- •1 Роль ветеринарной вирусологии в подготовке ветеринарного врача. Основные причины преобладания вирусных болезней над инфекционными болезнями животных невирусной этиологии.
- •2 Состояние биологии и медицины конца XIX века. Открытие вирусов. Д.И. Ивановский – основоположник вирусологии.
- •3 Основные этапы в истории вирусологии и превращение вирусологии в одну из фундаментальных биологических наук.
- •4 Вклад отечественных ученых в развитие вирусологии.
- •5 Основные достижения, современное состояние и задачи медицинской и ветеринарной вирусологии.
- •6 Происхождение и природа вирусов.
- •7 Кардинальные свойства вирусов. Физическая структура вирусов.
- •8 Характеристика вирусных нуклеиновых кислот.
- •9 Характеристика вирусных белков.
- •10 Номенклатура вирусов.
- •19 Репродукция вирусов. Схема основных процессов, обеспечивающих реализацию генетической информации.
- •20 Синтез вирусных компонентов.
- •21 Основные типы (формы) взаимодействия вирусов с клеткой. Роль отдельных компонентов вирусной частицы.
- •27 Понятие о гене и геноме. Генотип и фенотип вирусов. Генетические признаки (маркеры) и их использование в характеристике штаммов.
- •28 Мутации и их механизмы. Практическое использование вирусных мутантов.
- •29 Генетические взаимодействия вирусов.
- •30 Негенетические взаимодействия вирусов.
- •11 Пикорнавирусы.
- •16 Реовирусы.
- •12 Тогавирусы и флавивирусы.
- •13 Коронавирусы.
- •14 Рабдовирусы.
- •15 Ретровирусы.
- •17 Парвовирусы.
- •18 Герпесвирусы и поксвирусы.
- •22 Виды культур клеток и их использование. Переживающие и плазменные культуры.
- •23 Первично-трипсинизированные культуры клеток и субкультуры, их использование.
- •24 Перевиваемые и диплоидные культуры клеток, их использование.
- •25 Роллерные и суспензионные культуры клеток, их использование.
- •26 Контаминанты клеточных культур и куриных эмбрионов, методы деконтаминации. Пути создания чистых биологических систем.
- •31 Факторы неспецифической противовирусной защиты животных.
- •32 Противовирусные ингибиторы и их роль в противовирусном иммунитете. Ингибиторы
- •Механизм действия ингибиторов
- •33 Интерферон, его природа, свойства, механизм действия, получение и применение.
- •34 Иммунная система организма и её роль в специфическом противовирусном иммунитете.
- •35 Иммуноглобулины и их роль в противовирусном иммунитете.
- •36 Живые противовирусные вакцины. Принцип получения и контроль живых вакцин. Основные достоинства и недостатки.
- •37 Инактивированные противовирусные вакцины. Принципы получения и контроль инактивированных вакцин. Основные достоинства и недостатки.
- •38 Химические вакцины. Использование методов генной инженерии для получения противовирусных вакцин.
- •39 Препараты для специфической терапии вирусных болезней животных.
- •40 Препараты для неспецифической терапии вирусных болезней. Проблема химиотерапии вирусных болезней животных.
- •41 Вирус ящура. Краткая характеристика заболевания, история открытия и основные свойства вируса.
- •42 Методы лабораторной диагностики ящура. Биопрепараты для специфической профилактики и терапии.
- •43 Вирус бешенства. Краткая характеристика заболевания и основные свойства вируса.
- •44 Методы лабораторной диагностики бешенства. Биопрепараты для специфической профилактики.
- •45 Вирус болезни Ауески. Краткая характеристика заболевания и основные свойства вируса.
- •46 Методы лабораторной диагностики болезни Ауески. Биопрепараты для специфической профилактики и терапии.
- •47 Вирус оспы животных и птиц.
- •48 Вирус диареи крупного рогатого скота.
- •49 Вирус гриппа человека и животных.
- •50 Вирус чумы крупного рогатого скота.
- •51 Вирус инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота.
- •52 Вирус парагриппа-3 крупного рогатого скота.
- •53 Современные методы диагностики лейкоза крупного рогатого скота.
- •54 Вирус классической чумы свиней.
- •55 Вирус африканской чумы свиней.
- •56 Вирус болезни Тешена.
- •57 Вирус болезни Ньюкасла.
- •58 Вирус гриппа (классической чумы) кур.
- •59 Вирус болезни Марека.
- •60 Правила работы с вируссодержащими материалами. Техника безопасности. Оборудование и аппаратура, необходимые для проведения вирусологических исследований.
- •61 Правила отбора, консервирования и транспортировки вируссодержащего материала от больных животных и трупов.
- •62 Общие принципы и современные методы диагностики вирусных болезней.
- •63 Подготовка патологического материала для вирусологических исследований.
- •64 Индикация вирусов в патологическом материале путем обнаружения вирионов и вирусных телец – включений.
- •65 Использование лабораторных животных в вирусологической практике.
- •66 Отбор яиц для инкубации, условия инкубации, отбор куриных эмбрионов для заражения вирусами.
- •67 Цели и методы заражения куриных эмбрионов.
- •68 Обнаружение вирусов в зараженных куриных эмбрионах.
- •69 Основные солевые, диспегрирующие растворы и питательные среды, необходимые для культивирования клеток, и их компоненты.
- •70 Методика получения первично-трипсинизированной культуры клеток.
- •71 Индикация вирусов в зараженных культурах клеток.
- •72 Методика титрования вирусов по единичному эффекту.
- •73 Определение титра вируса. Методика расчета лд50 по Риду и Менчу.
