5.2.Определение содержания альбумина в сыворотке (плазме) крови по реакции с бромкрезоловым зеленым

Принцип метода: при взаимодействии альбумина с бромкрезоловым зеленым (БКЗ) в слабокислой среде в присутствии детергента образуется окрашенный комплекс зеленого цвета, интенсивность окраски которого прямо пропорциональна содержанию альбумина.

Условия постановки реакции:

1. Сыворотка должна быть свободной от гемолиза.

2. Билирубин до концентрации 340 мкмоль/л не влияет на определение альбумина.

3. Для построения калибровочной кривой можно пользовать­ся альбумином из набора реагентов для определения общего белка в сыворотке крови.

Реактивы:

• Уксусная кислота, 1 моль/л. В мерную колбу емкостью 1 л помещают 60 мл ледяной уксусной кислоты и доводят объем дистиллированной водой до метки.

• Едкий натр, «ч. д. а.», «х. ч.», 1 моль/л (4 г растворяют в 100 мл дистиллированной воды).

• Ацетатный буфер, 0,05 моль/л, рН = 4,2, с добавлением детергента. 0,85 г полигидроксиэтиленлаурилового эфира (Вгij-35) растворяют в 200 мл дистиллированной воды, добавляют 50 мл 1 моль/л раствора уксусной кислоты, 13,2 мл моль/л раствора едкого натра и доводят объем дистиллированной водой до 1 л. Перемешивают, проверяют рН. Реактив стабилен при хранении в холодильнике.

• Индикатор бромкрезоловый зеленый водорастворимый, «ч. д. а.», 1,2 ммоль/л. 0,429 г БКЗ растворяют в 200—300 мл дистиллированной воды в мерной колбе на 500 мл и доводят объем до метки. Реактив стабилен при хранении в холодильнике в посуде из темного стекла.

• Рабочий раствор БКЗ в ацетатном буфере. В мерную колбу емкостью 1 л помещают 85 мл 1,2 ммоль/л раствора БКЗ, доводят объем до метки ацетатным буфером с детергентом. Стабилен при хранении в холодильнике в посуде из темного стекла.

• Основной калибровочный раствор альбумина, 100 г/л. Может быть использован ампулированный 10% раствор альбумина плацентарного.

Ход исследования.

В пробирку помещают 0,01 мл сыворот­ки крови (или 0,1 мл сыворотки, разведенной в 10 раз 9 г/л раствором NaCl) и тщательно перемешивают, избегая образования пены, с 4 мл рабочего раствора БКЗ в ацетатном буфере. Через 5—10 мин измеряют абсорбцию раствора на фотоэлектроколориметре или на спектрофотометре при длине волны 630—690 нм в кювете с толщиной слоя 1 см против холостой пробы. Окраска стабильна в течение 8 ч. Холостую пробу ставят как опытную, но вместо сыворотки добавляют 0,01 мл дистиллированной воды (или 0,1 мл дистиллированной воды).

Расчет ведут по калибровочной кривой. Для ее построения готовят ряд разведений основного раствора согласно сведениям, представленным в таблице.

№	Калибровочный р-р альбумина, мл	Дист. вода, мл	Альбумин, г/л
1	0,10	0,40	20,0
2	0,15	0,35	30,0
3	0,20	0,30	40,0
4	0,25	0,25	50,0
5	0,30	0,20	60,0

Калибровочные растворы обрабатывают так же, как опытные, но вместо сыворотки используют 0,01 мл (или 0,1 мл разведен­ного в 10 раз) калибровочного раствора. Калибровочная кривая линейна до концентрации 60 г/л.

Норма содержания альбумина в сыворотке крови 35—50 г/л.

Клинческое значение.

Гипоальбуминемия (снижение концентрации альбумина) на­блюдается в результате следующих причин: 1) пониженный син­тез и повышенный катаболизм белка (цирроз печени, гематомы, хронический активный гепатит, амилоидоз печени, кахексия, злокачественные опухоли, сепсис и другие тяжелые инфекции, тиреотоксикоз, нарушение всасывания в кишечнике, кишечная непроходимость, недостаток белка в пище и др.); 2) потеря аль­бумина (нефротический синдром, амилоидоз почек, неспецифи­ческий язвенный колит, сальмонелез, кровотечения, образование экссудатов и транссудатов, целиакия, лечение цитостатиками, кортикостероидами, влияние ионизирующей радиации).

Гипопротеинемия чаще всего связана с гипоальбуминемией, а гиперпротеинемия — с гиперглобулинемией.