Иммунология

Занятие № 11

Иммунология как наука. Естественный иммунитет Оценка функционального состояния фагоцитов

Практические навыки, осваиваемые студентами на занятии:

1. Определение показателей фагоцитоза в готовых препаратах, окрашенных по Романовскому-Гимзе.

Оценку фагоцитоза производят, подсчитывая соотношение между общим количеством фагоцитов в мазках и фагоцитов, в которых наблюдается фагоцитоз.

Для оценки иммунного фагоцитоза используют показатели опсонофагоцитарной пробы.

Табл. 1. Схема учета опсонофагоцитарной пробы

Количество фагоци­тированных бакте­рий в одном лейко­ците

Вычисление цифрового показателя

Оценка фагоцитоза Количество фагоцитов

0

+

++ +++

3

4

6

12

3. 0 = 0

4. 1=4

6-2 = 12

12-3 = 36

По данным табл. 1, показатель опсонофагоцитарной пробы ра­вен 52. Максимальный показатель выражается цифрой 75, если фа­гоцитоз всех 25 лейкоцитов оценен тремя плюсами. У здоровых лю­дей цифровой показатель равен 1-3. Показатель в пределах 10 -24 характеризует слабо положительную реакцию, 25 - 49 - ясно вы­раженную и 50 - 75 - резко положительную.

Для оценки степени завершенного фагоцитоза применяют пока­затель завершенности фагоцитоза. Его определяют количеством клеток с завершенным фагоцитозом на 100 фагоцитировавших нейтрофильных лейкоцитов.

О завершенности фагоцитоза судят по отсутствию роста на пита­тельной среде, а при микроскопических исследованиях - по значи­тельному уменьшению размеров фагоцитированных бактерий и их фрагментации.

Более достоверные данные о завершенном фагоцитозе можно получить, используя метод подращивания лейкоцитарно-бактериальной взвеси.

Для этого смесь крови в лимоннокислом натрии с тест-бактериями после инкубации при температуре 37 °С в течение 30 мин распределяют по поверхности чашки Петри с МПА. Затем чашки Петри помещают в термостат на 2 ч. За это время подращива­ния оставшиеся жизнеспособными бактерии образуют гигантские формы, которые легко отличаются от погибших.

Занятие № 12

Иммунная система организма человека Определение активности системы комплемента

Практический навык, осваиваемый студентами на занятии:

1. Определение активности системы комплемента.

Алгоритм постановки реакции титрования комплемента

Обычно для постановки РСК используют комплемент, выделенный из крови морской свинки. Титрование (определение концентрации) комплемента прово­дят в связи с тем, что содержание его у каждой морской свинки раз­лично.

Для этого основной раствор комплемента (разведенный 1:10) разливают в ряд пробирок от 0,05 до 0,5 мл и в каждую из них прибавляют 0,85 % раствор натрия хлорида, доводя объем жидкости до 1,5 мл.

Ставят в термостат при температуре 37 °С на 45 мин, после чего во все про­бирки добавляют гемсистему.

Пробирки вновь инкубируют в термо­стате 30 мин и затем определяют титр комплемента: или наименьшее количество (концентрация) комплемента, вызывающее гемолиз.

Занятие № 13

Клеточный иммунный ответ. Антигены Пластинчатая реакция агглютинации

Практические навыки, осваиваемые студентами на занятии:

1. Постановка и учет пластинчатой реакции агглютинации (РА) на стекле.

Пластинчатая (или ориентировочная) РА.

Пластинчатая РА выполняют перед постановкой развернутой реакции для того, что­бы получить предварительное представление о выделенном виде или сероваре бактерий, отобрать положительно реагирующие с ни­ми колонии (культуры) и исключить из дальнейших исследований неагглютинирующиеся.

Пластинчатую РА ставят при комнатной температуре на предметных стеклах.

Для этого пастеровской пипеткой наносят на стекла раздельно друг от друга капли сыворотки в не­больших разведениях (1:10 - 1:20) и две капли 0,5 % раствора нат­рия хлорида (контроль РА).

В каждую каплю (за исключением од­ной контрольной) вносят колонии, снятые с по­верхности плотной питательной среды, или петлю суточной жидкой культуры бактерий.

Внесенные микроорганизмы тщательно пере­вешивают в каплях жидкости до равномерного их помутне­ния.

Результаты реакции учитывают через 5-10 мин простым глазом или с помощью лупы (5х).

При положительной реакции в капле с сывороткой появляются крупные или мелкие хлопья, при отрицатель­ной - жидкость остается равномерно мутной.

Занятие № 14