Глава 5

МОДУЛИРУЮЩЕЕ ДЕЙСТВИЕ ПЕПТИДОВ

ПРИ НАРУШЕНИИ НЕЙРОЭНДОКРИННЫХ СВЯЗЕЙ

5.1. Теоретические предпосылки

Изучение структурно-функциональной организации и механизмов регуляции систем жизнеобеспечения в норме и при развитии патологического процесса является одной из фундаментальных проблем современной биологии и медицины. Выяснение этих основополагающих вопросов расширяет возможности практической медицины, поскольку позволяет проводить профилактические, диагностические и лечебные мероприятия, максимально учитывая индивидуальные особенности организма.

Обеспечение постоянства внутренней среды организма (гомеостаза) осуществляется сложным комплексом реакций, которые предполагают тесное взаимодействие нервных и эндокринных механизмов регуляции. Нейроэндокринной системе отводится роль главного интегрирующего звена в развитии местных и общих компенсаторно-приспособительных реакций всех структурных уровней [8, 9, 17, 18].

Структурная организация и функционирование нервной и эндокринной систем характеризуются тем, что нейроны, сохраняя специфические особенности нервной регуляции (способность образования и распространения нервных импульсов), могут одновременно функционировать и как клетки, секретирующие пептидные гормоны. То же самое можно сказать и о некоторых клетках иммунной системы, поскольку участвуя в регуляции гомеостаза через образование антител, они одновременно способны секретировать пептиды, близкие по аминокислотному составу к нейропептидам. Наличие рецепторного аппарата к гормонам, нейромедиато-рам и нейропептидам у различных клеток-мишеней обеспечивает тесное взаимодействие нервной, эндокринной и иммунной систем регуляции гомеостаза, что позволило ввести в

108

научную лексику термин «нейроиммунноэндокринология» [2, 3].

Как уже отмечалось в гл. 2, принципиально новая оценка механизмов регуляции гомеостаза связана с открытием системы клеток, способных к поглощению предшественников биогенных аминов и их последующему декарбоксилиро-ванию с образованием биогенных аминов и пептидных гормонов — APUD-системы (или в более широком плане диффузной нейроэндокринной системы — ДНЭС). Клетки, объединенные в ДНЭС, образуют внутри нее два морфо-функциональных отдела. К первому (центральному) относятся нейросекреторные клетки гипоталамуса, гипофиза, эпифиза. Второй (периферический) отдел включает все ней-роэндокринные клетки, расположенные вне этих органов: в желудочно-кишечном тракте, поджелудочной железе, щитовидной железе, других висцеральных органах, что позволило рассматривать все основные механизмы регуляции жизнедеятельности, как звенья единого биохимического процесса [13,27,39].

В последние годы большой интерес исследователей вызывает изучение роли пинеальной железы (эпифиза) в системе гормональной регуляции в норме и патологии, что связано с установлением широкого спектра биологических эффектов его основного гормона — мелатонина, и прежде всего его значения как основного регулятора биологических ритмов [29—31, 33, 40]. Известно, что для изучения гормональных связей и функций часто используются эксперименты с искусственным моделированием гипер- и гипофункции эндокринных органов. Широкое распространение получили эксперименты с экстирпацией того или иного органа. Так, в частности, именно благодаря пинеалэктомии была установлена функциональная связь эпифиза с различными эндокринными и неэндокринными органами. Однако полученные результаты нередко оказывались диаметрально противоположными. Это объясняется сложностью изучения гомеостаза и необходимостью учитывать разнообразные изменения в организме в конкретный промежуток времени и при определенной ситуации. Большинство работ посвящено исследованию эффектов действия мелатонина и других гормонов индольной природы на гонады, гипофиз, поджелудочную железу, кишечник и пр. [4, 7, 14—16, 26, 29, 40]. Значение пептидов, синтезирующихся в пинеальной железе, в осуществлении функциональных связей с другими эндокринными и иммунными органами изучено в меньшей степени. Немно-

109

гочисленны работы, отражающие место и роль эпифиза, как оставного звена ДНЭС. В частности, недостаточно исследо-ваны морфо-функциональные связи эндокринных клеток желудочно-кишечного тракта с пинеальной железой, хотя известно, что ЕС-клетки желудка и кишечника, подобно пи-неалоцитам, синтезируют экстрапинеальный мелатонин и его основной предшественник — серотонин. Кроме того, из-вестно, что клетки ДНЭС чутко реагируют на самые незначи-тельные нарушения микроокружения изменением уровня продукции и скорости секреции гормонов, что позволяет мгновенно регулировать тканевой гомеостаз того или иного органа и обеспечивать оптимальное функционирование со-ответствующих паренхиматозных клеток в конкретной си-туации, поэтому поиски средств, влияющих на регуляторные системы, имеют огромное прикладное значение.

