- •Лф, фиу, пф. Занятие № 1
- •1А. Основные положения
- •1Д. Практические навыки, приобретаемые на занятии
- •Лф, фиу, пф. Занятие № 2
- •2А. Основные положения
- •2Д. Практические навыки, приобретаемые на занятии
- •Лф, фиу, пф. Занятие № 3
- •3А. Основные положения
- •3Д. Практические навыки, приобретаемые на занятии
- •Лф, фиу, пф. Занятие № 4
- •4А. Основные положения
- •4Д. Практические навыки, приобретаемые на занятии
- •Лф, фиу, пф. Занятие № 5
- •5А. Основные положения
- •5Д. Практические навыки, приобретаемые на занятии
- •Лф, фиу, пф. Занятие № 6
- •6А. Основные положения
- •6Д. Практические навыки, приобретаемые на занятии
- •Лф, фиу, пф. Занятие № 7
- •7А. Основные положения
- •7Д. Практические навыки, приобретаемые на занятии
- •Лф, фиу, пф. Занятие № 8
- •8А. Основные положения
- •8Д. Практические навыки, приобретаемые на занятии
- •Лф, фиу, пф. Занятие № 9
- •9А. Основные положения
- •9Д. Практические навыки, приобретаемые на занятии
- •Лф, фиу, пф. Занятие № 11
- •11А. Основные положения
- •11Д. Практические навыки, приобретаемые на занятии
- •Лф, фиу, пф. Занятие № 12
- •12А. Основные положения
- •12Д. Практические навыки, приобретаемые на занятии
- •Лф, фиу, пф. Занятие № 13
- •13А. Основные положения
- •13Д. Практические навыки, приобретаемые на занятии
- •Лф, фиу, пф. Занятие № 14
- •14А. Основные положения
- •14Д. Практические навыки, приобретаемые на занятии
- •Лф, фиу, пф. Занятие № 15
- •15А. Основные положения
- •15Д. Практические навыки, приобретаемые на занятии
- •Лф, фиу, пф. Занятие № 16
- •16А. Основные положения
- •16Д. Практические навыки, приобретаемые на занятии
- •Лф, фиу, пф. Занятие № 17
- •17А. Основные положения
- •17Д. Практические навыки, приобретаемые на занятии
- •Лф, фиу, пф. Занятие № 19
- •19А. Основные положения
- •19Д. Практические навыки, приобретаемые на занятии
- •Лф, фиу, пф. Занятие № 20
- •20А. Основные положения
- •20Д. Практические навыки, приобретаемые на занятии
- •Лф, фиу, пф. Занятие № 21
- •21А. Основные положения
- •21Д. Практические навыки, приобретаемые на занятии
- •Лф, фиу, пф. Занятие № 22
- •22А. Основные положения
- •22Д. Практические навыки, приобретаемые на занятии
- •Лф, фиу, пф. Занятие № 23
- •23А. Основные положения
- •23Д. Практические навыки, приобретаемые на занятии
- •Лф, фиу, пф. Занятие № 24
- •24А. Основные положения
- •24Д. Практические навыки, приобретаемые на занятии
- •Лф, фиу, пф. Занятие № 25
- •25А. Основные положения
- •25Д. Практические навыки, приобретаемые на занятии
- •Лф, фиу, пф. Занятие № 26
- •26А. Основные положения
- •26Д. Практические навыки, приобретаемые на занятии
- •Лф, фиу, пф. Занятие № 27
- •27А. Основные положения
- •27Д. Практические навыки, приобретаемые на занятии
- •Лф, фиу, пф. Занятие № 29
- •29А. Основные положения
- •29Д. Практические навыки, приобретаемые на занятии
- •Лф, фиу, пф. Занятие № 30
- •30А. Основные положения
- •30Д. Практические навыки, приобретаемые на занятии
- •Лф, фиу, пф. Занятие № 31
- •31А. Основные положения
- •31Д. Практические навыки, приобретаемые на занятии
- •Лф, фиу, пф. Занятие № 32
- •32А. Основные положения
- •32Д. Практические навыки, приобретаемые на занятии
- •Лф, фиу, пф. Занятие № 33
- •33А. Основные положения
- •33Д. Практические навыки, приобретаемые на занятии
- •Лф, фиу, пф. Занятие № 34
- •34А. Основные положения
- •34Д. Практические навыки, приобретаемые на занятии
- •Лф, фиу, пф. Занятие № 35
- •35А. Основные положения
- •35Д. Практические навыки, приобретаемые на занятии
- •Лф, фиу, пф. Занятие № 36
- •36А. Основные положения
5Д. Практические навыки, приобретаемые на занятии
Засев патологического материала на пластинчатый МПА петлей с целью получения отдельных колоний.
