Практическая часть

Препарат 1. Зародышевый диск куриного яйца.

Задание: Снять зародышевый диск с поверхности желтка.

Ход работы

Вынуть из инкубатора яйцо и положить его на горизонтальную поверхность на 1—2 мин. За это время халазы развернут желток, и зародыш окажется в верхнем положении (рис. 1, А). Взять яйцо двумя руками и, не меняя его ориентации (не поворачивая), поднести к чашке Петри, разбить скорлупу с нижней стороны яйца об ее край. Нужная степень разрушения скорлупы определяется по интенсивности вытекания белка из яйца: белок должен вытекать медленно. Держа яйцо двумя руками и не меняя его положения, поместить его над центром чашки Петри на минимально возможном расстоянии от ее дна, быстро раскрыть яйцо с нижней стороны, не раздавив при этом скорлупу. В выпавшем в чашку Петри желтке зародыш должен лежать наверху, в центре желтка (рис. 1, Б).

Рис. 1. Приготовление тотального препарата

эмбриона курицы 4-го дня инкубации:

А — строение инкубированного яйца;

Б — зародышевый диск на желтке;

В — наложение бумажного кольца на зародышевый диск (стрелками указаны места, в которых надо надрезать оболочку желтка; пунктир — линия,по которой следует надрезать оболочку желтка по периметру бумажного кольца);

1 — скорлупа; 2 — подскорлуповые оболочки; 3 — воздушная камера; 4 — белок; 5 — желток; 6 — кровеносные сосуды зародышевого диска; 7 — тело зародыша; 8 — край обрастания; 9 — бумажное кольцо

Вырезать кольцо из фильтровальной бумаги и поместить его на зародыш таким образом, чтобы в отверстии кольца был виден весь зародыш, а ширина бумажной части кольца составляла бы 3—4 мм. На зародышах в стадии инкубации 3—4 суток бумажная часть кольца должна полностью закрыть всю кровеносную систему желточного мешка, что предотвратит случайное разрушение сосудов и вытекание из них крови, иначе сокращения сердца быстро прекращаются (рис. 1, В).

Через 3—4 мин (за это время кольцо присохнет к желточной оболочке) следует сделать 2—3 разреза в желточной оболочке по бокам желтка. Желток вытечет, его давление на оболочку будет снято, и при дальнейших манипуляциях он не сможет попасть на кольцо и затопить зародыш. По внешнему краю бумажного кольца сделать ножницами круговой разрез желточной оболочки, не оставляя при этом неразрезанных участков оболочки. Взяв металлический шпатель, смочить его в белке или воде и подвести его под бумажное кольцо с зародышем, придерживая при этом пинцетом бумажное кольцо с противоположной от шпателя стороны. Глубина погружения шпателя под кольцо не более 1—2 мм. Подняв шпателем с желтка зародыш с кольцом, перенести его в чашку Петри или в более глубокую посуду, наполненную теплым (38—40°С) физиологическим раствором. Опустить шпатель в раствор, таким образом, чтобы бумажное кольцо с желточной оболочкой находилось под зародышем, начать производить шпателем короткие колебательные движения в горизонтальной плоскости. Через 30—40 с, по-прежнему придерживая кольцо с оболочкой пинцетом на поверхности раствора, осторожно отвести шпатель в сторону и вниз от кольца, но не вертикально вниз, а по диагонали в сторону, противоположную пинцету. При этом желток отделится от зародыша. После прекращения удерживания пинцетом кольца зародыш и кольцо должны остаться плавать на поверхности раствора. Если бумажное кольцо с эмбрионом намокло и начало тонуть, следует поддерживать его шпателем, не давая опуститься на дно, и продолжать отмывку до полного отделения желтка (рис. 2, А).

Препарат 2. Временный микропрепарат зародыша курицы.

Задания: Рассмотреть зародыш под микроскопом кратностью 100, найти амнион зародыша, амниотическую жидкость, аллантоис, серозную оболочку, хорио-аллантоис, остаток желточной оболочки, остатки халазы, желточный мешок.