0,2 М раствор кн₂ро₄: 5,444 г кн₂ро₄ растворяют в 200 мл дистиллированной воды.

Буферный раствор с рН = 7,0: в мерной колбе на 200 мл смешивают 50 мл 0,2 М раствора КН₂РО₄ и 29,1 мл 0,2 М раствора NaOH и доводят объём раствора в колбе дистиллированной водой до метки.

Ход определения. 5 г размолотого высушенного растительного материала помещают в коническую колбу на 150 мл, приливают 50 мл дистиллированной воды, закрывают пробку и встряхивают на встряхивателе в течение 30 минут. Затем полученную смесь переносят в фарфоровую чашку на марлю, уложенную в 4 слоя, и отжимают в чашку растительный экстракт, содержащий свободные аминокислоты.

При анализе сочного растительного материала (клубни картофеля, корнеплоды, овощи, плоды и ягоды) взвешенную растительную пробу растирают в фарфоровой ступке пестиком с небольшим количеством кварцевого песка до получения однородной массы, после чего приливают 50 мл дистиллированной воды и интенсивно перемешивают пестиком в течение 15 минут. Растительный экстракт по выше указанной методике отжимают через 4 слоя марли в фарфоровую чашку.

Для проведения формольного титрования в стаканчике на 100 мл смешивают 2 мл растительного экстракта, содержащего свободные аминокислоты, с 18 мл дистиллированной воды и 5 каплями раствора бромтимола синего. Если полученная смесь имеет синюю окраску, её осторожно по каплям нейтрализуют 0,05 М раствором HCl, а если жёлтую окраску – 0,05 М раствором NaOH до образования жёлто-зелёного окрашивания (рН = 7,0). При этом добиваются получения такой интенсив-ности окрашивания, как и в контрольной пробе, которую готовят в отдельном стаканчике на 100 мл, приливая в него 20 мл буферного раствора с рН = 7,0 и 5 капель раствора бромтимола синего.

В нейтрализованную до рН = 7,0 смесь приливают из мерного цилиндра 2 мл формольного реактива и титруют опытную пробу 0,05 М раствором NaOH до образования сине-фиолетового окрашивания, сравнивая интенсивность окрашивания с цветом контрольной пробы, которую готовят в отдельном стаканчике на 100 мл, приливая в него 20 мл буферного раствора с рН = 9,2, 5 капель раствора бромтимола синего и 3 капли 0,5% спиртового раствора фенолфталеина. Для введения поправки в отдельном стаканчике на 100 мл смешивают 20 мл дистиллированной воды, 5 капель раствора бромтимола синего и 3 капли 0,5% спиртового раствора фенолфталеина и полученную смесь титруют 0,05 М раствором NaOH.

Если экстракт аминокислот бесцветный и прозрачный, объём экстракта для формольного титрования можно увеличить до 5-10 мл.

Обработка и оценка результатов. Содержание азота аминокислот в растительной пробе вычисляют по следующей формуле:

(V₁  V₂) ∙ 0,7 ∙ 50 ∙ 100

СА =  ,

Н ∙ 2

где СА – содержание азота аминокислот в растительной пробе, мг%;

V₁ – объём 0,05 М раствора NaOH, затраченный на титрование опытной пробы, мл;

V₂ – объём 0,05 М раствора NaOH, затраченный на титрование 20 мл воды, мл;

0,7 – коэффициент пересчёта на азот аминокислот, мг;

50 – общий объём экстракта аминокислот, полученный из растительной пробы, мл;

100 – коэффициент пересчёта на 100 г растительной пробы;

Н – навеска растительной пробы, г;

2 – объём экстракта аминокислот, взятый для формольного титрования, мл.

Полученный результат сравнивается с литературными данными и результатами анализа других растительных образцов. На основе рассчитанного показателя делается вывод о содержании свободных аминокислот в анализируемой растительной пробе и направленности происходящих в ней биохимических процессов.