
- •Методические указания
- •1. Приготовление препаратов микроорганизмов
- •1.1. Приготовление препаратов живых клеток
- •1.2. Приготовление препаратов фиксированных клеток
- •1.2.1. Приготовление мазка
- •1.2.2. Высушивание мазка.
- •1.2.3. Фиксация мазка.
- •1.2.4. Окраска мазка
- •Устройство микроскопа мбр-1
- •Микробиологическая лаборатория
- •2. Подготовка микробиологической лаборатории к работе
- •Правила работы в микробиологической лаборатории
- •Ведение лабораторных записей
- •Аппараты, приборы, посуда и инвентарь
- •Техника безопасности на биотехнологическом
- •Лабораторная работа № 3 приготовление питательных сред для культивирования микроорганизмов
- •1. Питательные среды
- •2. Уплотнители сред
- •3. Осветление сред
- •Список рекомендуемой литературы по теме занятия:
- •Лабораторная работа № 4 морфология бактерий
- •Ход работы
- •Культуральные и морфологичекие признаки
- •2. Окраска микроорганизмов по граму
- •Ход работы
- •Приготовление мазка
- •2. Фиксация мазка
- •3. Окрашивание препарата
- •Краткая характеристика молочнокислых бактерий
- •2. Практическое использование молочнокислых бактерий
- •Ход работы
- •1. Приготовление препарата молочнокислых бактерий
- •2. Определение кислотности молока
- •Вопросы для самопроверки
- •Список рекомендуемой литературы:
- •2.Теппер е.З., Шильникова в.К. Практикум по микробиологии. М.: Колос,- 1979.-216 с. Лабораторная работа № 7 изучение биологии возбудителей маслянокислого брожения
- •1. Понятие о маслянокислом брожении
- •Культуральные и морфологические признаки
- •3. Роль в природе
- •4. Использование клостридиев в биотехнологии
- •Ход работы
- •1. Выращивание маслянокислых микроорганизмов
- •2. Микроскопирование маслянокислых микроорганизмов
- •3. Качественные реакции на масляную кислоту.
- •3.1. Получение маслянокислого железа
- •3.2. Получение масляноэтилового эфира
- •Вопросы для самопроверки
- •Краткая характеристика морфологии актиномицетов
- •2. Практическое значение актиномицетов
- •2.1. Значение актиномицетов в обеспечении плодородия почв
- •2.2. Использование представителей актиномицетов в биотехнологии
- •2.3. Актиномицеты как возбудители заболеваний
- •Ход работы
- •1. Приготовление препарата
- •2. Фиксация мазка
- •3. Окрашивание препарата
- •Список рекомендуемой литературы:
- •Лабораторная работа № 9 изучение морфологии грибов как объекта биотехнологии
- •Краткая характеристика морфологии грибов
- •2.Практическое значение грибов
- •2.1. Использование плесневых грибов в биотехнологии
- •4 . Приготовление препаратов плесневых грибов
- •Ход работы
- •Приготовление препаратов дрожжей и их изучение ход работы
- •Морфология простейших
- •2. Простейшиекак возбудители заболеваний
- •Простейшие как объект биотехнологии
- •Ход работы
- •Ход работы
- •Ход работы
- •Микроскопирование аэробных целлюлозоразрушающих микроорганизмов.
- •Список рекомендуемой литературы
- •Лабораторная работа № 13 изучение морфологии азотфиксирующих микроорганизмов
- •Свободноживущие азотфиксаторы
- •2.Симбиотические азотфиксаторы
- •Ход работы
- •Микроскопирование свободноживущих азотфиксирующих
- •Изучение морфологии симбиотических азотфиксирующих
- •Цель работы: ознакомиться с микробиологическими методами исследования почвы.
- •Ход работы
- •Отбор и подготовка почвенного образца для микробиологического анализа
- •2. Техника посева
- •Общие представления о микробиологических методах
- •2. Посев на плотные среды
- •3. Методы количественного учета микроорганизмов
- •3.1. Подсчет клеток в счетных камерах
- •3.2. Подсчет клеток в капиллярах Перфильева
- •Подсчет клеток на фиксированных окрашенных мазках
- •3.4. Подсчет клеток на мембранных фильтрах
- •Определение количества клеток высевом на плотные
- •Определение количества клеток высевом в жидкие среды
- •4. Микробиологические методы исследования воды
- •4.1. Отбор проб воды
- •4.2. Методы определения микробного числа
- •Ход работы
- •Цель работы: ознакомиться с основными микробиологическими методами исследования воздуха.
