2. Контроль качества лс, содержащих аминокислоты

2.1 Внутриаптечный контроль

Химический контроль заключается в определении подлинности и количественного содержания лекарственных средств, входящих в состав препаратов.

Для выполнения качественного и количественного анализа препаратов в условиях аптеки используется экспресс-анализ. Характерная особенность данного метода: возможность проведения анализа без изъятия изготовленного лекарства.

Качественный экспресс-анализ проводят на фильтровальной бумаге, предметном или часовых стеклах, на фарфоровой лодочке или в тигле, при этом расход анализируемого вещества составляет от 0,001 до 0,01 г для порошка или от 1 до 5 капель для жидкости.

Количественный экспресс – анализ в условиях аптеки предусматривает определение содержания ингредиентов в лекарствах титриметрическими и физико-химическими методами.

Внутриаптечному контролю подвергаются гамма-аминомасляная кислота, глицин, цистеин.

Испытания на подлинность

Гамма-аминомасляная кислота

Для испытания на подлинность аминокислот используют общую цветную реакцию с нингидрином. В результате реак­ции образуется аммонийная соль енольной формы дикетогидринденкетогидринамина, имеющая сине-фиолетовую окра­ску:

Цистеин

Реакция Фоля. При щелочном гидролизе «слабосвязанная сера» в цистеине легко отщепляется, в результате чего образуется сероводород, который, реагируя со щелочью, дает сульфиды натрия или калия. При добавлении ацетата свинца(II) образуется осадок сульфида свинца(II) серо-черного цвета.

Глицин

Реакция комплексообразования. Аминокислоты образуют с катионами тяжелых металлов внутрикомплексные соли. Со свежеприготовленным гидроксидом меди (II) в мягких условиях аминокислоты дают хорошо кристаллизующиеся внутрикомплексные соли меди (II) синего цвета:

Количественный анализ

Фармакопейные статьи (ФС) для количественного определения аминокислот рекомендуют использовать метод кислотно-основного титрования в смешанных растворителях [2]. Данный метод применим в экспресс-анализе для всех аминокислот. Метод основан на реакции нейтрализации. В водной среде титрование аминокислот осуществимо только при использовании специальных методов обнаружения конечной точки (например, потенциометрического метода). Титрант – гидроксид натрия, конечную точку титрования определяют потенциометрически. F_э=1.

Количественное определение кислоты гамма-аминомасляной выполняют по ФС методом неводного титрования. Метод основан на усилении основных свойств. Титруют раствором хлорной кислоты в среде ледяной уксусной кислоты (индикатор кристалличе­ский фиолетовый). F_э=1.

2.2 Анализ лс заводского производства

Определение подлинности

Инструментальные методы анализа. Метионин и кислоту глутаминовую идентифицируют с помощью ИК-спектров по совпадению полос поглощения в об­ласти 4000-400 см^-1 с прилагаемыми к ФС рисунками спектров. УФ-спектр поглощения цистеина имеет максимум погло­щения при 236 нм. Удельный показате­ль поглощения равен 690 [5].

Реакции на подлинность.

Для определения подлинности аминокислот используют реакцию взаимодействия с солями меди (II). Аминокислоты образуют комплексные соединения, имеющие темно-синюю окраску:

Серосодержащие аминокислоты при установлении подлинности подвергают некоторым дополнительным испытани­ям. Наличие тиогруппы в молекуле цистеина можно установить цветной реакцией в щелочной среде с нитропруссидом на­трия (красно-фиолетовое окрашивание). Для обнаружения тиометильной группы в метионине его сплавляют с 30%-ным раствором гидроксида натрия. Происходит разрушение молекулы метионина с образованием производных меркаптана и сульфидов. Последние можно обнаружить цветной реакцией с нитропруссидом натрия (красно-фиолетовое окрашива­ние) или по запаху сероводорода и меркаптана, образующихся после добавления серной кислоты:

Тиогруппу в молекуле цистеина и ацетилцистеина подтверждают цветной реакцией с хлоридом железа (III) по появле­нию синего быстро исчезающего окрашивания или используют в качестве реактива нитрит натрия в присутствии уксус­ной кислоты (красное окрашивание). При действии на растворы цистеина и ацетилцистеина селенистой кислотой выпа­дает красный осадок. Цистеин при действии м-динитробензолом в присутствии гидроксида натрия приобретает желтое окрашивание. Метионин с 10%-ным раствором ацетата натрия и 2,5%-ным раствором ацетата меди образует сиренева­то-синий осадок. Цистеин в этих условиях дает черный осадок, а кислоты гамма-аминомасляная и глу­таминовая не осаждаются. Цистеин и пеницилламин восстанавливают фосфорновольфрамовую кислоту, появляется си­нее окрашивание [5].

При нейтрализации раствора аминокислоты 0,1 М раствором гидроксида натрия по фенолфталеину до розово­го окрашивания, а затем добавлении нейтрализованного (по этому же индикатору) раствора формальдегида, происходит обесцвечивание полученной смеси. Такое испытание рекомендовано ФС для подтверждения подлинности некоторых аминокислот. Оно основано на связывании аминогруппы формальдегидом до образования N-метилиденового производного (азометина) и демаскировании кислотных свойств аминокислоты:

Количественное определение

Для количественного определения аминокислот и их синтетических аналогов могут быть использованы различные ме­тоды. Одним из них является метод, основанный на определении азота в органических соединениях (метод Кьельдаля).

Метод основан на предварительной минерализации азотсодержащего органического соединения до гидросульфата ам­мония. Определение выполняют с помощью прибора, состоящего из колбы Кьельдаля, парообразователя, холодильника, приемника. Используют упрощенный вариант метода Кьельда­ля, исключающий стадию минерализации. Методика сводится к гидролизу амида в колбе Кьельдаля 30% раствором гид­роксида натрия, отгонке выделяющегося аммиака или амина в приемник и титровании отгона 0,1 М хлороводородной кислотой. Титрант – борная кислота, индикатор – бремкрезоловый зеленый, f_э=1.

Параллельно выполняют контрольный опыт [2].

Для количественного определения аминокислот используют также метод Серенсена (формольное тит­рование). Тритруют раствором формальдегида (нейтрализованного по фенолфталеину). Метод основан на связывании аминогруппы формальдегидом. F_э=1.

Серосодержащие аминокислоты (цистеин, пеницилламин, метионин) определяют йодометрическим методом. Цистеин и ацетилцистеин титруют в кислой среде 0,1 М раствором йода. Индикатор – крахмал, f_э=1/2. Определение основано на окислении сульфгидрильных групп по общей схеме:

Метионин (по ФС) предварительно растворяют в смеси растворов монокалийфосфата и дикалийфосфата (одно- и дву- замещенного фосфата калия) в присутствии йодида калия, а затем окисляют 0,1 М раствором йода (индикатор крахмал, f_э=1/2.) по схеме:

Йодхлорометрическое титрование основано на окислении метионина до соответствующего сульфоксида. Титруют йодхлором, индикатор – крахмал. F_э=1.Избыток титранта оттитровывают натрия тиосульфатом.