Индикация типа колоний (S- или R-) на пластинчатом МПА.
Пересев части колонии на скошенный МПА.
Пересев бактериальной культуры со скошенного МПА на среду Гисса.
Расчёт концентрации бактериофага по методу Грациа.
Лф, фиу, пф. Занятие № 6
6А. Основные положения
Организация генетического материала у бактерий.
Наследственная информация бактерий хранится в ДНК, которая в прокариотической клетке является циркулярно замкнутой, двух цепочечной, суперспирализованной и представлена двумя типами молекул: большая – нуклеоид, где закодированы жизненно важные признаки, и малые – внехромосомные факторы наследственности (плазмиды, транспозоны, IS-последовательности, и умеренные бактериофаги), в которых закодированы дополнительные признаки.
Внехромосомные факторы наследственности и их встраивание их в нуклеоид.
Плазмиды могут, подобно нуклеоиду, самореплицироваться и поэтому относятся к автономным факторам наследственности (в отличие от остальных – неавтономных, которые способны реплицироваться лишь в составе нуклеоида или плазмиды), кроме того, плазмиды, как и умеренные фаги, могут встраиваться в нуклеоид только в гомологичных участках, в отличие от транспозонов и IS-последовательностей, способных встраиваться в нуклеоид в любых его участках.
Плазмиды.
Плазмиды выполняют в бактериальной клетке две возможные функции – регуляторную (содержа в себя дупликаты некоторых нуклеоидных генов) и кодирующую (неся гены, которых в нуклеоиде нет), могут существовать в двух состояниях (автономном, т.е. вне нуклеоида, и интегрированном в нуклеоид), а в зависимости от содержания в них tra-оперона – быть конъюгативными (если этот оперон содержится в данной плазмиде) и неконъгативными.
Функции tra-оперона.
Tra-оперон обуславливает возможность процесса конъюгации (детерминирует образование конъюгативных пилей и процесс одностороннего переноса через них генетического материала: плазмиды или участка нуклеоида).
F-плазмиды.
F-плазмиды представляют собой собственно tra-оперон, без каких-либо дополнительных генов, они детерминирует перенос при конъюгации себя, а также другую молекулу ДНК, в которую интегрирована F-плазмида (если это молекула ДНК – неконъюгационная плазмида, то в результате интеграции F-плазмиды она становится конъюгационной и передаётся через конъюгационную пилю, если это молекула ДНК – нуклеоид, то при конъюгации передаётся его часть, но не сама F-плазмида).
Формирование различных состояний плазмиды F.
F-плазмида из автономного состояния может переходить в интегрированное в нуклеоид состояние (в этом случае она называется Hfr-фактором), а также возвращаться в автономное состояние (или полностью сохраняя свой состав или «обмениваясь» с нуклеоидом своим концевым участком – в последнем случая такая рекомбинантная плазмида называется F’-плазмидой).
R-плазмиды.
R-плазмиды – это плазмиды, детерминирующие множественную лекарственную устойчивость (или резистентность, откуда и название) бактериальной клетки к антибиотикам; они состоят из генов, детерминирующих такую устойчивость (r-оперон) и F-плазмиды (которая в этом случае носит название RTF-фактора.
Состав r-оперона.
Этот оперон содержит гены, детерминирующие устойчивость к антибиотикам, а также в его состав может входить транспозон или его часть – IS-последовательность.
Механизмы устойчивости бактерий к антибиотикам, обусловленные наличием R-плазмид.
R-плазмида может детерминировать: способность бактериальной клетки инактивировать антибиотик, способность бактериальной клетки модифицировать антибиотик с потерей последним своей антибактериальной активности, способность бактериальной клетки снижать проницаемость клеточной стенки для данного антибиотика.
Бактериоциногенные плазмиды (на примере col-плазмиды E.coli).
Бактериоциногенные плазмиды детерминируют синтез антибиотикоподобных веществ – бактериоцинов; у кишечной палочки бактериоциногенные плазмиды называются колициногенными (как и у других бактерий – по названию вида) или Col-плазмидами, а бактериоцины – колицинами (по такому же принципу).
Характеристика колицинов.
Колицины представляют собой белки, которые убивают бактериальную клетку, но не лизируют её.
Транспозоны.
