Лабораторная работа №6. Определение углеводов методом тонкослойной хроматографии.

Качественной характеристикой в методе тонкослойной хроматографии является показатель Rf. Сравнивая Rf свидетелей и исследуемых углеводов, проводят их идентификацию.

Реактивы: 5%-ный раствор исследуемого углевода, н-бутанол, уксусная кислота концентрированная, дистиллированная вода, фосфорная кислота, анилин, дифениламин, пластинки силуфол.

Методика проведения анализа. На пластинку наносят 1мкл 5%-ного водного раствора сахаров в виде сплошной полосы длиной 2 – 7мм, отступая от бокового и нижнего краёв пластинки на расстояние 10мм. Пластинку вертикально помещают в камеру, которая заполнена разделяющей смесью до высоты 5мм. Состав разделяющей смеси: н-бутанол-уксусная кислота-вода (60 – 15 – 25). Пластинку выдерживают в камере до тех пор, пока высота подъёма фронта восходящего растворителя не достигнет отмеченной длины разделительного пути. Разделительный путь (расстояние от линии старта до фронта растворителя) равен 90мл. По окончании хроматографического разделения пластинку вынимают из камеры и сушат при комнатной температуре в вытяжном шкафу до полного испарения остатков растворителей.

Затем разделение повторяют в той же системе растворителей. Высушенные пластинки погружают в реагент, представляющий собой следующую смесь: н-бутанол-вода-уксусная кислота-фосфорная кислота-анилин-дифениламин (60см³ – 25см³ – 15см³ – 10см³ – 1см³ – 2г). Пластинки снова высушивают и проявляют в термостате при температуре 120^OС в течение 5 мин. Проявленные фракции имеют различную окраску (см. табл. 1) на белом фоне пластинок.

Идентификацию сахаров проводят с помощью свидетелей и по значениям R_f (табл. 2.1). Данные заносят в табл. 2.1 в графу «расчёт».

Таблица 2.1

Результаты тонкослойной хроматографии.

№№ п/п	Углеводы	Цвет пятна	Rf
			теория	расчёт
	Моносахариды: глюкоза фруктоза ксилоза Дисахариды: мальтоза лактоза сахароза	оливково-серый красный зелёный серо-голубой оливково-серый коричневый	0,36 0,37 0,45 0,25 0,20 0,28
Исследуемое вещество

По результатам исследования делается заключительный вывод о структуре исследуемого вещества.

Лабораторная работа №7. Кислотный гидролиз крахмала.

Материалы и реактивы: крахмальный клейстер, 10%-ный раствор H₂SO₄, 0,1 н. раствор J в KJ, пластинки «Силуфол» н-бутанол, ледяная уксусная кислота, вода дистиллированная, фосфорная кислота, ланилин, дифениламин.

Приборы: весы лабораторные, денситометр, термостат, хроматографическая камера, стаканы химические (50 см³), штатив с калиброванными пробирками вместимостью 10 см³, пипетки, стеклянная палочка, микрошприц, мерный цилиндр (25 см³).

Цель работы: на примере кислотного гидролиза крахмала изучить процесс последовательной деполимеризации гомополисахарида. Провести хроматографический анализ гидролиза, идентифицировать продукты гидролиза и определить их относительное содержание.