
- •Методические указания
- •1. Приготовление препаратов микроорганизмов
- •1.1. Приготовление препаратов живых клеток
- •1.2. Приготовление препаратов фиксированных клеток
- •1.2.1. Приготовление мазка
- •1.2.2. Высушивание мазка.
- •1.2.3. Фиксация мазка.
- •1.2.4. Окраска мазка
- •Устройство микроскопа мбр-1
- •Микробиологическая лаборатория
- •2. Подготовка микробиологической лаборатории к работе
- •Правила работы в микробиологической лаборатории
- •Ведение лабораторных записей
- •Аппараты, приборы, посуда и инвентарь
- •Техника безопасности на биотехнологическом
- •Лабораторная работа № 3 приготовление питательных сред для культивирования микроорганизмов
- •1. Питательные среды
- •2. Уплотнители сред
- •3. Осветление сред
- •Список рекомендуемой литературы по теме занятия:
- •Лабораторная работа № 4 морфология бактерий
- •Ход работы
- •Культуральные и морфологичекие признаки
- •2. Окраска микроорганизмов по граму
- •Ход работы
- •Приготовление мазка
- •2. Фиксация мазка
- •3. Окрашивание препарата
- •Краткая характеристика молочнокислых бактерий
- •2. Практическое использование молочнокислых бактерий
- •Ход работы
- •1. Приготовление препарата молочнокислых бактерий
- •2. Определение кислотности молока
- •Вопросы для самопроверки
- •Список рекомендуемой литературы:
- •2.Теппер е.З., Шильникова в.К. Практикум по микробиологии. М.: Колос,- 1979.-216 с. Лабораторная работа № 7 изучение биологии возбудителей маслянокислого брожения
- •1. Понятие о маслянокислом брожении
- •Культуральные и морфологические признаки
- •3. Роль в природе
- •4. Использование клостридиев в биотехнологии
- •Ход работы
- •1. Выращивание маслянокислых микроорганизмов
- •2. Микроскопирование маслянокислых микроорганизмов
- •3. Качественные реакции на масляную кислоту.
- •3.1. Получение маслянокислого железа
- •3.2. Получение масляноэтилового эфира
- •Вопросы для самопроверки
- •Краткая характеристика морфологии актиномицетов
- •2. Практическое значение актиномицетов
- •2.1. Значение актиномицетов в обеспечении плодородия почв
- •2.2. Использование представителей актиномицетов в биотехнологии
- •2.3. Актиномицеты как возбудители заболеваний
- •Ход работы
- •1. Приготовление препарата
- •2. Фиксация мазка
- •3. Окрашивание препарата
- •Список рекомендуемой литературы:
- •Лабораторная работа № 9 изучение морфологии грибов как объекта биотехнологии
- •Краткая характеристика морфологии грибов
- •2.Практическое значение грибов
- •2.1. Использование плесневых грибов в биотехнологии
- •4 . Приготовление препаратов плесневых грибов
- •Ход работы
- •Приготовление препаратов дрожжей и их изучение ход работы
- •Морфология простейших
- •2. Простейшиекак возбудители заболеваний
- •Простейшие как объект биотехнологии
- •Ход работы
- •Ход работы
- •Ход работы
- •Микроскопирование аэробных целлюлозоразрушающих микроорганизмов.
- •Список рекомендуемой литературы
- •Лабораторная работа № 13 изучение морфологии азотфиксирующих микроорганизмов
- •Свободноживущие азотфиксаторы
- •2.Симбиотические азотфиксаторы
- •Ход работы
- •Микроскопирование свободноживущих азотфиксирующих
- •Изучение морфологии симбиотических азотфиксирующих
- •Цель работы: ознакомиться с микробиологическими методами исследования почвы.
- •Ход работы
- •Отбор и подготовка почвенного образца для микробиологического анализа
- •2. Техника посева
- •Общие представления о микробиологических методах
- •2. Посев на плотные среды
- •3. Методы количественного учета микроорганизмов
- •3.1. Подсчет клеток в счетных камерах
- •3.2. Подсчет клеток в капиллярах Перфильева
- •Подсчет клеток на фиксированных окрашенных мазках
- •3.4. Подсчет клеток на мембранных фильтрах
- •Определение количества клеток высевом на плотные
- •Определение количества клеток высевом в жидкие среды
- •4. Микробиологические методы исследования воды
- •4.1. Отбор проб воды
- •4.2. Методы определения микробного числа
- •Ход работы
- •Цель работы: ознакомиться с основными микробиологическими методами исследования воздуха.
- •Метод оседания
- •Аспирационные методы
- •Ход работы
Ход работы
Оборудование и материалы: фильтровальная бумага; микроскоп и все необходимое для приготовления препаратов; спиртовки.
Нанесите на покровное стекло каплю воды из аквариума, накройте его предметным стеклышком и внимательно рассматривайте содержимое капли под малым увеличением микроскопа (объектив 7х). Постарайтесь обнаружить в исследуемой капле наличие микроводорослей. Наблюдайте за движением обнаруженного живого объекта (объектив 40х).