Пинеальная железа представляет собой типичный пример эндокринной железы, входящей в ДНЭС и функционирующей как нейроэндокринный модулятор, — орган, который выделяет гормоны в ответ на поступление нервного импульса [24, 25, 29, 40]. Гормонально-активные вещества пинеальной железы мож-но разделить на три группы: пептиды и индолы, продуцируе-мые пинеалоцитами в самом органе; вещества, синтезируемые в его симпатических нервных терминалях; вещества пептидной природы, проникающие в эпифиз из кровотока, в частности аденогипофизарные и гипоталамические гормоны [5, 25, 26]. следовательно, широкий спектр биологически активных ве-ществ, присутствующих в пинеальной железе, оказывает мно-гообразные влияния на деятельность нервной, эндокринной, иммунной и других систем организма. Такие многоплановые эффекты вызывают устойчивый интерес к изучению механиз-мов действия эпифизарных гормонов и поискам средств, способных осуществлять регуляторные воздействия на раз-личные структурные уровни для практического использова-ния в медицине [4, 5, 22, 30]. В настоящее время получены убедительные доказательства присутствия в организме цито-мединов — пептидных биорегуляторов, которые способны осуществлять информационную связь между различными клеточными группами и, таким образом, влиять на их функ-циональную активность [6, 12, 22]. Цитомедины удалось вы-делить из тимуса, гипофиза, семенников, легких, сосудов и других органов. В различных цитомединах были обнаружены фракции пептидных комплексов с общими физико-химиче-скими свойствами, что объясняет не только их специфиче-ское, но и неспецифическое действие.

10

Клинический опыт использования цитомединов свидетельствует о перспективности их применения для лечения различных патологических процессов, оптимизация эффективности которого требует учета индивидуальных особенностей организма и нуждается в детальном изучении механизмов действия данного класса соединений.

Эпиталамин — цитомедин, выделенный из эпиталамо-эпифизарной области, получил широкое распространение в клинической практике [12]. Недавно на основании аминокислотного анализа эпиталамина синтезирован пептид — эпиталон (Ala-Glu-Asp-Gly). Изучение функциональной активности эпиталамина и эпиталона позволило предположить более высокую биологическую активность эпиталона [21, 22]. Исходя из вышеизложенного, нами проведен сравнительный анализ возможного компенсаторно-адаптационного действия эпиталамина и эпиталона на клеточный и тканевый гомеостаз у крыс после пинеалэктомии.

5.2. Методологические аспекты исследования

Исследования выполнены на самцах крыс линии Вистар. Животные содержались в обычных условиях вивария при естественном освещении и сбалансированном рационе питания в осенне-зимний период времени (ноябрь—декабрь). В эксперименте были сформированы 7 групп по 5 животных. В 1-ю (контрольную) группу вошли интактные крысы. У животных 2—7-й групп была проведена пинеалэктомия (ПЭ). Удаление пинеальной железы проводилось под эфирным наркозом по разработанной нами методике (рис. 3).

По средней линии головы производился разрез кожи длиной 1—1.5 см для обнажения крыши черепа. Над местом слияния синусов высверливалось отверстие с помощью специально изготовленного из металлической трубки полого бура диаметром 0.5 см. Пинеальная железа извлекалась через отверстие в черепе с помощью глазного пинцета, а трепанаци-онное отверстие закрывалось извлеченным из бура костным фрагментом. Кожный разрез ушивали шелковыми нитями.

Начиная с 21-х сут после операции, животным 2-й и 3-й групп ежедневно в течение 10 дней подкожно вводили изотонический раствор NaCl по 0.5 мл. Крысам 4-й и 5-й групп в эквивалентном объеме раствора по такой же схеме вводили эпиталамин в разовой дозе 0.5 мг, а животным 6-й и 7-й групп — эпиталон в дозе 0.5 мкг на крысу. Животные контро-

111

Рис. 3. Схема выполнения операции эпифизэктомии.

