
- •Методические указания
- •1. Приготовление препаратов микроорганизмов
- •1.1. Приготовление препаратов живых клеток
- •1.2. Приготовление препаратов фиксированных клеток
- •1.2.1. Приготовление мазка
- •1.2.2. Высушивание мазка.
- •1.2.3. Фиксация мазка.
- •1.2.4. Окраска мазка
- •Устройство микроскопа мбр-1
- •Микробиологическая лаборатория
- •2. Подготовка микробиологической лаборатории к работе
- •Правила работы в микробиологической лаборатории
- •Ведение лабораторных записей
- •Аппараты, приборы, посуда и инвентарь
- •Техника безопасности на биотехнологическом
- •Лабораторная работа № 3 приготовление питательных сред для культивирования микроорганизмов
- •1. Питательные среды
- •2. Уплотнители сред
- •3. Осветление сред
- •Список рекомендуемой литературы по теме занятия:
- •Лабораторная работа № 4 морфология бактерий
- •Ход работы
- •Культуральные и морфологичекие признаки
- •2. Окраска микроорганизмов по граму
- •Ход работы
- •Приготовление мазка
- •2. Фиксация мазка
- •3. Окрашивание препарата
- •Краткая характеристика молочнокислых бактерий
- •2. Практическое использование молочнокислых бактерий
- •Ход работы
- •1. Приготовление препарата молочнокислых бактерий
- •2. Определение кислотности молока
- •Вопросы для самопроверки
- •Список рекомендуемой литературы:
- •2.Теппер е.З., Шильникова в.К. Практикум по микробиологии. М.: Колос,- 1979.-216 с. Лабораторная работа № 7 изучение биологии возбудителей маслянокислого брожения
- •1. Понятие о маслянокислом брожении
- •Культуральные и морфологические признаки
- •3. Роль в природе
- •4. Использование клостридиев в биотехнологии
- •Ход работы
- •1. Выращивание маслянокислых микроорганизмов
- •2. Микроскопирование маслянокислых микроорганизмов
- •3. Качественные реакции на масляную кислоту.
- •3.1. Получение маслянокислого железа
- •3.2. Получение масляноэтилового эфира
- •Вопросы для самопроверки
- •Краткая характеристика морфологии актиномицетов
- •2. Практическое значение актиномицетов
- •2.1. Значение актиномицетов в обеспечении плодородия почв
- •2.2. Использование представителей актиномицетов в биотехнологии
- •2.3. Актиномицеты как возбудители заболеваний
- •Ход работы
- •1. Приготовление препарата
- •2. Фиксация мазка
- •3. Окрашивание препарата
- •Список рекомендуемой литературы:
- •Лабораторная работа № 9 изучение морфологии грибов как объекта биотехнологии
- •Краткая характеристика морфологии грибов
- •2.Практическое значение грибов
- •2.1. Использование плесневых грибов в биотехнологии
- •4 . Приготовление препаратов плесневых грибов
- •Ход работы
- •Приготовление препаратов дрожжей и их изучение ход работы
- •Морфология простейших
- •2. Простейшиекак возбудители заболеваний
- •Простейшие как объект биотехнологии
- •Ход работы
- •Ход работы
- •Ход работы
- •Микроскопирование аэробных целлюлозоразрушающих микроорганизмов.
- •Список рекомендуемой литературы
- •Лабораторная работа № 13 изучение морфологии азотфиксирующих микроорганизмов
- •Свободноживущие азотфиксаторы
- •2.Симбиотические азотфиксаторы
- •Ход работы
- •Микроскопирование свободноживущих азотфиксирующих
- •Изучение морфологии симбиотических азотфиксирующих
- •Цель работы: ознакомиться с микробиологическими методами исследования почвы.
- •Ход работы
- •Отбор и подготовка почвенного образца для микробиологического анализа
- •2. Техника посева
- •Общие представления о микробиологических методах
- •2. Посев на плотные среды
- •3. Методы количественного учета микроорганизмов
- •3.1. Подсчет клеток в счетных камерах
- •3.2. Подсчет клеток в капиллярах Перфильева
- •Подсчет клеток на фиксированных окрашенных мазках
- •3.4. Подсчет клеток на мембранных фильтрах
- •Определение количества клеток высевом на плотные
- •Определение количества клеток высевом в жидкие среды
- •4. Микробиологические методы исследования воды
- •4.1. Отбор проб воды
- •4.2. Методы определения микробного числа
- •Ход работы
- •Цель работы: ознакомиться с основными микробиологическими методами исследования воздуха.
- •Метод оседания
- •Аспирационные методы
- •Ход работы
2. Простейшиекак возбудители заболеваний
Многие Protozoa являются возбудителями заболеваний человека и животных. Среди паразитических жгутиконосцев особое внимание заслуживают кровяные паразиты многих позвоночных - трипанозомы. Трипанозомы живут в крови позвоночных, причем передатчиком их служат различные кровососущие беспозвоночные.
