III. Качественные реакции на растительное сырье

IV. Возможные примеси к лрс.

V. Числовые показатели (для цельного сырья)

Наименование показателя	Норма

VI. Метод количественного определения действующих веществ

VII. Заготовка лекарственного растительного сырья

Ресурсы
Время заготовки
Особенности заготовки, охранные мероприятия

VIII. Хранение лекарственного растительного сырья

Список хранения
Особенности хранения
Срок годности

IX. Фармакологическая группа тема 1: качественное и количественное определение антраценпроизводных в лекарственном растительном сырье

Цель занятия: научиться проводить качественный и количественный анализ лекарственного растительного сырья, содержащего антраценпроизводные.

Вопросы для самоподготовки к занятию

1. Какие природные вещества называются антраценпроизводными?

2. Что лежит в основе классификации антраценпроизводных, на какие группы их разделяют?

3. В каком виде находятся антраценпроизводные в растениях? Какие факторы влияют на накопление антропроизводных в растениях?

4. Перечислите физико-химические свойства свободных антраценпроизводных и их гликозидов?

5. Чем обусловлена растворимость свободных антраценпроизводных в вводных растворах щелочи?

6. Какими методами проводят экстракцию антрагликозидов из растительного сырья?

7. Какими методами проводят очистку извлечения антрагликозидов от сопутствующих веществ?

8. Какими качественными реакциями можно определить присутствие антраценпроизводных в растительном сырье?

9. Какие методы используют для количественного определения антраценпроизводных в растительном сырье?

10. Напишите формулы следующих соединений: антрацен, антрахинон, антранол, антрон, хризарин, франгуллоэмодин, хризофановая кислота, Алоэ-эмодин, реин, ализарин, эмодин-антрон, гиперицин.

Самостоятельная работа студентов на занятии

Задание 1. Реакция Борнтрегера

Проведите реакцию Борнтрегера, заполните таблицу и сделайте вывод о содержании и типе антраценпроизводных в растительном сырье.

№	Этап реакции	Наблюдения	Сущность этапа реакции
1.

Методика проведения реакции

1. 0,2 г измельченного сырья кипятят в течение 2 мин с 5 мл 10% едкого натра. После остывания смесь разбавляют 5мл воды и фильтруют.

2. 3 мл фильтрата помещают в делительную воронку, добавляют 3 мл 10% соляной кислоты и 10 мл хлороформа.

3. Осторожно перемешивают и после расслоения жидкости сливают хлороформный слой, фильтруя его через небольшой комочек ваты.

4. Фильтрат встряхивают с 10 мл 10% раствора аммиака и наблюдают появившееся окрашивание.

При наличии 1,8-диоксиантрахинонов аммиачный слой принимает вишнево-красное окрашивание, 1.4- -диоксиантрахинонов – пурпурное окрашивание, 1.2-диоксиантрахинонов - фиолетовое окрашивание.

Сущность реакции заключается в следующем: при кипячении растительного материала со щелочью происходит гидролиз антрагликозидов с образованием свободных агликонов. Одновременно антрон- и антранолпроизводные окисляются до антрахинонов. Образовавшиеся оксиантрахиноны за счет фенольных гидроксилов дают феноляты (антрахиноляты), растворимые в воде. При подкислении водно-щелочного раствора диссоциация фенольных гидроксилов подавляется, и соединения становятся липофильными, в результате чего при встряхивании с хлороформом они из водного слоя переходят в хлороформный, хлороформный слой при этом принимает желтую окраску оксиантрахинонов. При встряхивании хлороформного слоя с раствором аммиака вновь происходит образование фенолятов окрашивающих аммиачный слой.

Феноляты оксиантрахинонов имеют яркий вишнево-красный, пурпурный или фиолетовый цвет в зависимости от положения оксигрупп.

Задание 2. Реакция с 1% спиртовым раствором ацетата магния

Проведите реакцию и сделайте вывод о наличии и группе антраценпроизводных в исследуемом сырье.

Реакция основана на способности антраценпроизводных образовывать окрашенные комплексы с ацетатом магния; при этом 1,2-диоксипроизводные образуют фиолетовое окрашивание; 1,4 – пурпуровое; 1,6- и 1,8 – оранжево-красное.

Методика проведения реакции

1. 1,0 г измельченного сырья поместите в колбу объемом 50 мл со шлифом, добавьте 10 мл 95% этилового спирта и нагрейте на водяной бане с обратным холодильником 10 минут.

2. Охладите полученное извлечение.

3. К 1 мл 1 % спиртового раствора ацетата магния прибавить несколько капель извлечения из сырья. По образовавшейся окраске сделайте вывод о строении антропроизводных.

Задание 3. Сублимация антраценпроизводных

Проведите реакцию и сделайте вывод о содержании антраценпроизводных в исследуемом сырье.

Методика проведения реакции

1. Поместите на дно сухой пробирки небольшое количество измельченного сырья и, осторожно, нагрейте, держа пробирку почти горизонтально.

2. Сублимат конденсируется на холодных участках пробирки в виде желтых капель или желтых игольчатых кристаллов.

3. После остывания пробирки к сублимату прибавляют 1 каплю 5% NaOH в этиловом спирте; появляется яркое красное или фиолетовое окрашивание в зависимости от состава антраценпроизводных.

Сущность реакции: содержащиеся в растительном материале антрагликозиды при высокой температуре расщепляются с образованием свободных агликонов; одновременно производные антрона и антронола окисляются до антрахинонов, которые возгоняются.