льной группы были выведены из эксперимента одновременно со 2, 4 и 6-й опытными группами на 33-и сут после ПЭ (3-й сут после окончания введения препаратов), а от животных 3, 5 и 7-й групп — на 42-е сут после ПЭ (12-е сут после окончания введения препаратов).

Взятие материала (желудок, щитовидная железа, поджелудочная железа и селезенка) выполнено утром (с 10.00 до 12.00 ч) при естественном освещении под нембуталовым наркозом (50 мг/кг). Кусочки селезенки фиксировали 24 ч в кислой жидкости Буэна. Парафиновые срезы толщиной 7 мкм помещали на предметные стекла, покрытые пленкой из по-ли-Ь-лизина («Sigma»). Общую гистологию внутренних органов изучали на срезах, окрашенных гематоксилином и эозином. Общую популяцию нейроэндокринных клеток в пило-рическом отделе желудка выявляли аргирофильным методом по Гримелиусу [11].

В сравнении с гистохимическими, методы иммуногисто-химии являются предпочтительными, поскольку позволяют с высокой избирательностью выявлять в тканях, клетках и внутриклеточных структурах молекулярные компоненты, обладающие антигенными свойствами [10, 11], поэтому количественный анализ клеток ДНЭС проводился после их имму-ногистохимической идентификации.

Иммуногистохимическое выявление ЕС-клеток осуществляли с помощью мышиных моноклональных антител к серо-тонину (Dako, титр 1:15). Реакцию идентифицировали ави-дин-биотин-пероксидазным (АБП) методом (Vectastain kit). Иммуногистохимические исследования других клеток ДНЭС выполнены с помощью поликлональных кроличьих антител к кальцитонину (BioGenex, титр 1 : 40), глюкагону (Dako, титр 1 : 40), соматостатину (Dako, титр 1 : 40) и АБП методу (Sigma kit для выявления кроличьих иммуноглобулинов).

112

Для иммуноокрашивания пролиферирующих клеток использовали мышиные моноклональные антитела к пролифе-ративному клеточному ядерному антигену (PCNA — аббревиатура от английского названия антигена Proliferating Cell Nuclear Antigen) при разведении 1 : 50 (клон РС10, Calbioc-hem) и биотин-стрептавидин-пероксидазный набор для выявления мышиных иммуноглобулинов (ICN). Ig-содержащие клетки идентифицировали набором для выявления крысиных иммуноглобулинов (BioGenex).

Морфометрические исследования выполнены с помощью системы компьютерного анализа микроскопических изображений (IMSTAR S. А.) с применением прикладных лицензионных программ Morphostar-2 и Colquant-2 (IMSTAR S. A.), согласно основным принципам стереологии в морфометрии [1]. В работе использовали следующие стереологические параметры: S_T — тестовая площадь 1 поля (мм²); А_т — общая тестируемая площадь (мм²) = S_Tx количество полей; A-_t— общая площадь сечений структуры / (мм²); р — объемная плотность структур i (интегральный показатель содержания структур в объеме ткани (%)) = AJ А_т; S_t — средняя площадь сечения структуры i (мкм²); N_s — общее число сечений структур / на площади среза; N_t — количественная плотность (число сечений структур / на единицу площади среза) = NJA_T Для каждого животного подсчет соответствующих структур проводили не менее чем в 60 визуальных тестовых полях по трем срезам каждого исследуемого органа.

Подсчет количества эндокринных клеток проводили в зоне локализации нижней и средней трети желудочных желез с пересчетом на 1 мм². Для морфометрического исследования С-клеток использовали срезы, приготовленные из ткани расположенной над перешейком щитовидной железы. В поджелудочной железе измерения производили в селезеночном отделе. Среднюю площадь лимфатических фолликулов, реактивных центров и ширину маргинальной зоны определяли на уровне максимальных диаметров фолликулов, определенных по серийным срезам селезенки. Тестовая площадь для изучения количественной плотности PCNA-положительных ядер, митозов и апоптоза лимфоцитов в центрах размножения фолликулов включала не менее 2000 ядер клеток, окрашенных гематоксилином. Для оценки соотношения митоти-ческой активности и апоптотической гибели лимфоцитов использовали индекс /_М/А = N_MViT I ./V_AnonT. Лимфоциты, погибающие путем апоптоза в герминативных центрах фолликулов, определяли по морфологическим критериям [14].

