Тема: Микробиологическая диагностика гнойно-воспалительных заболеваний, вызванных стрептококками и патогенными нейссериями.
Место проведения: кафедра микробиологии, вирусологии и иммунологии.
Продолжительность: 135 мин из них самостоятельная аудиторная работа 80 мин.
Цель занятия: ознакомление с биологией стрептококков и нейссерий, основами патогенеза и клиники, основными методами микробиологической диагностики вызываемых ими заболеваний.
Мотивационная характеристика занятия: как стрептококки, так и патогенные нейссерии могут вызывать гнойно-воспалительные заболевания. В последние годы возрастает роль стрептококков в этиологии ГВЗ; появились новые клинические формы стрептококковых инфекций.
В результате занятия:
1. Студент должен знать: таксономию, номенклатуру и биологию стрептококков и нейссерий, основы патогенеза и основные клинические формы вызываемых ими заболеваний, методы микробиологической диагностики, включая правила забора материала, его транспортировки и особенностей бактериологического исследования.
2. Студент должен уметь: выбрать материал для исследования; оценивать результаты различных микробиологических методов диагностики.
3. Студент должен ознакомиться с методическими рекомендациями и таблицами по теме, бак. препаратами.
6. Таблицы по данной теме:
Морфология стрептококков;
Морфология нейссерий;
Дифференциация стрептококков;
Дифференциация нейссерий;
Схема бактериологического исследования при подозрении на эпидемический цереброспинальный менингит.
Учебные элементы:
Таксономическое положение, номенклатура и биологические свойства стрептококков и патогенных нейссерий.
Патогенез и основные клинические формы стрептококковой, менингококковой инфекций и гонореи.
Методы микробиологической диагностики стрептококковой, менингококковой инфекций и гонореи.
7. Контрольные вопросы для подготовки к занятию:
Таксономическое положение и биология стрептококков.
Факторы вирулентности стрептококков.
Патогенез и клиника стрептококковых инфекций.
Микробиологическая диагностика стрептококковых инфекций.
Таксономическое положение и биология патогенных нейссерий.
Патогенез и клиника менингококковой инфекции.
Микробиологическая диагностика различных клинических форм менингококковой инфекции.
Патогенез и клинические формы гонореи. Экстрагенитальные формы гонореи.
Микробиологическая диагностика неосложненных и осложненных форм гонореи.
Содержание самостоятельной работы студентов:
Виды самостоятельной работы:
Выполнение тестового задания и решение ситуационных задач по теме.
Решение задачи – задания с оформлением протокола бактериологического исследования крови больного с диагнозом сепсис.
Просмотр демонстрационных посевов крови в сахарном бульоне.
Описать колонии на чашках с кровяным агаром, отметить характер гемолиза.
Просмотр демонстрационных мазков.
Решение задачи – задания с оформлением протокола бактериологического исследования СМЖ больного с диагнозом менингит.
Иммерсионная микроскопия готового мазка из СМЖ с окраской по Граму.
Просмотр демонстрационных посевов СМЖ на чашке с «шоколадным» агаром с описанием колоний.
Учет биохимических тестов.
Поставить и учесть результаты реакции агглютинации по идентификации с агглютинирующими менингококковыми сыворотками серогрупп А, В, С.
Решение задачи – задания с оформлением протокола бактериологического исследования материала больного из носоглотки с диагнозом назофарингит.
Просмотр демонстрационных посевов отделяемого носоглотки на чашках с линкомицином и сывороточном агаром.
Иммерсионная микроскопия чистой кульутры менингококков.
Просмотр демонстрационных посевов, окрашенных по Граму.
Учет биохимических тестов.
Если выделена N. meningitidis – поставить и учесть результаты реакции агглютинации по идентификации с менингококковыми сыворотками серогрупп А, В, С.
Ознакомление с бак. препаратами для диагностики, лечения и специфической профилактики заболеваний, вызванных стрептококками и патогенными нейссериями.
Алгоритм целевой деятельности студентов.
Бактериологическое исследование больного с подозрением на сепсис.
Кровь больного засевают в сахарный бульон (1:10); посевы помещают в термостат. При просмотре посевов отмечают характер изменения бульона (придонно-пристеночный рост) и делают высев на кровяной агар. На следующие сутки описывают колонии, микроскопируют мазки из колоний. Если в мазках стрептококки, то определяют характер гемолиза (α-, β-, γ-гемолиз).
По виду гемолиза на кровяном агаре стрептококки можно разделить на 3 группы. Первая группа представлена β-гемолитическими стрептококками, способными вызывать полный лизис эритроцитов. При этом на КА наблюдается полное просветление среды вокруг колоний стрептококка. Вторая группа состоит из α-гемолитических стрептококков, дающих на КА неполный гемолиз в виде полупрозрачной зоны зеленоватого оттенка, обусловленный превращением гемоглобина в метгемоглобин. В третью группу входят негемолитические (γ-стрептококки) не дающие изменений КА.
