Технологічна карта практичного заняття

Етапи роботи	Години, хвилини	Навчальні посібники	Місце проведення
1. Тестовий контроль початкового рівня знань	10	Тести	Комп‘ютерна кімната
2. Опитування студентів по основним питанням теми.	10	Таблиці, схеми	Кімната для практичних занять
3. Заповнення карт програмованого контролю.	15
4. Виконання практичної частини заняття.	40	Схеми "Мікробіологічна діагностика гепатитів" діагностичні, лікувально-профілактичні препарати, слайди, тест-системи
5. Підведення підсумків заняття.	5	Таблиці, схеми

Практична робота студента

1. Виявити анти-ВГА антитіл за допомогою ІФА. Врахувати результат, внести його в протокол.

2. Вивчити тест-систему для визначення методом ІФА антитіл в сироватці крові хворого для діагностики гепатиту В.

3. Визначити наявність вірусу гепатиту В у матеріалі від хворого за допомогою ІФА. Врахувати результат, внести його в протокол.

4. Вивчити препарати для специфчної профілактики та діагностики вірусних гепатитів.

Методичні рекомендації по виконанню практичної роботи

Робота 1.

Дана тест-система ІФА використовується для виявлення анти-ВГА антитіл.

1. У лунки планшетки з адсорбованим антигеном вносять спеціальним дозатором сироватки крові від хворих.

2. Інкубують в термостаті.

3. Промивають (для видалення незв‘язаних реагентів).

4. Вносять в кожну лунку антиглобулінову сироватку, мічену пероксидозою хрону.

5. Інкубують в термостаті.

6. Промивають.

7. Вносять в кожну лунку субстрат на пероксидазу хрону та індикатор.

8. Враховують результати за допомогою спектрофотометра.

Треба зауважити, що якщо людина хвора на вірусний гепатит А, то сироватці крові є специфічні антитіла проти того антигена, що адсорбовано на дні луночок, і вони утворюють комплекс анитен+антитіло. Після додавання і приєднання АГС-Ф та суміші субстрат/хромоген, субстрат розщеплюється ферментом і змінюється колір (безкольоровий → жовтий) продукта реакції – інтесивність зафарбовування прямо пропорційна кількості зв‘язаних молекул антигена і антитіл.

Студент повинен зробити оцінку реакції, яка поставлена у планшетці, написати висновок у протоколі. У висновку студент має вказати чи виявлені анти-ВГА антитіла у хворого і чому?

Робота 2.

Студент повинен ознайомитися з компонентами тест-системи, знати принцип ІФА та мету її використання.

Робота 3.

Для підтвердження діагнозу вірусного гепатиту В використовується ІФА з метою виявлення НВsAg в дослідному матеріалі.

Метод заснований на виявленні антигенів (дослідний матеріал) за допомогою відповідних їм антитіл (на дні луночок планшетки)., кон‘югованих з ферментом-міткою. Якщо в матеріалі є НВsAg, то утворюється комплекс антитіло (на дні лунки) + антиген (в дослідному матералі), який можна виявити при додаванні суміші субстрат/хромоген, субстрат розщеплюється ферментом і змінюється колір (безкольоровий → жовтий) продукта реакції – інтесивність зафарбовування прямо пропорційна кількості зв‘язаних молекул антитіла і антигенів.

Студент повинен зробити оцінку реакції, яка поставлена у планшетці, написати висновок у протоколі.

Хворий	Матеріал
	Кров	випорожнення	Результат реакції
Хворий А.
Хворий Б.

У висновку студент має вказати у якого з хворих діагноз „Гепатит В” підтверджується і чому?

Робота 4. Вивчіть анотації, розгляньте препатати, заповніть протоколи.

Протокол 4.1. Препарати для специфічної профілактики гепатитів.

Назва препарату	Склад	Показання для використання	Який вид імунітету (за походженням) створюється в організмі після введення?

АНОТАЦІЇ

до лікувально-профілактичних препаратів до теми:: „Збудники гепатитів А, В, D, Е, С, F, G.

Лабораторна діагностика вірусних гепатитів.”

Вакцина проти гепатиту А культуральна інактивована: культуральна концентрована очищена інактивована адсорбована вакцина, що містить віруси гепатиту А, вирощені в пещеплювальній культурі клітин. Використовується для специфічної профілактики за епідпоказниками та в групах підвищеного ризику.

Генно-інженерна (рекомбінантна) вакцина проти гепатиту В: містить поверхневий HBsAg вірусу гепатиту В. Така вакцина отримується шляхом культитування дріжджевих грибів з вбудованим геном, що відповідає за синтез цього антигену, на поживних середовищах. В подальшому гриби руйнують, а HBsAg консервують. Використовується для специфічної профілактики за календарем щеплень, за едідпоказниками та в групах ризику.

Імуноглобулін людський проти гепатиту А містить антитіла до вірусу гепатиту А, отриманий з нормальної плазми дорослих людей-добровільців. Після введення створюється пасивний імунітет до 3 місяців. Використовується для екстреної профілактики гепатиту А.

Людський імуноглобулін проти гепатиту В (Росія). Препарат уявляє собою очищену фракцію імуноглобулінів, виділених методом фракціонування етанолом з плазми або сироватки донорів, що містять специфічні антитіла до поверхневого антигену вірусу гепатиту В. Препарат призначений для пасивної профілактики в групах «високого ризику».