- •Общая микробиология, вирусология и иммунология
- •Тема 1: Правила работы в микробиологической лаборатории. Мир микробов.
- •I. Вопросы для самоподготовки:
- •II. Базовый текст
- •1. Правила работы в учебной бактериологической лаборатории
- •2. Мир микробов. Особенности строения про- и эукариотической клетки
- •3. Систематика и номенклатура микроорганизмов
- •4. Морфология и ультраструктура бактериальной клетки
- •6. Микроскопический метод диагностики инфекционных заболеваний
- •7. Простые и сложные методы окраски
- •8. Механизмы окрасок по Граму и Цилю-Нильсену
- •III. План практической работы
- •IV. Примеры ситуационных задач
- •Тема 2: Специальные методы окраски. Устройство биологического микроскопа. Виды микроскопии. Порядок проведения иммерсионной микроскопии
- •2. Методы окраски отдельных групп про- и эукариот
- •3. Изучение подвижности микроорганизмов
- •4. Виды микроскопии
- •5. Устройство биологического микроскопа
- •6. Порядок проведения иммерсионной микроскопии
- •III. План практической работы
- •IV. Примеры ситуационных задач
- •Тема 3: Морфология и ультраструктура отдельных групп микроорганизмов: риккетсий, хламидий, микоплазм, актиномицет, спирохет, грибов, простейших
- •I. Вопросы для самоподготовки:
- •4. Спирохеты
- •5. Грибы
- •6. Простейшие
- •III. План практической работы
- •IV. Примеры ситуационных задач
- •Тема 1: Питательные среды. Стерилизация, асептика, антисептика,
- •I. Вопросы для самоподготовки:
- •II. Базовый текст
- •2. Классификация питательных сред
- •3. Асептика и антисептика
- •4. Дезинфекция, методы и контроль эффективности дезинфекции
- •6. Методы определения эффективности стерилизации
- •8. Методы выделения чистых культур микроорганизмов
- •9. Бактериологический метод диагностики инфекционных заболеваний
- •10. Техника посева микроорганизмов
- •11. Особенности культивирования анаэробных бактерий
- •IV. Примеры ситуационных задач
6. Микроскопический метод диагностики инфекционных заболеваний
Микроскопический метод диагностики инфекционных заболеваний включает приготовление мазка, его окраску с использованием простых и сложных методов окраски, проведение иммерсионной микроскопии для изучения морфологических (формы и расположения) и тинкториальных свойств (отношение к красителю) с целью идентификации до рода (Staphylococcus, Streptococcus) или семейства (Епterobactericeae).
Первым этапом микроскопического метода является приготовление мазка (рис. 6). Мазок выполняют на чистом, обезжиренном предметном стекле, по поверхности которого капля воды должна растекаться равномерно. Для очистки стекла необходимо натереть его кусочком мыла и удалить мыло с помощью марлевой салфетки или протереть спиртом. Для приготовления мазка на обратной стороне предметного стекла маркируют зону и наносят небольшую каплю воды или изотонического раствора хлорида натрия в которой распределяют исследуемый материал. Если мазок готовят из жидкого исследуемого материала или микроорганизмов, культивированных в жидкой питательной среде, берут каплю жидкости петлей и равномерно распределяют в обозначенной зоне. Препарат высушивают при комнатной температуре на воздухе. Хорошо приготовленный тонкий мазок высыхает равномерно и быстро. Если же высушивание препарата замедлено, то препарат подогревают, держа стекло мазком вверх, в потоке теплого воздуха высоко над пламенем горелки. Это нужно производить крайне осторожно, не допуская перегревания мазка, так как при этом может произойти слишком быстрое и грубое свертывание белков в протоплазме микробов, что нарушит их структуру. Если препарат высушен не полностью, то при фиксации он окажется также испорченным. Фиксация препарата проводится с целью: 1) убить микробов и сделать безопасным дальнейшее обращение с ними; 2) прикрепить (фиксировать) мазок к стеклу, чтобы он не смывался при дальнейших манипуляциях; 3) сделать микробов более восприимчивыми к окраске, там как убитые микробные клетки окрашиваются лучше, чем живые.
Способы фиксации. Существует два основных способа фиксации: физическая (термическая) и химическая (использование фиксаторов). В практической бактериологии обычно применяют фиксацию в пламени горелки (фиксация жаром) — метод грубый, но сохраняющий морфологию и отношение к красителям у бактерий. Для этого предметное стекло в положении мазком вверх 3 раза (в течение 3-5 сек) проводят через наиболее горячую часть пламени горелки. В ряде случаев используют жидкие фиксирующие растворы (этиловый и метиловый спирт, ацетон, формалин и др.), которые предотвращают ферментативный аутолиз бактерий и стабилизируют макромолекулы путем их химического сшивания, оказывая более щадящее действие. Для проведения химической фиксации препараты погружают в раствор фиксирующей жидкости на 5-20 минут. Выбор способа фиксации зависит от окрашиваемого препарата (жидкие фиксаторы используются для мазков крови, гноя и др.) и метода окраски.
Рис. 6. Схема проведения микроскопического метода