Микрофлора воды.

Микробиологические и паразитологические показатели для питьевой воды

Показатели	Единицы измерения	Нормативы
Термотолерантные колиформные бактерии (440С)	Число бактерий в 100 мл	Отсутствие
Общие колиформные бактерии (370С)	Число бактерий в 100 мл	Отсутствие
Общее микробное число	Число образующих колонии бактерий в 1 мл	Не более 50
Коли-фаги	Число бляшкообразующих единиц (БОЕ)	Отсутствие
Споры сульфитредуцирующих клостридий	В 100 мл число спор в 20 мл	Отсутствие
Цисты лямблий	Число цист в 50 мл	Отсутствие

Метод мембранных фильтров.

Мембранный фильтр помещают в воронку Зейтца, вмонтированную в колбу Бунзена, которая присоединяется к вакуумному насосу. Воду фильтруют в объеме 300 мл. Затем фильтры помещают на поверхность среды Эндо в чашки Петри и после инкубации при 37⁰С в течение суток подсчитывают количесиво выросших колоний, типичных для БГКП.

Из 2-3 колоний красного цвета готовят мазки, окрашивают по Граму и ставят оксидазный тест, позволяющий дифференцировать бактерии родов Escherichia, Citrobacter, Enterobacter от грамотрицательных бактерий семейства Pseudomonadaceae и других оксидазоположительных бактерий, обитающих в воде. Для этого фильтр с выросшими на нем колониями бактерий переносят пинцетом, не переворачивая, на кружок фильтровальной бумаги, смоченной диметил-п-фенилендиамином. При наличии оксидазы индикатор окрашивает колонию в синий цвет. 2-3 колонии, не изменившие первоначальную окраску, засевают в полужидкую среду с 0,5% раствором глюкозы. Посевы инкубируют в течение суток при 37⁰С. При наличии газообразования подсчитывают число красных колоний на фильтре и определяют коли-индекс.

Метод бродильной пробы.

1-й день. Воду в объеме 100 мл берут 3 пробы, 10 мл (3 пробы) засевают соответственно на 10 мл и 1 мл концентрированной среды ГПС (глюкозопептонная среда) или ЛПС (лактозопептонная среда). 1 мл воды (3 пробы) засевают на 10 мл разведенной среды ГПС с «поплавками». Посевы инкубируют при 37⁰С 24 часа.

2-й день. Из всех объемов воды, независимо от результатов (кислота – газ), делают пересев на две чашки со средой Эндо (одна – с добавлением раствора основного фуксина или раствора разоловой кислоты, другая – с добавлением молока или желатина – для обнаружения протеолиза. Посевы инкубируют при 37⁰ С.

3-й день. С чашек из каждого засеянного объема отбирают 2-3 лактозоположительные, протеолизоотрицательные, оксидазоотрицательные, грам-отрицательные палочки и отвивают на полужидкий агар с глюкозой и индикатором Андреде или бромтимоловым синим (укол в столбик). Посевы инкубируют 20 часов при 37⁰С.

4-й день. Производят учет результатов. Определяют, какой объем воды на полужидком агаре с глюкозой дает образование кислоты и газа, и делают расчет коли-титра и индекса по таблице ГОСТа 48963-73.

Микробное число определяют при посеве 1мл исследуемой воды. Оксидаз ный тест позволяет отбросить оксидазоположительные колонии (псевдомонады, аэромонады, вибрионы и др.). Микроскопия мазков из колоний позволяет исключить грамположительиую споровую флору и шаровидные бактерии. Окисление глюкозы, лактозы до кислоты и газа при 37°С подтверждает принадлежность бактерий к кишечной группе.

Микрофлора пищевых продуктов

Нормативы: молоко и напитки - ОМЧ не более 75000 в 1 мл, коли-титр-не менее 3;

мясо, колбасные изделия и мясные продукты - БГКП не должны со­держаться в 1 г, сальмонеллы не должны содержаться в 25 г, протей - в 0,1 г, коагулазоположительные стафилококки - в 0,1 г, сульфитредуцирующие клостридии - в 0,1 г, ботулотоксин и клостридиум ботулинус в кон­сервах не должен присутствовать.

Ход исследования

Для определения ОМЧ пастеризованное молоко разводят стерильным вычисляют по таблице (Л. Б. Борисов и др. 1993. С. 69).

При исследовании напитков определяют ОМЧ и коли-титр по методикам исследования питьевой воды. Лимонад нейтрализуют 10% раствором гидрокарбоната натрия (проверка рН лакмусовым индикатором). Коли-титр определяют методом мембранных фильтров.

При микроскопии мяса - определяют количество бактерий в мазках-отпечатках из кусочков 2х1,5х2,5 см. Окраска по Граму. Мясо свежее, если в поле зрения не более 10 бактериальных клеток.

Для определения ОМЧ, БГКП, сальмонелл, бактерий рода Протеус, коагулазоположительных стафилококков и клостридий из глубинных участков стерильно берут навески мяса 20 г и добавляют 80 мл стерильного физ. р-ра, гомогенизируют в электрическом смесителе. 0,1 и 0,01 г продукта засевают на МПА, инкубируют 48 часов и подсчитывают число колоний.

Определение БГКП в 1 г продукта. 5 мл взвеси засевают на среду Кода (глюкозная среда), инкубируют 18 часов. БГКП меняют синий цвет среды на ярко-желтый.

Определение сальмонелл проводят посевом на среды Мюллера, Кауфмана или селенитовый бульон с последующим выделением чистой культуры.

Протей выделяют по методу Шукевича, клостридии - на среде Вильсон-Блера, коагулазоположительные стафилококки на желточно - солевом агаре.

Для выявления ботулинического токсина пробы консервов фильтруют и с фильтратом ставят реакцию нейтрализации токсина антитоксической противоботулинической сывороткой типов А,В,С,Е и F на белых мышах.