113

Тестовая площадь для определения количественной плотности PCNA-положительных ядер в зонах экстрамедуллярного кроветворения составляла не менее 1 мм², а для объемной плотности Ig-позитивных клеток — не менее 2.5 мм². Для статистической обработки полученных результатов использовали непараметрический {/-критерий Манна-Уитни.

5.3. Компенсаторное действие пептидов при пинеалэктомии

При окраске гематоксилин-эозином поверхность слизистой оболочки желудка контрольных животных соответствует вариантам нормы. С помощью аргирофильной реакциии Гримелиуса легко обнаруживаются эндокринные клетки, имеющие округлую или пирамидальную форму. Продукт реакции откладывается в цитоплазме в виде мелких коричнево-черных гранул. Морфометрический анализ продуктов им-муногистохимических реакций показал, что количественная плотность (ЕС-) серотонин-, (G-) гастрин- и (D-) соматоста-тин иммунопозитивных клеток в пилорическом отделе желудка интактных животных составляет 255± 10, 364±23 и 79±5 соответственно на 1 мм².

В поджелудочной железе структурная организация эндокринной части представлена в форме островков. При иммуно-гистохимическом исследовании выявлена преимущественная локализация А-клеток, содержащих глюкагон, и D-кле-ток, содержащих соматостатин, по периферии островков. Компьютерный анализ микроскопических изображений показал, что объемная плотность глюкагонсодержащих А-клеток соответствует 12.8 %, а оптическая плотность интенсивности иммуногистохимической реакции в них составляет 0.126 усл. ед. При анализе соматостатинпродуцирующих D-клеток данные показатели составляют 4.5 % и 160 усл. ед. соответственно.

В щитовидной железе большинство С-клеток располагается перифолликулярно, вплотную прилегая друг к другу. Продукт иммуногистохимической реакции выявляется в виде гранул коричневого цвета. Объемная плотность кальци-тониниммунопозитивных клеток составляет 7.7±1.2 %.

Функциональная морфология селезенки животных контрольной группы также соответствует вариантам нормы. Белая пульпа представлена совокупностью лимфоидных пе-риартериальных муфт и лимфатических фолликулов пра-

114

вильной округлой формы. Средняя площадь среза фолликулов, проходящая через герминативный центр, составляет 0.058±0.005 мм². В центрах размножения фолликулов на 1 мм² выявляется 7680±315 PCNA-положительных ядер с относительно невысокой интенсивностью иммуноокрашива-ния, 61 ±12 фигур митоза и 105±4 клеток, погибающих путем апоптоза. Динамическое равновесие делящихся и элиминирующихся клеток в герминативных зонах соблюдается при следующих условиях: 1_М/А = 0.56±0.09.

Маргинальные зоны определяются в виде перифоллику-лярных колец шириной от 70 до 90 мкм и плотно заполнены ретикулярными клетками, крупными лимфоцитами и макрофагами. В субкапсулярной зоне красной пульпы и вдоль трабекул располагаются небольшие по размерам очаги мие-лоидного кроветворения с высокой интенсивностью имму-ноокрашивания PCNA-положительных ядер, составляющих 1390±119 на 1 мм². Ig-содержащие клетки выявляются практически по всей паренхиме с тенденцией концентрироваться по периферии маргинальных зон и в виде цепочек вдоль трабекул, а их объемная плотность составляет 4.71±0.28 %.

Установлено, что после удаления пинеальной железы в нашей модификации общее количество выживших животных составило 83 %. Полученные данные свидетельствуют об участии пинеальной железы в регуляции функциональных связей с исследованными органами.