- •74 Схема устройства и принцип действия люминесцентного микроскопа и люминесцентных осветителей.
- •75 Основные флуорохромы и их использование при диагностике инфекционных заболеваний.
- •76 Принципы изготовления флуоресцирующих сывороток. Виды флуоресцирующих сывороток и их назначение.
- •77 Подготовка препаратов для иммунолюминесцентной диагностики. Прямой метод флуоресцирующих антител (мфа).
- •78 Непрямой метод флуоресцирующих антител (мфа).
- •79 Прямой метод иммуноферментного анализа (ифа).
- •80 Непрямой метод иммуноферментного анализа (ифа).
- •81 Использование в вирусологии реакции гемагглютинации (рга).
- •82 Реакция торможения гемагглютинации (ртга) и её практическое использование в вирусологии, достоинства и недостатки.
- •83 Реакция непрямой (пассивной) гемагглютинации (рнга), достоинства и недостатки, практическое использование в вирусологии.
- •84 Реакция диффузной преципитации в агаровом деле (рдп) и её практическое использование в вирусологии.
- •85 Реакция встречного иммуноэлектроосмофареза (рвиэоф). Сущность реакции, применение.
- •86 Генетические методы диагностики вирусных болезней животных (пцр), использование в вирусологии.
- •87 Генетические методы диагностики вирусных болезней животных (днк-зонды), использование в вирусологии.
78 Непрямой метод флуоресцирующих антител (мфа).
Непрямой МФА (1 вариант)
На приготовленный и зафиксированный препарат наносят нефлюоресцирующую иммунную сыворотку к предполагаемому вирусу. При наличии гомологичного антителам вируса образуется несветящийся комплекс антиген + антитело. Промывают водой, наносят антивидовую люминесцирующую сыворотку. Выбор зависит от продуцента иммунной сыворотки. Например, иммунная сыворотка была получена на лошади, значит, берут антивидовую люминесцирующую сыворотку к глобулинам лошади. При наличии вируса в препарате выявляется свечение в люминесцентный микроскоп.
Непрямой МФА (2 вариант)
Люминесцентный вариант РСК. Антиген, антитело, комплемент, но вместо гемолитической системы (эритроциты барана, гемолитическая сыворотка) используется антикомплементарная люминесцирующая сыворотка.
На приготовленный и зафиксированный препарат наносят иммунную нефлюоресцирующую сыворотку и комплемент. При наличии вируса образуется несветящийся комплекс антиген + антитело + комплемент. Чтобы его выявить наносят антикомплементарную люминесцирующую сыворотку и выявляют свечение при исследовании в люминесцентном микроскопе. Если вируса нет – свечения не будет. Этот метод удобен тем, что достаточно иметь одну-две сыворотки, а исследование можно проводить на разные болезни.
МФА являются экспресс - методами диагностики, широко применяются в практике. Оценка результатов бывает субъективной, делают не один, а несколько препаратов, их сравнивают между собой, а также готовят мазки-отпечатки из аналогичной здоровой ткани.
79 Прямой метод иммуноферментного анализа (ифа).
Наиболее широкое распространение. Точные методы, специфичные, требуют минимальных количеств материалов, экспрессные (быстрые), автоматизированы, сравнительно дешевые.
В основе ИФА, как и любого иммунологического метода, лежит взаимодействие антитела с антигенов. Поэтому их используют для идентификации вирусов и для серологической прижизненной диагностики инфекционных болезней. Для МФА используют иммунные сыворотки, меченые флюорохромом, а для ИФА антитела метят ферментом. Чаще всего используют фермент пероксидазу или щелочную фосфотазу. Антитела, меченные пероксидазой – конъюгат. Он способен расщеплять субстраты с образованием цветных продуктов расщепления, и выявляется окрашенный продукт, видимый либо с использованием светового микроскопа, либо невооруженным глазом.
2 группы: прямой и непрямой методы ИФА. Непрямые методы более чувствительны.
Прямой (гистохимический) метод. На приготовленный и зафиксированный препарат наносят конъюгат – антитела, меченные пероксидазой, выдерживают некоторое время, тщательно промывают. Если в материале содержится вирус, то образуется антиген + антитело. Наносят субстрат: диаминобензидинтетрахлорид, который разлагается под действием фермента. При отсутствии вируса окрашивания не наблюдается.
80 Непрямой метод иммуноферментного анализа (ифа).
Непрямые методы
1 вариант.
Для непрямых методов используют полистероловые микропанели с лунками или полистероловые шарики. На микропанелях уже имеется антиген, адсорбированный на лунках. Берут инфицированную сыворотку и добавляют. Если они соответствуют друг другу – образуется комплекс антиген+антитело. Оставляют на час-два для контактирования. Используют антивидовой конъюгат. После контактирования и промывания наносят субстрат – диаминобензидинтетрохлорид – и выявляют по окраске коричневого цвета наличие антител в сыворотке.
2 вариант
Метод двойных антител (метод Сэндвич). Твердофазный метод. Берут полистероловые микропанели, лунки сенсибилизируют иммунной сывороткой (антителами). Наносят испытуемый ВСМ, оставляют для контактирования. После промывания наносят конъюгат – антитела к предполагаемому вирусу, меченные ферментом. Контакт, промывание, субстрат: ортофенилендиамин, который разлагается под действием фермента пероксидазы с образованием цветных продуктов коричневого цвета. Если вируса нет – окрашивания не произойдет или оно будет бледно желтым. Для учета результатов используют специальные приборы типа униплан, санрайз и другие с компьютерной программой, выдающей результат на монитор компьютера. При этом определяется оптическая плотность и сравнивается с контролем.