Транспозоны – нуклеотидные последовательности, включающие в себя IS-последовательности (которые обуславливают способность транспозонов менять место локализации в молекуле ДНК, а также «перескакивать» из одной молекулы ДНК в другую – так называемые «прыгающие гены»), гены, детерминирующие какой-либо признак, а также особые концевые структуры, благодаря которым транспозоны могут находиться в автономном состоянии (поскольку, благодаря этим «липким концам» замыкаются в кольцо).
IS-последовательности.
IS-последовательности включают в себя только гены транспозиции, в отличие от транспозонов не могут находиться в автономно состоянии.
Механизмы фаговой конверсии.
Когда в результате лизогенизации (т.е. встраивание в геном умеренного бактериофага) бактерия приобретает дополнительный признак, это может быть обусловлено тремя возможными механизмами: дерепрессией гена профага, внесением соответствующего гена дефектным фагом, запуском «молчащего» из-за повреждения собственного промотора гена промотором профага.
Модификации у бактерий.
Модификациями называются фенотипическая изменчивость у бактерий.
Мутации у бактерий.
При мутационной изменчивости у бактерий происходят изменения в первичной структуре ДНК, которые выражаются в наследственно закреплённой утрате или изменении какого-либо признака (или признаков); при спонтанных мутациях факторы, их вызвавший (мутаген) не известен – наиболее часто спонтанные мутации происходят в результате ошибки ДНК-полимеразы при репликации ДНК, среди спонтанных мутаций выделяют инсертационные мутации, которые происходят вследствие встраивания в нуклеоид внехромосомных факторов наследственности; индуцированные мутации у бактерий вызываются в эксперименте действием конкретного мутагена.
SR-диссоциации.
SR-диссоциацией называется такое явление, когда в чистой культуре, образующей S-формы колоний, появляются R-формы; по своему механизму SR-диссоциация – это инсертационная мутация, приводящая к утрате генов, контролирующих синтез полисахаридных звеньев ЛПС наружной мембраны клеточной стенки.
Мутагены.
Под мутагенами понимают химические вещества или физические факторы, вызывающие предмутационные изменения в ДНК, которые в результате ошибок репарирующих ферментов или в процессе репарации переходят в мутацию.
Репарации у бактерий.
Этим термином обозначают процесс восстановления повреждённой ДНК ферментами репарационных систем бактериальной клетки.
Рекомбинационная изменчивость у бактерий.
Под рекомбинационной изменчивостью понимают изменчивость, происходящую в результате включения в ДНК реципиентной клетки участка ДНК донорской клетки; у бактерий насчитывают пять видов генетических рекомбинаций (т.е. пять видов рекомбинационной изменчивости): трансформация (непосредственная передача генетического материала от донорской к реципиентной клетке), трансдукция (передача генетического материала от донорской к реципиентной клетке с помощью дефектных бактериофагов), конъюгация (передача генетического материала от донорской к реципиентной клетке с помощью конъюгационных пилей), лизогенизация (при ней в геном реципиентной клетки внедряется экзогенный генетический материал – геном умеренного фага), фаговая конверсия (отличается от лизогенизации лишь тем, что фенотип донорской клетки изменяется).
Генная инженерия в медицинской микробиологии.
В медицинской микробиологии все шире используются методы генной инженерии, с помощью которых «заставляют» микроорганизмы продуцировать нужные медицинской практике препараты (вакцины, гормоны, интерфероны, цитокины и др.), путем внесения в их геном соответствующего гена, т.е. получения рекомбинантного штамма с нужными свойствами путем «направленной» рекомбинационной изменчивости.
Генетические методы, применяемые в микробиологической диагностике.
В современной медицине все большее распространение получают генетические методы микробиологической диагностики: определение процентного содержания гуанина и цитозина в бактериальном геноме, метод молекулярной гибридизации и особенно – полимеразная цепная реакция (ПЦР).
Метод молекулярной гибридизации.
Этот метод используется для выявления степени сходства различных ДНК (при идентификации микроорганизмов проводят сравнение ДНК выделенного штамма с ДНК эталонного штамма).
Полимеразная цепная реакция.
ПЦР можно проводить для достижения трех целей: для обнаружения в патологическом материале конкретного вида микроорганизма без выделения чистой культуры, для идентификации выделенных чистых культур микроорганизмов, для генотипирования микроорганизмов, т.е. определения генетических вариантов одного вида; принцип осуществления ПЦР заключается в увеличении (амплификации) количества искомого гена при положительной или отсутствии такого увеличения при отрицательной реакции (т.е. проводится экстракция ДНК и, если в ней содержится искомый ген, ее количество в процессе реакции резко увеличивается, что выявляется с помощью электрофореза).