- •Лабораторная работа № 8 Методы экспресс – диагностики функционального состояния спортсменов
- •Основные биохимические показатели состава крови и мочи, их изменение при мышечной деятельности
- •Лабораторная работа № 8 Методы экспресс – диагностики функционального состояния спортсменов
- •Опыт 1. Количественное определение глюкозы в биологических жидкостях.
- •Опыт 1.3.1. Определение оптической плотности глюкозы в полученном фильтрате.
- •Опыт 1.3.2. Определение оптической плотности глюкозы в калибровочном растворе.
- •Опыт 2. Определение количества глюкозы в крови ортотолуидиновым методом.
- •Опыт 5. Обнаружение свободного креатина в безбелковом экстракте из мышечной ткани.
- •Опыт 6. Обнаружение молочной кислоты в безбелковом мышечном экстракте.
- •Литература по теме:
Опыт 5. Обнаружение свободного креатина в безбелковом экстракте из мышечной ткани.
Принцип метода. При нагревании в кислой среде креатин теряет воду и превращается в креатинин. Креатинин с пикриновой кислотой в щелочной среде дает оранжевую окраску.
Порядок выполнения работы.
В пробирку наливают 2-3 мл безбелкового мышечного экстракта, прибавляют 1-2 мл раствора соляной кислоты и кипятят в водной бане в течение 8-10 минут, охлаждают. Затем добавляют в пробирку 3-4 капли насыщенного раствора пикриновой кислоты и 6-8 капель 10% раствора едкого натра.
Вывод: по изменению окраски раствора в пробирке сделать заключение о присутствии или отсутствии креатина.
Опыт 6. Обнаружение молочной кислоты в безбелковом мышечном экстракте.
Принцип метода. Молочная кислота с реактивом Уффельмана (фенол + хлорное железо) дает желто-зеленое окрашивание, вследствие образования молочно-кислого железа. Схема реакции:
1) 3(C6H5O)3Fe +FeCl3 (C6H5O)3 Fe + 3HCl
фенол фенолят железа
H H
2)(C6H5O)3Fe + 3СH3 C COOH (СH3 C COOH)3Fe + 3C6H5OH
OH OH
молочная кислота лактат железа фенол
Порядок выполнения работы.
В две пробирки наливают по 1 мл 1% раствора фенола и добавляют по каплям 1% раствор хлорного железа до появления фиолетовой окраски. В одну из пробирок добавляют по каплям раствор молочной кислоты до появления желто-зеленой окраски. Это окраска эталонного раствора. В другую пробирку наливают 1 мл безбелкового мышечного экстракта. Если в нем содержится молочная кислота, то окраска содержимого пробирки должна стать такой же, как и в первой пробирке.
Вывод: по изменению окраски раствора во второй пробирке сделать заключение о присутствии или отсутствии молочной кислоты в исследуемых мышцах, записать уравнение реакции. Отметить при окислении, каких энергетических веществ и при выполнении, каких упражнений (аэробной или анаэробной направленности) образуется молочная кислота.
Опыт 7. Определение гликогена в мышцах.
Гликоген при взаимодействии с йодом дает красную или красно-бурую окраску, интенсивность которой зависит от содержания гликогена.
Порядок выполнения работы.
Взять две пробирки, в одну из них налить 0,5 мл водного безбелкового экстракта мышечной ткани, в другую – 0,5 мл воды.
Приготовление безбелкового мышечного экстракта.
Мышечную ткань (1 г) тщательно растирают в течение 3-5 минут в ступке с 1мл дистиллированной воды до получения гомогенной кашицы. Затем добавляют 4 мл воды и тщательно растирают еще несколько минут. Содержимое ступки фильтруют через два слоя марли, фильтрат переносят в пробирку и кипятят до появления осадка. Осадок фильтруют, а фильтрат используют для анализа. Фильтрат носит название безбелковый мышечный экстракт, в его составе полностью отсутствуют белки, но сохранились экстрактивные вещества, в частности, креатин и молочная кислота.
Добавить в обе пробирки по 2 капли раствора Люголя, сравнить окраску.
Вывод:
Контрольные вопросы.
1. Особенности приготовление мышечного экстракта.
2. Получение безбелкового фильтрата.
3. С какой целью производится количественное определение глюкозы в
биологических тканях?
4. Особенности обнаружение свободного креатина и молочной кислоты в безбелковом мышечном экстракте.
5. В каких органах и тканях содержание гликогена наиболее велико и почему?
6. Из какого соединения в животных организмах синтезируется гликоген и где это происходит?
Самостоятельная работа.
1. Каков энергетический эффект анаэробного и аэробного расщепления углеводов?
2. Какими путями может протекать распад углеводов в организме?
3. Где в клетке протекает анаэробное расщепление углеводов?
4. В каких структурах происходит аэробное окисление углеводов?
5. Обосновать вклад различных путей ресинтеза АТФ в энергетическое обеспечение соревновательных нагрузок в Вашем виде спорта.