2. Техника приготовления мазка.

1. Стекло должно быть чистым и обезжиренным. Новые стекла промывают проточной водой, ополаскивают дистиллированной водой, затем на 2-3 дня помещают в банку со смесью Никифорова для обезжиривания. По мере необходимости стекла извлекают из банки пинцетом и протирают тряпочкой, не оставляющей ворсин (шелковым трикотажем). Стекла, бывшие в употреблении, кипятят в мыльном растворе. После кипячения стекла промывают проточной водой и далее обрабатывают как указано выше.

2. Мазок делают на предметном стекле с помощью шлифовального стекла, которое должно быть уже предметного и иметь безукоризненно ровный край.

3. Чтобы сделать мазок, к куполу капли крови прикасаются предметным стеклом на расстоянии 1,5-2 см от его края. Шлифовальное стекло прикладывают перед каплей под углом 45⁰ и делают небольшое движение назад к капле, чтобы она растеклась по ребру шлифовального стекла справа налево по предметному стеклу, равномерно распределяя по нему кровь, пока капля не будет исчерпана.

4. Мазок должен занимать примерно ¾ предметного стекла, заканчиваться "метелочкой", иметь хорошо выраженные края мазка. Правильно сделанный мазок полупрозрачен и имеет кетоновый желтоватый тон.

5. На высохшем мазке с обратной стороны стекла посредине пишут фамилию и инициалы больного простым (не химическим) карандашом.

6. Для анализа делают не менее 2-х мазков.

3. Фиксация мазков.

Фиксация предохраняет эритроциты от гемолиза, закрепляет мазок на стекле:

1. Этиловый спирт – 20-25 мин.

2. Метиловый спирт – 3-5 мин.

3. Смесь Никифорова – 10-15 мин.

4. Краска-фиксатор Май-Грюнвальд – 3 мин.

4. Окраска мазков.

1. Стекла укладывают мазками вверх на "мостик" или "рельсы" над четырехугольной кюветой на небольшом расстоянии друг от друга.

2. Краску на стекла наливают пипеткой с баллоном, не касаясь поверхности мазка. На окраску мазка нужно 3-4 мл краски.

3. По истечении времени окрашивания краску с мазков смывают водой. Мазок для просушки ставят в штативы в вертикальном или наклонном положении.

5. Методы окраски мазков.

Принцип всех методов окраски основан на сочетании щелочной синей краски – азура – с кислой краской – эозином. Структурные части клетки имеют различную реакцию. Они поглощают краситель противоположной реакции и им окрашиваются: щелочные части клетки окрашиваются кислой краской в красный цвет, а кислые – щелочной краской в синий цвет.

1. Окраска по Романовскому.

Краска продается в готовом виде во флаконах или в порошке, состоит из азура и эозина.

Перед работой определяют титр краски и время экспозиции, делают пробную окраску мазков в течение различного времени. Разведение, при котором получена лучшая окраска мазка, принимается за титр данной серии краски, а время окраски – как постоянная экспозиция. Эти данные указывают на этикетке бутылки. Для окраски мазка всегда используют свежеприготовленный рабочий раствор краски.

2. Окраска азур-эозином по Нохту.

Раздельно готовят два красителя: раствор желтого водного эозина (1 г в 1 л дистиллированной воды) и раствор краски азур II (1 г на 1 л дистиллированной воды). Краски вызревают 2 недели в темном месте при периодическом помешивании.

Для окраски готовят рабочий раствор: азура II – 25 мл, эозина – 20 мл, дистиллированной воды или буфера – 55 мл.

Продолжительность окраски зафиксированного мазка – 2-30 мин.