Trypanosoma rhodesiense вызывает в тропической Африке "сонную болезнь" человека. Из западной Африки она постепенно распространилась на восток, на всю экваториальную Африку, погубив за первые три десятилетия XX в. свыше миллиона человек. Начинаясь мало заметной лихорадкой, сонная болезнь постепенно приводит к глубокому истощению и сопровождается сонливостью. При отсутствии лечения она всегда оканчивается смертью. Природным резервуаром трипанозом служат, по-видимому, антилопы, которые не страдают от присутствия в их организме этих жгутиконосцев. Переносчики трипанозом - кровососущие мухи "цеце". Муха вместе с кровью больного поглощает трипанозом; последние размножаются в кишечнике мухи и проникают в ее хоботок. Уколом зараженной мухи трипанозомы могут быть переданы в кровь здорового человека.
1
2
3
Рис. 10.1. Простейшие: 1 - амеба; 2 - инфузория; 3 – сувойки
Leishmania donovani вызывает тяжелое заболевание, называемое в Средней Азии "кала-азар" (висцеральный лейшманиоз). Болеют им преимущественно дети. Заболевание сопровождается увеличением печени и селезенки, лихорадкой, малокровием, истощением.
Другой вид лейшманиоза - Leishmania tropica вызывает местные заболевания кожи, называемые восточной язвой. В нашей стране встречается в некоторых районах Закавказья и Средней Азии. После инкубационного периода (от 2 недель до 5 месяцев) на коже (чаще лица и рук - мест, доступных для укусов москитов) образуется узел, который затем изъязвляется. В ткани язвы под струпом внутри белых кровяных телец находятся многочисленные лейшмании. Продержавшись 1-2 года, язва заживает, оставляя рубец.
Богатая видами (свыше 120 видов и разновидностей) группа паразитических инфузорий, большинство которых относится к отряду Entodiniomorha, живет в переднем отделе желудка (рубце и сетке) жвачных. Строение этих инфузорий сложно, тело нередко снабжено шипами, выростами, а также скелетными пластинками из вещества, близкого к клетчатке. Они в огромном количестве заполняют рубец каждой особи рогатого скота, причем число их может доходить до 2 млн на 1 см3 содержимого желудка. При переводе на массу это составит примерно килограмм инфузорий на один рубец. Такое постоянство нахождения и численное богатство этих инфузорий заставляет предполагать, что они- симбионты рогатого скота, оказывающие, возможно, положительное влияние на пищеварительные процессы хозяина. Вопрос этот недостаточно изучен.
Простейшие как объект биотехнологии
Филогенетическая близость простейших к многоклеточным животным и растениям является теоретическим обоснованием для изучения этих организмов как возможных продуцентов биологически активных веществ (БАВ), свойственных природе человека и животных.
В качестве продуцентов БАВ рациональнее использовать свободноживущие формы простейших, обладающие разнообразными биосинтетическими возможностями и потому широко распространенные в природе. Они являются важной составной частью геологических пород, почв, пресных и морских водоемов. Особую экологическую нишу занимают простейшие, обитающие в рубце жвачных. Они обладают ферментом целлюлазой, способствующей разложению клетчатки (целлюлозы) в преджелудке (рубце) жвачных. Простейшие рубца могут быть источником этого фермента.
Среди Protozoa много паразитических форм. Разработка методов борьбы с ними (создание вакцин, диагностикумов, фармацевтических препаратов) требует возможностей для всестороннего изучения этих простейших, для чего они должны воспроизводиться и существовать в условиях лаборатории.
Некоторые патогенные Protozoa (например, возбудитель южно-американского трипаномоза) стали первыми продуцентами противоопухолевых препаратов (круцин или трипаноз). У многих других жгутиконосцев также обнаружены биологически активные вещества, обладающие противоопухолевым действием.
Простейшие являются продуцентами полиненасыщенных жирных кислот - важного лекарственного сырья, которое не образуется у микроорганизмов - классического объекта биотехнологии.
Другой группой биологически активных веществ простейших являются полисахариды. Некоторые из изученных полисахаридов являются стимуляторами иммунной системы млекопитающих (парамилон). В настоящее время в мире большое значение придается глюканам, которые используются для медицинских целей, а также в пищевой и текстильной промышленности. До сих пор их получали из культур бактерий или морских водорослей. В то же время эвглениды являются одним из наиболее перспективных источников этого вещества.
Биомасса простейших является также источником белка. Этот белок содержит все незаменимые аминокислоты, при этом содержание свободных аминокислот на порядок выше, чем в биомассе микроводорослей, бактерий и в мясе. Это свидетельствует о широких возможностях применения свободноживущих бактерий в качестве источника кормового белка.
Решение поставленных задач требует масштабного получения культур свободноживущих и паразитических простейших для выделения биологически активных веществ, что возможно только на основе методов биотехнологии. В связи с этим перед исследователями стоит проблема разработки биотехнологической системы получения метаболитов протозойного происхождения.