Стерилизация фильтрованием.

Филь­трованием стерилизуют синтетические среды строго определенного состава, которые содержат легкоразрушающи­еся или летучие компоненты — вита­мины, аминокислоты (цистеин и цистин), белки, ароматические углеводо­роды, антибиотики и др. Фильтрование жидкостей осуществляют через мелко -пористые материалы, легко адсорбиру­ющие клетки микроорганизмов: асбест, целлюлозу, фарфор, каолин и т.д.

Стерилизующими фильтрами теоретически считают такие, размер пор ко­торых не превышает 0,7 мкм. В практике же пригодность фильтров для стерили­зации устанавливают путем пробной фильтрации через них суспензии какого-нибудь мелкого микроорганизма, например Serratia marcescens. Для проверки на стерильность фильтрат в большом количестве высевают на питательную среду. Если в течение 5 сут тест-организм не вырастет, фильтры могут быть использованы для стерилизации. Широкое распространение получили мемб­ранные фильтры. Это диски разного размера, диаметра, напоминающие бумаж­ные. Их готовят на основе нитроцеллюлозы. Мембранные фильтры в зависимо­сти от величины пор применяют для фильтрования и стерилизации. Для стери­лизации используют фильтры с номера 1 до номера 4 фирмы «Владипор» (Рос­сия), фильтры с номера 5 до номера 10 фирмы «СИНПОР» (Чехия) и марок VF, VM, VC, SLGS, SLHA, DA фирмы «МИЛЛИПОР» (США).

Плотные диски, изготовленные из смеси асбеста с целлюлозой, называют­ся фильтрами Зейтца. В зависимости от диаметра пор они обозначаются разны­ми индексами: ЕК — поры диаметром 1,5 — 1,8 мкм; ЕКS — 1,2—1,5; ЕКS-1 — 1,0— 1,2; ЕКР — 0,8— 1,0 мкм. В России выпускают асбестовые фильтры марок Ф₂ и СФ. Стерилизующими являются СФ-3 и СФ-4.

Асбестовую пластинку помещают в специальный держатель, который обычно изготавливают из нержавеющей стали, и крепко зажимают винтами между верхней (цилиндрической) и нижней (воронкообразной) частями держателя. Трубка нижней части держателя через резиновую пробку проходит в колбу Бунзена. Нередко весь этот прибор в собранном виде называют фильтром Зейтца.

Для стерилизации используют стеклянные пористые фильтры, а также изготовленные из каолина с примесью кварцевого песка — «свечи» Шамберлана и из инфузорной зем­ли — «свечи» Беркефельда. Пористость пер­вых обозначается буквой L с цифрами от 1 до 13 соответственно уменьшению диаметра пор фильтра от 9 до 1,2 мкм. Мелкопористые «све­чи» обозначаются маркой В, крупнопористые - F. Фильтры Беркефельда обозначают буквами V, N, W, что соответствует следую­щим размерам пор (мкм): 8—12, 5 — 7, 3 — 4.

«Свечи» и специальные держатели с зак­репленными в них асбестовыми фильтрами герметически соединяют с колбой Бунзена для фильтрации в вакууме (рис. 4.3). Перед употреблением фильтры, их держатели и при­емник фильтрата должны быть простерилизованы.

Мембранные фильтры стерилизуют автоклавированием при 1 ати 15 мин или длительным кипячением. Держатель вместе с резиновой пробкой завора­чивают в бумагу и автоклавируют при 1 ати 20 — 30 мин. Фильтры Зейтца автоклавируют в собранном виде.

«Свечи» стерилизуют вместе с резиновыми пробками в автоклаве. Колбу Бунзена закрывают ватной пробкой, в отводную трубку вставляют тампон и стерилизуют горячим воздухом — сухим жаром.

СТЕРИЛИЗАЦИЯ ИНСТРУМЕНТОВ И ПРИБОРОВ

Мелкие металлические инструменты: петли, иглы, пинцеты, ножницы, шпатели — стерилизуют прокаливанием в пламени (т.е. нагреванием докрас­на) непосредственно перед использованием. На пламени кратковременно об­жигают предметные и покровные стекла, стеклянные шпатели и палочки, фарфоровые ступки и пестики, горлышки колб, пробирок, бутылок, а также ватные пробки при пересевах культур и разливах сред. В пламени погибают и вегетативные клетки, и споры микроорганизмов.

Наряду со стерильными одноразовыми шприцами в лабораторной практике широко распространены традиционные шприцы многократного использования. Их лучше всего стерилизовать сухим жаром при 160 °С в собранном либо в разоб­ранном виде. В первом случае длительность стерилизации 75 мин, во втором —60 мин. Собранные шприцы вместе с иглой стерилизуют в пробирке, закрытой ватной пробкой, разобранные заворачивают в бумагу или ткань. Можно стери­лизовать шприцы и в автоклаве при 1 ати в течение 15 — 20 мин. Автоклавируют их только в разобранном виде, иначе они повреждаются. Прокаливать шпри­цы нельзя, так как от этого они портятся.

Термостойкие приборы для культивирования микроорганизмов, а также детали к этим приборам, резиновые пробки и шланги стерилизуют в автоклаве. При этом емкости завертывают в бумагу. Режим автоклавирования выбирают в соответствии с термостойкостью материала, из которого сделан прибор.

Некоторые предметы (металлические инструменты, мелкие стеклянные де­тали, мембранные фильтры) иногда стерилизуют длительным (в течение 20 — 30 мин) кипячением в дистиллированной воде. Металлические и стеклянные предметы лучше всего кипятить в специальных закрытых сосудах — стерилиза­торах. Можно использовать для этой цели и металлическую посуду. Мембран­ные фильтры обычно кипятят в колбе или химическом стакане, закрытых ват­ными пробками. Однако этим способом стерилизации в микробиологической практике пользуются редко в связи с тем, что длительное кипячение может повредить обрабатываемый материал, а сокращение времени кипячения мо­жет не обеспечить стерильность, так как споры некоторых микроорганизмов способны сохранять жизнеспособность даже после длительного кипячения. Надежность стерилизации при кипячении может быть увеличена внесением в воду какого-либо бактерицидного средства: 2%-го формальдегида, 1%-й брил­лиантовой зелени или 0,1%-й сулемы. Но в этом случае возможно загрязнение биоцидами стерилизуемых предметов.