Через месяц после ПЭ при светооптическом исследовании изменений гистологического рисунка желудка на препаратах, окрашенных гематоксилин-эозином, не обнаруживается. В то же время компьютерный анализ микроскопических изображений позволил выявить значительные морфофункциональные изменения эндокринных клеток желудка по сравнению с интактными крысами. Так, количественная плотность серотониниммунопозитивных ЕС-клеток в пилорическом отделе желудка достоверно отличается от контроля и возрастает до 318±19 клеток на 1 мм², что на 25 % выше, чем у животных контрольной группы. Кроме того, отмечается нарушение соотношения между количеством G- и D- клеток преимущественно за счет сокращения гастриним-мунопозитвных клеток до 262±5 на 1 мм² и составляет 3 : 1, в то же время у контрольных животных этот показатель составлял 5:1. Результаты исследования поджелудочной железы на данном этапе показали, что ее гистоархитектоника в целом сохраняется. Компьютерный анализ микроскопических изображений не выявил существенных отличий от конт-

115

рольной группы. Объемная доля глюкагонпродуцирующих А-клеток составляет 12.2 %, а их оптическая плотность составляет 0.111 усл. ед. Со стороны соматостатинсодержащих D-клеток установлено некоторое увеличение их объемной доли (на 16 % по отношению к контролю), величина которой составляет 5.2 %, однако оптическая плотность их при этом практически не отличается от показателей контрольных животных.

Щитовидная железа через один месяц после ПЭ в основном сохраняет характерные структурные особенности. Вместе с тем количество коллоида в фолликулах уменьшается, а митотическая активность в фолликулярном эпителии несколько усиливается. Объемная плотность С-клеток возрастает по сравнению с контролем более чем на 35 %. В селезенке наиболее существенные изменения отмечаются со стороны белой пульпы. Размеры лимфоидных фолликулов и их герминативные зоны увеличиваются. В реактивных зонах отмечается достоверное увеличение числа митозов и апоптозных ядер. Увеличение /_М/А до 0.97 свидетельствует о сдвиге динамического равновесия в сторону гиперплазии лимфоидных элементов. По данным количественного анализа, достоверно снижается объемная и количественная плотность содержания Ig-позитивных клеток.

В последующем, через 42 дня после ПЭ, популяция ЕС-клеток существенно сокращается по сравнению с предыдущим сроком и по отношению к контролю, достигая 198±10. Количество G-клеток незначительно отличается от предыдущего срока, а количество D-клеток, в отличие от предыдущего срока, достоверно увеличивается по отношению к контролю и составляет 112+3 на 1 мм²- На данном этапе эксперимента нарушение соотношения между гастрин- и соматоста-тиниммунопозитивными клетками еще более усиливается.

В поджелудочной железе объемная плотность глюкагон-содержащих клеток в данный период сохраняется на уровне контрольных показателей. Такие же результаты получены и при анализе оптической плотности А-клеток. Объемная плотность соматостатинсодержащих D-клеток после ПЭ увеличивается по сравнению с контрольными значениями на 20 %, в то время как оптическая плотность их практически не отличается от контроля.

Увеличение продолжительности послеоперационного периода приводит к еще большей по сравнению с предыдущим сроком гиперплазии С-клеток в щитовидной железе, превышая контрольные показатели более чем на 45 %.

116

В селезенке периартериальные муфты и отдельные лим-фоидные фолликулы сливаются и образуют разветвленные тяжи. ^_0JI и S.р увеличиваются по отношению к контролю почти в 2 раза. В центрах размножения идентифицируются многочисленные лимфобласты; количественная плотность митозов достигает 200 на 1 мм², а /_А/м = 1.3. Маргинальные зоны выглядят более рыхлыми в основном за счет уменьшения содержания лимфоцитов. Отмечается тенденция к снижению количественной плотности PCNA-позитивных клеток в зонах миелоидного кроветворения. Содержание идентифицируемых Ig-позитивных клеток также снижено по отношению к контролю.

Итак, результаты проведенного исследования показали, что ПЭ приводит к структурно-функциональной перестройке в периферических отделах ДНЭС (эндокринные клетки желудка и С-клетки щитовидной железы), а также в иммунной системе. Степень выраженности и характер морфофунк-циональных изменений варьируют на протяжении эксперимента. Полученные результаты подтверждают работы других авторов о наличии функциональных связей между пинеаль-ной железой, клетками ДНЭС и иммунной системой [16, 31, 32, 36—38]. Вместе с тем подавляющее большинство исследований посвящено изучению роли мелатонина в восстановлении функций, нарушенных ПЭ [34, 35, 41]. Значение и роль пептидов в осуществлении регуляторных влияний пинеаль-ной железы на различные органы и системы мало изучено.

