- •2.Разрушение кл. И экстракция. Центр-е
- •3. Разделение белков путем осаждения
- •4.Буферные растворы и специальные добавки. Ультрафильтрация.
- •5.Общие принципы хроматографии, классификация хр. Методов
- •6.Материалы матриц сорбентов и обменников. Техника колоночной хр.
- •7.Адсорбционная и распределительная хр.
- •9. Ионообменная хр.
- •10.Аффинная хроматография
- •11. Гель-фильтрация
- •12.Теоретические и методические основы электрофореза
- •13.Обнаружение, количественное определение и характеристика макромолекул после электрофореза
- •14.Принцип иммунного электрофореза. Иммунофиксация
- •15. Электросинерез. Электроиммуноанализ
- •17. Спектрофотометрические методы анализа
- •20.Радиометрический анализ. Масс-спектроскопия
- •21. Блоттинг-анализ
- •22.Влияние рН на биологические процессы и применние буф р-ов для б-х исследований
- •24.Исследования на уровне целого организма.
- •25.Перфузия изолированных органов
- •26.Приготовление срезов органов и тканей
- •27. Использование растительного материала
- •28.Культуры тканей и клеток
- •29.Фракционирование клеток
- •30.Приготовление гомогенатов тканей и клеток
- •31.Выбор среды суспендирования
6.Материалы матриц сорбентов и обменников. Техника колоночной хр.
Матрицей называют твердую основу неподвижной хр. фазы. Она имеет вид сплошных или пористых гранул. физико-химические параметры матрицы могут существенно влиять на св-ва неподвижной фазы: размеры и форма гранул и их пор; диапазон разброса этих размеров; механическая прочность материала матрицы; характер его смачивания и набухания в элюенте; химическая стойкость и инертность в условиях хр. элюции; реакционная способность, обеспечивающая возможность химической модификации матрицы.
Хроматографические колонки. Колоночная хроматография – способ препаративного разделения смесей жидких или твердых веществ, основанный на различном сродстве разделяемых веществ к неподвижной (сорбент) и подвижной (элюент) фазам. Как правило, чем лучше вещество сорбируется неподвижной фазой - тем медленнее вещество выходит с колонки. Современные методы колоночной хроматографии позволяют, пожалуй, разделять смеси любого состава. Для этого необходимо тщательно подобрать для каждого компонента смеси: элюент и сорбент
7.Адсорбционная и распределительная хр.
В адсорбционной хр. разделение веществ, входящих в смесь и движущихся по колонке в потоке растворителя, происходит за счёт их различной способности адсорбироваться и десорбироваться на поверхности адсорбента с развитой поверхностью, например, силикагеля.
В распределительной хр. разделение происходит за счет разной растворимости разделяемых веществ в неподвижной фазе, как правило, химически привитой к поверхности неподвижного носителя, и подвижной фазе - растворителе.
8. Тонкослойная ХР. вариант хроматографии, основанный на различии в скорости перемещения компонентов смеси в плоском тонком слое (толщина 0,1-0,5 мм) сорбента при их движении в потоке подвижной фазы (элюента). Последняя представляет собой, как правило, жидкость, однако осуществлен и газовый вариант ТСХ. В качестве сорбентов используют мелкозернистые силикагель, Аl2О3, целлюлозу, крахмал, полиамид, иониты и др. Суспензиями этих сорбентов покрывают пластинки из стекла, фольги или пластика; для закрепления слоя применяют крахмал, гипс или др. связующие. Пром-стью выпускаются готовые пластинки с уже закрепленным слоем сорбента. Элюентами служат обычно смеси орг. р-рителей, водных р-ров к-т, солей, комплексообразующих и др. в-в. В зависимости от выбора хроматографич. системы (состава подвижной и неподвижной фаз) в разделении в-в осн. роль могут играть процессы адсорбции, экстракции, ионного обмена, комплексообразования. На практике часто реализуются одновременно неск. механизмов разделения.В зависимости от положения пластинки и направления потока элюента различают восходящую, нисходящую и горизонтальную ТСХ. ТСХ применяют для разделения и анализа как орг., так и неорг. в-в: практически всех неорг. катионов и мн. анионов, в т. ч. близких по св-вам ионов благородных металлов, РЗЭ, а также полимеров, лек. ср-в, пестицидов, аминокислот, липидов, алкалоидов и т. д.
9. Ионообменная хр.
жидкостная хр, основанная на разл. способности разделяемых ионов к ионному обмену с фиксир. ионами сорбента, образующимися в результате диссоциации ионогенных групп последнего. Для разделения катионов используют катиониты, для разделения анионов - аниониты. Элюентом в первом случае служит р-р кислоты, во втором - р-р щелочи. Разделение ионов регулируют подбором оптим. значений рН элюента. Их. используют для выделения алкалоидов, антибиотиков, ферментов, для переработки продуктов ядерных превращений. Ионообменная хр. белков. Хроматофокусирование. Хроматофокусирование - метод ионообменной хр., использующий в качестве инструмента разделения градиент рН, формируемый в слое сорбента внутри колонки. Метод успешно применяют для разделения цвиттер-ионных биологических макромолекул.