- •Метод оседания
- •Аспирационные методы
- •Ход работы
Правила работы в микробиологической лаборатории
В микробиологической лаборатории работают в белых халатах, косынках или шапочках. На рабочем столе не должно быть лишних предметов. Пробирки и колбы с культурами микроорганизмов должны иметь четкие надписи чернилами по стеклу, емкости с реактивами и растворами - этикетки. При работе нельзя зажигать спиртовку от другой горящей спиртовки. При воспламенении ватных пробок на них не дуют, так как это усиливает горение. Для предупреждения доступа воздуха горящие пробки вводят в пробирки, колбы или накрывают сверху полотенцем.
По окончании работы загрязненную микроорганизмами посуду немедленно стерилизуют кипячением или автоклавированием, чтобы уничтожить живые клетки, и только после этого ее можно мыть. Поверхность плотных сред с микробами заливают дезинфицирующим раствором. Через сутки среды можно выбрасывать и мыть посуду. Посуду моют только в резиновых перчатках. Неаккуратное обращение с микроорганизмами может привести к образованию в воздухе микробного аэрозоля.
При работе с бактерицидными лампами пользуются темными или простыми защитными очками. Нельзя смотреть на свет лампы незащищенными глазами, так как это может привести к потере зрения.
Строгого соблюдения правил предосторожности требует обращение с аппаратами, работающими под давлением, напряжением или при высокой температуре.
В лаборатории не разрешается курить, есть, пить, много ходить, вносить в нее посторонние предметы. Категорически запрещается выносить микробные культуры за пределы лабораторного помещения.
Следует строго соблюдать личную гигиену: тщательно дезинфицировать и мыть руки с мылом после окончания работы и перед едой.
В специальном журнале студенты и сотрудники делают запись о проведении инструктажа и ознакомлении с режимом работы в лаборатории.
Ведение лабораторных записей
Журнал лабораторных работ является документом, позволяющим контролировать правильность полученных данных. В нем должны быть записаны сведения, имеющие отношение к выполнению данной работы. Запись необходимо вести аккуратно, четко и в определенном порядке, например:
Название опыта, дата его постановки и окончания.
Объект исследования.
Условия проведения опыта.
Основной принцип используемого метода анализа.
Полученные результаты.
Цифровой материал приводят в таблицах. Если необходимо, делают графики, диаграммы, рисунки. Каждая лабораторная работа должна заканчиваться собственными наблюдениями и выводами, записанными в журнале.
Аппараты, приборы, посуда и инвентарь
микробиологической лаборатории
Аппараты и приборы. Термостаты предназначены для выращивания микроорганизмов на питательных средах при постоянной заданной температуре. В лаборатории устанавливают несколько термостатов с разной температурой, благоприятной для развития отдельных групп микроорганизмов: мезофилов -28-300С, термофилов - 43-550С, патогенных видов - 370С.
Автоклавы служат для стерилизации посуды, питательных сред и других материалов насыщенным паром под давлением выше атмосферного.
Сушильный шкаф с терморегулятором предназначен для сушки и стерилизации лабораторной посуды, для высушивания различных материалов до постоянной массы.
Холодильник используют для хранения при температуре около +40С музейных и рабочих культур микроорганизмов, питательных сред, некоторых реактивов и растворов.
Рефрактометр используют для определения содержания сухих веществ, сахаров, спиртов, аминокислот, витаминов, экстрактивных веществ.
Посуда. Для микробиологических исследований необходима различная стеклянная посуда. Чашки Петри применяют для выделения чистых культур, количественного учета микроорганизмов, анализа микрофлоры на плотных питательных средах и других исследований; колбы Виноградского, плоские бутыли – матрацы, качалочные колбы –для выращивания аэробных микроорганизмов; пробирки и колбы с поплавками - для изучения процессов брожения. Кроме специальной микробиологической посуды широко используют обычную химическую посуду.
Инвентарь. В микробиологической практике применяют петли, иглы, пинцеты, ножницы, сверла для пробок, металлические цилиндры для пипеток, проволочные или металлические корзины с отверстиями для стерилизации пробирок и др.
Петли и иглы изготовляют из платиновой или хромоникелевой проволоки, которую впаивают в стеклянные или металлические держатели. Свободный конец проволоки аккуратно загибают в виде петли с плотно прижатым концом, иначе жидкость в кольце не будет удерживаться.