После введения изучаемых пептидов последствия ПЭ существенно изменяются. Эффект от введения эпиталамина в большей степени проявляется только через 42 дня, когда количество ЕС-клеток и G-клеток в желудке практически не отличается от контроля. Объемная плотность С-клеток в щитовидной железе также возвращается к контрольным показателям в этот период. У животных, получавших эпиталон уже на 33-й день после ПЭ, количество серотонин-, гастрин- и соматостатиниммунопозитивных клеток в 1 мм² колеблется в пределах контрольных показателей и сохраняется до конца эксперимента. Нормализуется также и соотношение между количеством G- и D-клеток. В щитовидной железе объемная плотность кальцитонинсодержащих клеток после введения эпиталона сохраняется в пределах контрольных значений на обоих этапах эксперимента. В поджелудочной железе введение пептидов не оказывает заметного влияния на исследуемые показатели, которые колеблются в пределах контрольных значений.

117

В опытах с введением эпиталамина и эпиталона существенные изменения по нормализации гистоархитектоники селезенки наблюдаются через трое суток после окончания введения препаратов у животных 4-й и 6-й групп. Лимфатические фолликулы приобретают правильную округлую форму, при этом их размеры достоверно меньше, чем у крыс 2-й группы. После инъекций эпиталамина количественная плотность делящихся лимфобластов в этот период снижается на 37 % относительно 2-й опытной группы. Отмечается «нормализация» /_М/АДО 0.77±0.07 после введения эпиталона. Вместе с тем, по данным количественного анализа, оба препарата, по-видимому, потенцируют и снижение пролиферативной активности клеток в зонах экстрамедуллярного кроветворения.

В 5-й группе пинеалэктомированных животных, получавших эпиталамин, на 42-е сут гистологическое строение селезенки и ряд количественных параметров соответствуют вариантам для крыс 4-й группы. Следует лишь отметить тенденцию к увеличению пролиферативной активности лимфоцитов в центрах размножения фолликулов как по PCNA, так и по количественной плотности митозов. Однако при одновременном увеличении содержания апоптотических клеток, /_М/А у животных этой группы снижается до 0.71 ±0.03. Прослеживается тенденция к снижению интенсивности мие-лоидного кроветворения и содержания Ig-положительных клеток. Аналогичная направленность морфофункциональ-ных изменений в селезенке регистрируется и в 7-й группе животных, получавших эпиталон. Вместе с тем на 12-е сут после окончания введения эпиталона в маргинальных зонах определяются признаки дистрофических изменений. Пери-фолликулярные кольца сужены до 51 ±2 мкм, часто выглядят размытыми, в отдельных участках сохраняется лишь ретикулярный остов. Обращает на себя внимание снижение у животных этой группы интенсивности миелоидного кроветворения в красной пульпе при реципрокном увеличении количественной плотности PCNA-положительных клеток и соответствующей направленности /_М/А в центрах размножения фолликулов.

Таким образом, после введения эпиталамина и эпиталона значительная часть последствий удаления пинеальной железы в желудке и щитовидной железе нивелируется. Вероятно, это может свидетельствовать о специфическом, заместительном, действии данных пептидов в обеспечении функциональных связей между отделами ДНЭС. При сопоставлении

118

эффектов, вызываемых эпиталамином и эпиталоном, на клетки ДНЭС отмечается их однонаправленный характер, однако, действие эпиталона наступает быстрее и выражено в большей степени, что подтверждает сведения о более высокой биологической активности эпиталона по сравнению с эпиталамином [19, 21—23]. Результаты исследования селезенки показали, что объективно регистрируемым эффектом ПЭ является гиперплазия лимфоидных клеток, снижение интенсивности миелоидного кроветворения и содержания Ig-продуцирующих клеток. По данным комплексного анализа, эпиталамин и эпиталон обладают однонаправленным, а по некоторым количественным показателям практически идентичным действием на функциональную морфологию селезенки у пинеалэктомированных животных. Оба пептидных биорегулятора ингибируют гиперплазию лимфоидных клеток в герминативных центрах фолликулов и, возможно, потенцируют снижение экстрамедуллярного кроветворения. Сравнительный анализ эффективности действия препаратов позволяет предположить, что эпиталамин обладает более пролонгированным действием. Не исключено, что усиление пролиферативной активности лимфоцитов и дистрофические изменения в маргинальных зонах через 12 сут после окончания введения эпиталона обусловлены декомпенсатор-ной реакцией лимфопоэза на ингибирующее действие этого препарата у пинеалэктомированных животных.