Задание 4. Хроматографическое определение антраценпроизводных в растительном сырье

Выделите антраценпроизводные из лекарственного растительного сырья (кора крушины). Проведите обнаружение их методом тонкослойной хроматографии. Зарисуйте схему хроматограммы. Рассчитайте величину Rf . Сделайте заключение о качественном составе антраценпроизводных исследуемого сырья. Напишите схему превращения антрапроизводных в коре крушины ломкой при хранении или прогревании при 100°С.

Методика проведения эксперимента

1. 0,3 г измельченного растительного сырья нагревают с 3 мл этилового спирта в течение 5 мин, доводя до слабого кипения. После остывания фильтруют.

2. 0,1 мл извлечения наносят на линию старта и хроматографируют в системе «этилацетат : метиловый спирт : вода», взятых в соотношениях 100:17:13, на пластинках «Силуфол». Одновременно хроматографируют стандарт «свидетель», нанося его раствор рядом с исследуемым извлечением.

3. После окончания хроматографирования пластинку вынимают из камеры, отмечают линию финиша пробега растворителя, высушивают и просматривают в видимом и УФ свете до и после проявления парами аммиака или 5% NaOH в этиловом спирте.

Превращение антрапроизводных в коре крушины ломкой при хранении или прогревании при 100°С

В первичной коре крушины содержится первичный гликозид франгуларозид, который проявляет рвотное действие. Антранолы являются мобильными соединениями и способны к окислению даже кислородом воздуха. Поэтому кору крушины применяют или после годичного хранения или процесс окисления франгулоразида ускоряют нагреванием при 100°С в течение 1 часа. В итоге франгуларозид превращается в глюкофрангулин. Далее при ферментативном гидролизе от глюкофрангулина отщепляется глюкоза, биозид превращается в монозид – франгулин. В дальнейшем франгулин расщепляется на франгула-эмодин и рамнозу. Таким образом, в коре крушины, готовой к медицинскому применению, могут одновременно находиться глюкофрангулин, франгулин, франгула-эмодин. В литературе приводятся различные данные о структуре франгуларозида. Здесь франгуларозид рассматривается как биозид франгулоэмодина в восстановленной форме антрона.

Задание 5. Количественное определение антраценпроизводных в лекарственном растительном сырье

Количественное определение проводят фотоколориметрическим методом (ГФ ХI, т.2, с.231). Метод основан на способности окисленных форм производных антрацена при взаимодействии со щелочами вишнево-красное окрашивание. Определяется сумма всех агликонов, содержащихся после гидролиза антрагликозидов ледяной уксусной кислотой.

Изучите методику количественного определения антраценпроизводных в предложенных образцах сырья, содержащих производные антрацена и запишите основные этапы метода в таблицу.

№	Этап работы	Сущность этапа
1.
2.	и т.д.

Проведите количественное определение антраценпроизводных в предложенном сырье, сравните полученные результаты с данными НД и сделайте вывод о качестве лекарственного растительного сырья.

Внимание! Работу по экстракции проводят под тягой!

Методика проведения эксперимента

1. Аналитическую пробу сырья измельчают до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 1 мм. Около 0,05 г (точная навеска) измельченного сырья помещают в колбу вместимостью 100 мл, прибавляют 7,5 мл ледяной уксусной кислоты и смесь нагревают на кипящей водяной бане с обратным холодильником в течение 15 мин.

2. После охлаждения в колбу добавляют через холодильник 30 мл хлороформа и кипятят на водяной бане 15 мин. Затем извлечение охлаждают, фильтруют через вату в делительную воронку вместимостью 300 мл и вату промывают 10 мл хлороформа.

3. Вату переносят обратно в колбу, прибавляют 30 мл хлороформа и кипятят 10 мин. Охлажденное хлороформное извлечение фильтруют через вату в ту же делительную воронку.

4. Колбу дважды споласкивают хлороформом (по 5 мл) и фильтруют через ту же вату.

5. К объединенным извлечениям осторожно, по стенкам прибавляют 100 мл щелочно-аммиачного раствора и осторожно взбалтывают 5—7 минут, охлаждая воронку под струей холодной воды.

6. После полного расслоения прозрачный красный слой, не фильтруя, сливают в мерную колбу вместимостью 250 мл, а хлороформный слой обрабатывают порциями по 20 мл щелочно-аммиачного раствора до прекращения окрашивания жидкости, сливают окрашенные растворы в ту же мерную колбу и доводят объем раствора в колбе щелочно-аммиачным раствором до метки.

7. 25 мл полученного раствора помещают в колбу и нагревают 15 мин на кипящей водяной бане с обратным холодильником.

8. После охлаждения измеряют оптическую плотность раствора на фотоэлектроколориметре при длине волны около 540 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм, используя в качестве раствора сравнения щелочно-аммиачный раствор. При получении слишком интенсивной окраски раствор перед колориметрированием разбавляют щелочно-аммиачным раствором.

9. Концентрацию производных антрацена в колориметрируемом растворе определяют по калибровочному графику, построенному по растворам хлорида кобальта.

10. Содержание производных антрацена в процентах (X) в пересчете на абсолютно сухое сырье вычисляют по формуле:

С — содержание производных антрацена в 1 мл колориметрируемого раствора, найденное по калибровочному графику, в граммах; m — масса сырья в граммах; W — потеря в массе при высушивании сырья в процентах.

Примечание.

1. В методику количественного определения внесены изменения по сравнению с ГФ ХI. Диэтиловый эфир заменен на хлороформ.

2. Калибровочный график студенты получают в готовом виде. Методика построения описана в ГФ ХI издания.