- •1 Роль ветеринарной вирусологии в подготовке ветеринарного врача. Основные причины преобладания вирусных болезней над инфекционными болезнями животных невирусной этиологии.
- •2 Состояние биологии и медицины конца XIX века. Открытие вирусов. Д.И. Ивановский – основоположник вирусологии.
- •3 Основные этапы в истории вирусологии и превращение вирусологии в одну из фундаментальных биологических наук.
- •4 Вклад отечественных ученых в развитие вирусологии.
- •5 Основные достижения, современное состояние и задачи медицинской и ветеринарной вирусологии.
- •6 Происхождение и природа вирусов.
- •7 Кардинальные свойства вирусов. Физическая структура вирусов.
- •8 Характеристика вирусных нуклеиновых кислот.
- •9 Характеристика вирусных белков.
- •10 Номенклатура вирусов.
- •19 Репродукция вирусов. Схема основных процессов, обеспечивающих реализацию генетической информации.
- •20 Синтез вирусных компонентов.
- •21 Основные типы (формы) взаимодействия вирусов с клеткой. Роль отдельных компонентов вирусной частицы.
- •27 Понятие о гене и геноме. Генотип и фенотип вирусов. Генетические признаки (маркеры) и их использование в характеристике штаммов.
- •28 Мутации и их механизмы. Практическое использование вирусных мутантов.
- •29 Генетические взаимодействия вирусов.
- •30 Негенетические взаимодействия вирусов.
- •11 Пикорнавирусы.
- •16 Реовирусы.
- •12 Тогавирусы и флавивирусы.
- •13 Коронавирусы.
- •14 Рабдовирусы.
- •15 Ретровирусы.
- •17 Парвовирусы.
- •18 Герпесвирусы и поксвирусы.
- •22 Виды культур клеток и их использование. Переживающие и плазменные культуры.
- •23 Первично-трипсинизированные культуры клеток и субкультуры, их использование.
- •24 Перевиваемые и диплоидные культуры клеток, их использование.
- •25 Роллерные и суспензионные культуры клеток, их использование.
- •26 Контаминанты клеточных культур и куриных эмбрионов, методы деконтаминации. Пути создания чистых биологических систем.
- •31 Факторы неспецифической противовирусной защиты животных.
- •32 Противовирусные ингибиторы и их роль в противовирусном иммунитете. Ингибиторы
- •Механизм действия ингибиторов
- •33 Интерферон, его природа, свойства, механизм действия, получение и применение.
- •34 Иммунная система организма и её роль в специфическом противовирусном иммунитете.
- •35 Иммуноглобулины и их роль в противовирусном иммунитете.
- •36 Живые противовирусные вакцины. Принцип получения и контроль живых вакцин. Основные достоинства и недостатки.
- •37 Инактивированные противовирусные вакцины. Принципы получения и контроль инактивированных вакцин. Основные достоинства и недостатки.
- •38 Химические вакцины. Использование методов генной инженерии для получения противовирусных вакцин.
- •39 Препараты для специфической терапии вирусных болезней животных.
- •40 Препараты для неспецифической терапии вирусных болезней. Проблема химиотерапии вирусных болезней животных.
- •41 Вирус ящура. Краткая характеристика заболевания, история открытия и основные свойства вируса.
- •42 Методы лабораторной диагностики ящура. Биопрепараты для специфической профилактики и терапии.
- •43 Вирус бешенства. Краткая характеристика заболевания и основные свойства вируса.
- •44 Методы лабораторной диагностики бешенства. Биопрепараты для специфической профилактики.
- •45 Вирус болезни Ауески. Краткая характеристика заболевания и основные свойства вируса.
- •46 Методы лабораторной диагностики болезни Ауески. Биопрепараты для специфической профилактики и терапии.
- •47 Вирус оспы животных и птиц.
- •48 Вирус диареи крупного рогатого скота.
- •49 Вирус гриппа человека и животных.
- •50 Вирус чумы крупного рогатого скота.
- •51 Вирус инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота.
- •52 Вирус парагриппа-3 крупного рогатого скота.
- •53 Современные методы диагностики лейкоза крупного рогатого скота.
- •54 Вирус классической чумы свиней.
- •55 Вирус африканской чумы свиней.
- •56 Вирус болезни Тешена.
- •57 Вирус болезни Ньюкасла.
- •58 Вирус гриппа (классической чумы) кур.
- •59 Вирус болезни Марека.
- •60 Правила работы с вируссодержащими материалами. Техника безопасности. Оборудование и аппаратура, необходимые для проведения вирусологических исследований.
- •61 Правила отбора, консервирования и транспортировки вируссодержащего материала от больных животных и трупов.
- •62 Общие принципы и современные методы диагностики вирусных болезней.
- •63 Подготовка патологического материала для вирусологических исследований.
- •64 Индикация вирусов в патологическом материале путем обнаружения вирионов и вирусных телец – включений.
- •65 Использование лабораторных животных в вирусологической практике.
- •66 Отбор яиц для инкубации, условия инкубации, отбор куриных эмбрионов для заражения вирусами.
- •67 Цели и методы заражения куриных эмбрионов.
- •68 Обнаружение вирусов в зараженных куриных эмбрионах.
- •69 Основные солевые, диспегрирующие растворы и питательные среды, необходимые для культивирования клеток, и их компоненты.
- •70 Методика получения первично-трипсинизированной культуры клеток.