Зарисуйте найденные вами объекты. Отметьте обнаруженные детали строения (вакуоли, хроматофор, жгутики, ядро и т.д.)
2 . Нанесите на предметное стекло каплю воды. Затем положите полученную культуру. Накройте покровным стеклышком и внимательно рассматривайте содержимое под объективом 40х. Зарисуйте увиденное.
СПИСОК РЕКОМЕНДУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ
Грин Н., Стаут У., Тейлор Д. Биология:В 3-х т. / Под ред. Р. Сопера. М.: Мир, 1990. Т.1. 368 с.
Вилли К. Биология. М.: Мир, 1968.
3. Градова Н.Б., Бабусенко Е.С. Лабораторный практикум по общей микробиологии.М., 1998.
Лабораторная работа № 12
ИЗУЧЕНИЕ МОРФОЛОГИИ
ЦЕЛЛЮЛОЗОРАЗРУШАЮЩИХ МИКРООРГАНИЗМОВ
Цель работы: на практике ознакомиться с культуральными и морфологическими признаками выделенных целлюлозоразрушающих микроорганизмов.
.
Наиболее распространенным углеродным соединением в природе является целлюлоза (клетчатка). Целлюлоза составляет от 15 до 60% массы растений, в хлопке и льне содержание целлюлозы достигает 80-95%.
Разложение целлюлозы микроорганизмами является самым большим по масштабам естественным деструкционным процессом, звеном круговорота углерода, обеспечивающего возврат фиксированного в процессе фотосинтеза углерода в атмосферу в виде СО2.
Глобальная роль микроорганизмов в этом процессе определяется тем, что ни животные, ни растения, как правило, не способны разлагать целлюлозу. Трансформация целлюлозосодержащих соединений в природе происходит в разных условиях аэрации, температуры, рН среды.
В природе разложение целлюлозы - это сложный, комплексный процесс, происходящий при участии сообщества микроорганизмов, в состав которого входят микроорганизмы, разлагающие целлюлозу, и микроорганизмы спутники, использующие продукты её распада.
Громадное количество клетчатки в виде растительных остатков и отходов попадает в почву и водоемы, где подвергаются биологическому расщеплению под действием ферментов анаэробных микроорганизмов.
Процесс этот происходит постепенно. Сначала клетчатка гидролизуется с образованием промежуточных продуктов целлобиозы и глюкозы. Конечными же продуктами анаэробного разложения клетчатки являются масляная, уксусная, янтарная, молочная и муравьиная кислоты, водород, углекислый газ, иногда спирт.
Возбудителями анаэробного разложения клетчатки являются микроорганизмы, относящиеся в своем большинстве к роду Clostridium. Clostridium cellulosae Omeljanskii – длинные, подвижные, грамотрицательные палочки. Расположены поодиночке или соединены в нити. Споры крупные, шаровидные, формируются на конце клетки. Гранулезу не образют.
Целлюлозолитические анаэробные микроорганизмы распространены повсеместно. Они всегда обнаруживаются в почвах, в воде, в иле прудов, а также в рубце жвачных животных. Целлюлозолитические микробы в рубце (Ruminococcus flavefaciens, Ruminobacter parvum, Bacteroides succinogenes и др.) расщепляют клетчатку до усвояемых животными форм (летучих жирных кислот). Кроме того, они синтезируют белок и витамины.
В отличие от процесса анаэробного разложения целлюлозы, который осуществляется только бактериями, в аэробных условиях клетчатку разлагают многие микроорганизмы разных систематических групп: бактерии, миксобактерии, актиномицеты, грибы.
В кислых лесных почвах главная роль в превращении целлюлозы принадлежит грибам (p. Trichoderma, p. Aspergillus, Penicillium и др., базидиальные грибы).
В почвах под травянистой растительностью, в степных и луговых ландшафтах в разложении целлюлозы помимо грибов участвуют миксобактерии, актиномицеты, вибрионы p. Cellvibrio.
Процесс аэробного разложения клетчатки – один из этапов превращения углерода в природе, а именно, процесс его минерализации и возвращения в атмосферу в виде углекислого газа.
Быстрота разложения целлюлозной части растительных остатков зависит от степени обеспечения почвы усвояемыми формами азота.
Эндоглюканаза и\или экзоцеллобиогидролаза
Схема аэробного разложения клетчатки
Общая схема аэробного разложения клетчатки такова: под влиянием комплекса ферментов происходит гидролиз целлюлозы до целлобиозы, которая под действием других ферментов переходит в глюкозу. Последняя при наличии кислорода окисляется в оксикислоты, которые окисляются уже до конечных продуктов с выделением свободной энергии. Образующиеся сахара и оксикислоты служат энергетическим материалом для группы азотфиксирующих микроорганизмов. При аэробном окислении клетчаки могут также образовываться уроновые кислоты, которые, соединяясь с белком, принимают непосредственное участие в образовании гумуса.