- •Практический навык по микробиологии
- •Обязанности студентов и дежурных по окончании работы:
- •Самостоятельная работа студентов на лабораторных занятиях:
- •Микроскопирование
- •Окончание работы (микроскопирования)
- •Микробиология как наука Бактериоскопический метод исследования. Простые методы окраски Практические навыки, осваиваемые студентами на занятии:
- •Приготовление мазка
- •Простые методы окраски
- •Морфология и ультраструктура бактериальной клетки Окраска по Граму
- •Сложные методы окраски
- •Морфология и ультраструктура бактериальной клетки (продолжение). Особенности морфологии актиномицетов, спирохет, риккетсий, хламидий, микоплазм Окраска по Цилю-Нильсену
- •Сложные методы окраски
- •Физиология прокариот Окраска по Нейссеру
- •Сложные методы окраски
- •Физиология прокариот (продолжение). Бактериофаги Культуральный метод исследования. Фаготипирование бактерий
- •Первый этап культурального метода исследования – получение изолированного роста чистой культуры
- •Второй этап культурального метода исследования – накопление чистой культуры
- •Третий этап культурального метода исследования – окончательная идентификация чистой культуры
- •Изучение культуральных признаков
- •Фаготипирование бактерий.
- •Генетика бактерий Изучение бактерий в живом состоянии
- •Приготовление препаратов для изучения микроорганизмов в живом состоянии.
- •Метод «раздавленной» капли.
- •Этапы приготовления препарата «раздавленная капля»
- •Экология микроорганизмов Изучение микрофлоры ротовой полости
- •Приготовление мазка из зубного налета
- •Окраска мазка простым методом с использованием метиленового синего:
- •Основы учения об инфекции Биологический метод исследования
- •Микробиологические основы химиотерапии бактериальных инфекций Методы изучения чувствительности бактерий к антибиотикам
- •Качественный метод определения чувствительности бактерий к антибиотикам (метод дисков).
- •Иммунология
- •Иммунология как наука. Естественный иммунитет Оценка функционального состояния фагоцитов
- •Иммунная система организма человека Определение активности системы комплемента
- •Клеточный иммунный ответ. Антигены Пластинчатая реакция агглютинации
- •Гуморальный иммунный ответ. Иммуноглобулины Объемная реакция агглютинации
- •Аллергия (гиперчувствительность) Реакция преципитации Практические навыки, осваиваемые студентами на занятии:
- •Иммунопрофилактика и иммунотерапия инфекционных болезней. Возрастные особенности иммунитета
- •Серологические реакции с использованием метки.
- •Постановка прямой и непрямой риф.
- •Практические навыки, осваиваемые студентами на занятии:
- •Медицинская бактериология с основами микологии и протозоологии
- •Вибрионы. Бруцеллы. Франциселлы. Yersinia pestis. Бациллы Микробиологическая диагностика холеры, бруцеллеза, туляремии, чумы, сибирской язвы Практические навыки, осваиваемые студентами на занятии:
- •Микобактерии. Актиномицеты. Листерии
- •Спирохеты. Бартонеллы. Ориенции. Эрлихи. Риккетсии. Хламидии. Микоплазмы
- •Экологическая группа арбо- и робовирусов. Рабдовирусы. Реовирусы
- •Содержание
- •Для заметок Для заметок
- •Тетрадь для лабораторНых работ по микробиологии
Иммунопрофилактика и иммунотерапия инфекционных болезней. Возрастные особенности иммунитета
Серологические реакции с использованием метки.
Постановка прямой и непрямой риф.
Практические навыки, осваиваемые студентами на занятии:
Знать алгоритм постановки прямой и непрямой реакции иммунофлюоресценции (РИФ).
Знать алгоритм постановки твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА).
Уметь оценить показатели иммунограммы и знать, как расшифровать следующие сокращения: CD, ИРИ, ФЧ, ФИ,CH50, ЦИК, НСТ,Ig, РБТЛ, ФГА, ЛПС и КонА.
Алгоритм постановки прямой РИФ
На обезжиренном предметном стекле из исследуемого материала делают тонкие мазки, а из органов и тканей - мазки-отпечатки.
Препараты подсушивают, фиксируют, наносят на них люминесцирующую сыворотку, взятую в рабочем разведении, и помещают во влажную камеру при температуре 37 °С на 20 - 30 мин (или на 25 - 40 мин при 18 - 21 °С).
Затем для удаления избытка флюоресцирующих антител препарат промывают в забуферном изотоническом растворе натрия хлорида в течение 10 – 15 мин с последующим ополаскиванием в дистиллированной или проточной воде в течение 10 мин.
Сушат при комнатной температуре и просматривают с использованием люминесцентного микроскопа и масляной иммерсионной системы.
Интенсивность специфической реакции флюоресценции бактериальных клеток оценивают по четырехплюсовой шкале:
"++++" - очень яркая; "+++" - яркая; "++" - выраженная ободочная флюоресценция; "+" - слабое свечение клеток.
Обязательны три контроля обработки флюоресцирующими антитела суспензии:
1) гомологичных бактерий (положительный контроль 2) гетерологичной культуры (отрицательный); 3) незараженного материала (отрицательный).
Алгоритм постановки непрямой РИФ
На обезжиренном предметном стекле из исследуемого материала делают тонкие мазки, а из органов и тканей - мазки-отпечатки.
Препараты подсушивают, фиксируют, наносят на них обычную специфическую сыворотку, взятую в рабочем разведении, и помещают во влажную камеру при температуре 37 °С на 20 - 30 мин (или на 25 - 40 мин при 18 - 21 °С).
Затем для удаления избытка антител препарат промывают в забуферном изотоническом растворе натрия хлорида в течение 10 – 15 мин с последующим ополаскиванием в дистиллированной или проточной воде в течение 10 мин.
Препараты подсушивают, наносят на них флюоресцирующую антииммуноглобулиновую (специфически взаимодействующую с иммуноглобулинами человека) сывортку, взятую в рабочем разведении, и снова помещают во влажную камеру при температуре 37 °С на 20 - 30 мин (или на 25 - 40 мин при 18 - 21 °С).
Сушат при комнатной температуре и просматривают с использованием люминесцентного микроскопа и масляной иммерсионной системы.
Интенсивность специфической реакции флюоресценции бактериальных клеток оценивают по четырехплюсовой шкале:
"++++" - очень яркая; "+++" - яркая; "++" - выраженная ободочная флюоресценция; "+" - слабое свечение клеток.
Обязательны три контроля обработки флюоресцирующими антитела суспензии: 1) гомологичных бактерий (положительный контроль 2) гетерологичной культуры (отрицательный); 3) незараженного материала (отрицательный).
Алгоритм постановки твердофазного иммуноферментного анализа.
В настоящее время чаще применяется твердофазная модификация ИФА, при этом антитела или антигены сорбируются в лунка: полистироловых планшет (на твердой фазе).
В большинстве случаев к твердой фазе присоединяются антигены, которые при инкубации с сыворотками пациентов улавливают специфические антитела.
К образовавшемуся при этом иммунокомплексу прибавляются затем меченные пероксидазой антииммуноглобулиновые антитела, специфические к антителам человека – антииммуноглобулиновая сыворотка.
В результате образуется иммунопероксидазный тройной комплекс, при добавлении к которому ортофенилендиамина (хромогена) и Н202 в качестве субстрата для пероксидазы происходит пожелтение в лунке (изменение цвета хромогена вследствие образования супероксиданиона кислорода в результате расщеплении пероксида пероксидазой).
Результаты твердофазной модификации ИФА учитывают с использованием специального спектрофотометра.