- •71 Индикация вирусов в зараженных культурах клеток.
- •72 Методика титрования вирусов по единичному эффекту.
- •73 Определение титра вируса. Методика расчета лд50 по Риду и Менчу.
- •74 Схема устройства и принцип действия люминесцентного микроскопа и люминесцентных осветителей.
- •75 Основные флуорохромы и их использование при диагностике инфекционных заболеваний.
- •76 Принципы изготовления флуоресцирующих сывороток. Виды флуоресцирующих сывороток и их назначение.
- •77 Подготовка препаратов для иммунолюминесцентной диагностики. Прямой метод флуоресцирующих антител (мфа).
- •78 Непрямой метод флуоресцирующих антител (мфа).
- •79 Прямой метод иммуноферментного анализа (ифа).
- •80 Непрямой метод иммуноферментного анализа (ифа).
- •81 Использование в вирусологии реакции гемагглютинации (рга).
- •82 Реакция торможения гемагглютинации (ртга) и её практическое использование в вирусологии, достоинства и недостатки.
- •83 Реакция непрямой (пассивной) гемагглютинации (рнга), достоинства и недостатки, практическое использование в вирусологии.
- •84 Реакция диффузной преципитации в агаровом деле (рдп) и её практическое использование в вирусологии.
- •85 Реакция встречного иммуноэлектроосмофареза (рвиэоф). Сущность реакции, применение.
- •86 Генетические методы диагностики вирусных болезней животных (пцр), использование в вирусологии.
- •87 Генетические методы диагностики вирусных болезней животных (днк-зонды), использование в вирусологии.
74 Схема устройства и принцип действия люминесцентного микроскопа и люминесцентных осветителей.
Устройство и принцип работы люминесцентного микроскопа и осветителя
В основе люминесцентной микроскопии лежит фотолюминесцентная флюоресценция. Микроскопы: МЛ-1, МЛ-2, МЛ-3, «Люмам». Осветители: ОИ-18, ОИ-19.
Важной частью люминесцентного микроскопа является источник возбуждающего света: ртутно-кварцевая лампа. В лампе создается высокое давление, ртуть начинает испаряться, лампа выделяет поток световых лучей. Возбуждающими свечение лучами являются 3 вида коротковолновых лучей: коротковолновые невидимые (УФ) лучи, коротковолновые видимые (фиолетовые и синие). Остальная часть спектра не используется в микроскопе и отсекается соответствующими светофильтрами.
От лампы световой поток проходит через осветительное устройство, включающее в себя коллектор, дополнительную линзу и диафрагму. Дальше лучи проходят через кювету из увиолевого стекла, в которой находится 4% раствор медного купороса или дистиллированная вода. В этой кювете задерживаются тепловые лучи. Далее пучок проходит через возбуждающие светофильтры: для УФ, фиолетовых и синих. Затем пучок света падает на зеркало. Зеркало располагают либо горизонтально, либо вертикально, в зависимости от того, в каком свете просматривают препарат: в падающем или проходящем. Затем через трехгранную призму и систему линз свет падает на светоделительную пластинку и, отражаясь от неё, падает через объектив на препарат. Возникает свечение препарата. Свет люминесценции (возбужденный) имеет большую длину волны, чем возбуждающий свет. В соответствии с правилом стокса происходит сдвиг световой волны вправо, в сторону длинноволновых лучей. Коротковолновые лучи, сыграв свою роль, становятся ненужными, и их отсекают с помощью запирающих светофильров. Остаются только длинноволновые лучи, которые поступают в глаз исследователя. Через окуляр мы наблюдаем цветное изображение препарата.
В люминесцентном осветителе тоже имеется ртутно-кварцевая лампа. Его присоединяют к обычному световому микроскопу с помощью воронки.
75 Основные флуорохромы и их использование при диагностике инфекционных заболеваний.
В природе имеются вещества, обладающие первичной флюоресценцией. Их называют флюорохромами или люминофорами.
Наиболее часто употребляют акридиновый оранжевый (акридиноранж). Он хорош тем, что с его помощью можно дифференцировать вирусы на РНК-содержащие (красное свечение) и ДНК-содержащие (зеленое свечение).
Акридиновый желтый – дает желтое свечение
Примулин – голубое свечение
Родамин – красное свечение
Флюоросцеин – зеленое свечение
Пикриновый желтый – желтое свечение…
Из указанных флюорохромов готовят растворы, концентрация которых находится в пределах 1/500 – 1/1000 – 1/10000 – 1/20000
Методики окраски растворами флюорохромов могут быть разными.
1 вариант:
Готовят мазки-отпечатки из любого вируссодержащего материала и наносят раствор флюорохрома. Накрывают покровным стеклом и просматривают под люминесцентным микроскопом (выявляют свечение).
2 вариант:
Готовят мазки, их фиксируют (например, охлажденным ацетоном 5 минут. Наносят раствор флюорохрома, выдерживают нужный промежуток времени, промывают, рассматривают под люминесцентным микроскопом.
При наличии вируса – выявляется свечение. Имеется химическое сродство флюорохрома с нуклеиновой кислотой вируса. Для подавления свечения за счет НК клетки препараты иногда обрабатывают, например. с помощью УФ – лучей.
Методы прямого флюорохромирования являются ориентировочными, они позволяют только обнаружить вирус. Вид с помощью этих методов определить невозможно. С помощью акридинового оранжевого можно определить, РНКовый или ДНКовый вирус.