридизационного метода. Перенос и идентификация макромолекул после разделения. Понятие "блоттинга". Лабораторные модификации блоттинг-метода для определения ДНК, РНК и белков. Метод in situ гибридизации, лежащий в основе гистохимических и цитохимических методов. FISH - флюоресцентная идентификация гибридизованных молекул.
Два варианта приборного и лабораторного исполнения метода полимеразной цепной реакции (ПЦР).
Современные тенденции в разработке оборудования для биохимических лабораторий - достоинства и недостатки.