Антигенная дифференциация стрептококков основана на обнаружении полисахаридного антигена клетчатой стенки с помощью иммунологических реакций, например реакции латекс-агглютинации. Эта реакция обеспечивает дифференциацию стрептококков на серогруппы A, D, C, D, F, G. Антигены из культуры стрептококка получают при помощи экстрагированных растворов. В качестве антительного препарата используют специфические кроличьи антитела к групповому антигену стрептококков серогрупп A, D, C, D, F, G, сорбированные на частицах латекса. При положительной реакции образуются мелкие четко видимые хлопья осадка.
Для микробиологической диагностики менингококковой инфекции применяют:
Бактериологическое исследование;
Серодиагностику;
Иммуноиндикацию;
ПЦР.
Основным биологическим материалом для исследования служит СМЖ и кровь. Для бактериологического подтверждения менингококкового назофарингита исследуется носоглоточная слизь.
Спинномозговая жидкость.
СМЖ отбирают у больного при пункции в объеме 2,0 – 5,0 мл при поступлении в стационар до начала антибиотикотерапии с соблюдением правил асептики. После пункции СМЖ распределяют для исследования следующим образом:
1,0 мл направляют в клиническую лабораторию для проведения общего ликворологического и цитологического исследования.
1,0 мл направляют для первичного бактериологического посева, бактериоскопии и серологических исследований.
0,5 мл засевают на чашку с «шоколадным» агаром непосредственно у постели больного. Далее чашку хранят в условиях термостата при 37˚С до доставки в лабораторию.
0,5 мл ликвора засевают в среду обогащение (5,0 мл 0,1%-го полужидкого питательного агара) непосредственно у постели больного и далее хранят в условиях термостата при 37˚С до доставки в лабораторию.
Кровь.
Кровь берут из вены при поступлении больного в стационар с соблюдением правил асептики желательно до начала антибиотикотерапии. Образцы распределяют следующим образом:
Для бактериологического посева на гемокультуру берут 5,0 – 10,0 мл крови у взрослых, 2,0 – 5,0 мл – у детей и 1,0 – 2,0 мл - у новорожденных и детей неонатального периода. Посев крови производят так же, как и СМЖ.
3,0 – 5,0 мл крови используют для серологических исследований с целью выявления специфических антигенов (встречный иммуноэлектрофорез - ВИЭФ) и специфических антител – реакция непрямой гемагглютинации РНГА.
1-2 капли крови наносят на предметное стекло для приготовления препарата «толстой кишки» крови. Каплю крови размазывают стерильной палочкой или обожженной петлей, высушивают на воздухе и, не фиксируя, в отдельном контейнере (Чашка Петри с закрытой крышкой) отправляют в лабораторию.
При подозрении на менингококкемию и при невозможности взятия крови из вены на посев делается препарат «толстой капли» крови, взятой из пальца.
Назофарингеальная слизь.
Назофарингеальная слизь с задней стенки глотки берут натощак или через 3- 4 ч после еды стерильным ватным тампоном. Материал берут с обязательным надавливанием шпателя на корень языка для наиболее полного открытия глоточного отверстия. Тампон вводят ватным концом кверху за мягкое небо в носоглотку и проводят 2- 3 раза по задней стенке. При извлечении из носоглотки тампон не должен касаться окружающих тканей (зубы, слизистая щек, язык, небный язычок). После извлечения из носоглотки слизь немедленно засевают на 2 подогретые до комнатной температуры чашки Петри (сывороточный агар с линкомицином и сывороточный агар) или помещают в транспортную среду для немедленной доставки в лабораторию, защищая от охлаждения.
Методическое и наглядное обеспечение занятия:
Методические рекомендации по теме.
Направительный бланк на бактериологическое исследование материала.
Материал на бактериологическое исследование.
Демонстрационные микропрепараты – стрептококки в гное, стрептококки в чистой культуре, гонококки в отделяемом из уретры, гонококки в чистой культуре, менингококки в СМЖ и чистой культуре.
Рост стрептококка в сахарном бульоне.
Демонстрационные посевы стрептококков на кровяном агаре.
Демонстрационные посевы менингококков на чашках с «шоколадным» агаром, с сывороточном агаром с линкомицином, с сывороточным агаром.
Биохимические тесты для дифференциации нейссерий.
Агглютинирующие менингококковые сыворотки.
Эритроцитарные менингококковые диагностикумы А и С серогрупп
Микроскопы.
Набор для постановки реакции латекс-агглютинации с целью определения серогруппы стрептококков.
Набор для постановки реакции латекс-агглютинации с целью определения наличия в СМЖ антигенов возбудителей бактериальных менингитов.
10. Литература