Контрольные вопросы

1. Перечислите виды микроскопии;

2. Расскажите устройство светового микроскопа МБР-2;

3. Раскройте принцип работы фазово-контрастного устройства;

4. Укажите, в чем заключается суть работы люминесцентного микроскопа;

5. Расскажите особенности электронной микроскопии.

Лабораторная работа № 2 приготовление препаратов для световой микроскопии

Цель работы: Приобрести навыки по приготовлению фиксированных препаратов, освоить методы прижизненного изучения бактерий.

Оборудование, материалы: Суточная бульонная культура бактерий, суточная культура бактерий на РПА, стерильные РПА, влажная камера, бактериологические петли, предметные стекла с лунками, предметные стекла, покровные стекла, пипетки, скальпели, иммерсионное масло, спиртовки, этиловый спирт 96%, раствор метиленового синего, световой микроскоп.

Теоретические сведения

Морфологические особенности клеток микроорганизмов можно изучать, используя различные методы микроскопии, а также при­меняя некоторые способы дифференциальной окраски. Выбор методов микроскопического анализа и способов окраски определя­ется конкретной целью исследования. Однако существует ряд при­емов, которые имеют принципиальное значение и лежат в основе большинства специальных методов исследования морфологии и цитологии бактерий. Это некоторые способы приготовления пре­паратов, фиксации и окраски клеток.

Препараты готовят, как правило, на предметных стеклах, тол­щина которых не должна превышать 1,2—1,4 мм. Применение бо­лее толстых стекол не позволяет получить резкое изображение краев диафрагмы осветителя в плоскости препарата, так как оно попадает в толщу стекла, что нарушает фокусировку конденсора и резко снижает четкость изображения. Чрезмерная толщина предметного стекла недопустима при работе с иммерсионным объективом, когда необходимо полностью использовать числовую апертуру системы.

Существенным моментом является подготовка поверхности предметных стекол, что особенно важно при изготовлении фикси­рованных препаратов. Поверхность стекла должна быть тщатель­но очищена и обезжирена, чтобы капля жидкости равномерно расплывалась по стеклу, а не собиралась в выпуклые, медленно высыхающие капельки. Наиболее надежный способ обезжирива­ния — обработка стекол хромовой смесью с последующим опо­ласкиванием водой и спиртом. В повседневной работе, однако, вполне достаточно бывает тщательно натереть сухое стекло мы­лом, после чего вытереть его чистой хлопчатобумажной салфет­кой. Хорошее обезжиривание достигается протиранием вымытых и высушенных стекол ватой, смоченной эфиром (после этого про­мывание водой не требуется), или обжиганием поверхности сте­кол в пламени горелки (жир при этом сгорает). Кипячение стекол в растворах щелочей не рекомендуется, так как щелочи разъ­едают стекло и поверхность его становится матовой. Хранить чистые обезжиренные стекла можно в сухом состоянии или в эта­ноле.

Покровные стекла, применяемые для приготовления препара­тов микроорганизмов, также должны быть тщательно вымыты и высушены. Толщина покровных стекол не должна превышать 0,15—0,17 мм. Более толстые стекла резко ухудшают качество получаемого изображения.