- •1 Роль ветеринарной вирусологии в подготовке ветеринарного врача. Основные причины преобладания вирусных болезней над инфекционными болезнями животных невирусной этиологии.
- •2 Состояние биологии и медицины конца XIX века. Открытие вирусов. Д.И. Ивановский – основоположник вирусологии.
- •3 Основные этапы в истории вирусологии и превращение вирусологии в одну из фундаментальных биологических наук.
- •4 Вклад отечественных ученых в развитие вирусологии.
- •5 Основные достижения, современное состояние и задачи медицинской и ветеринарной вирусологии.
- •6 Происхождение и природа вирусов.
- •7 Кардинальные свойства вирусов. Физическая структура вирусов.
- •8 Характеристика вирусных нуклеиновых кислот.
- •9 Характеристика вирусных белков.
- •10 Номенклатура вирусов.
- •19 Репродукция вирусов. Схема основных процессов, обеспечивающих реализацию генетической информации.
- •20 Синтез вирусных компонентов.
- •21 Основные типы (формы) взаимодействия вирусов с клеткой. Роль отдельных компонентов вирусной частицы.
- •27 Понятие о гене и геноме. Генотип и фенотип вирусов. Генетические признаки (маркеры) и их использование в характеристике штаммов.
- •28 Мутации и их механизмы. Практическое использование вирусных мутантов.
- •29 Генетические взаимодействия вирусов.
- •30 Негенетические взаимодействия вирусов.
- •11 Пикорнавирусы.
- •16 Реовирусы.
- •12 Тогавирусы и флавивирусы.
- •13 Коронавирусы.
- •14 Рабдовирусы.
- •15 Ретровирусы.
- •17 Парвовирусы.
- •18 Герпесвирусы и поксвирусы.
- •22 Виды культур клеток и их использование. Переживающие и плазменные культуры.
- •23 Первично-трипсинизированные культуры клеток и субкультуры, их использование.
- •24 Перевиваемые и диплоидные культуры клеток, их использование.
- •25 Роллерные и суспензионные культуры клеток, их использование.
- •26 Контаминанты клеточных культур и куриных эмбрионов, методы деконтаминации. Пути создания чистых биологических систем.
- •31 Факторы неспецифической противовирусной защиты животных.
- •32 Противовирусные ингибиторы и их роль в противовирусном иммунитете. Ингибиторы
- •Механизм действия ингибиторов
- •33 Интерферон, его природа, свойства, механизм действия, получение и применение.
- •34 Иммунная система организма и её роль в специфическом противовирусном иммунитете.
- •35 Иммуноглобулины и их роль в противовирусном иммунитете.
- •36 Живые противовирусные вакцины. Принцип получения и контроль живых вакцин. Основные достоинства и недостатки.
- •37 Инактивированные противовирусные вакцины. Принципы получения и контроль инактивированных вакцин. Основные достоинства и недостатки.
- •38 Химические вакцины. Использование методов генной инженерии для получения противовирусных вакцин.
- •39 Препараты для специфической терапии вирусных болезней животных.
- •40 Препараты для неспецифической терапии вирусных болезней. Проблема химиотерапии вирусных болезней животных.
- •41 Вирус ящура. Краткая характеристика заболевания, история открытия и основные свойства вируса.
- •42 Методы лабораторной диагностики ящура. Биопрепараты для специфической профилактики и терапии.
- •43 Вирус бешенства. Краткая характеристика заболевания и основные свойства вируса.
- •44 Методы лабораторной диагностики бешенства. Биопрепараты для специфической профилактики.
- •45 Вирус болезни Ауески. Краткая характеристика заболевания и основные свойства вируса.
- •46 Методы лабораторной диагностики болезни Ауески. Биопрепараты для специфической профилактики и терапии.
- •47 Вирус оспы животных и птиц.
- •48 Вирус диареи крупного рогатого скота.
- •49 Вирус гриппа человека и животных.
- •50 Вирус чумы крупного рогатого скота.
- •51 Вирус инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота.
- •52 Вирус парагриппа-3 крупного рогатого скота.
- •53 Современные методы диагностики лейкоза крупного рогатого скота.
- •54 Вирус классической чумы свиней.
- •55 Вирус африканской чумы свиней.
- •56 Вирус болезни Тешена.
- •57 Вирус болезни Ньюкасла.
- •58 Вирус гриппа (классической чумы) кур.
- •59 Вирус болезни Марека.
- •60 Правила работы с вируссодержащими материалами. Техника безопасности. Оборудование и аппаратура, необходимые для проведения вирусологических исследований.
- •61 Правила отбора, консервирования и транспортировки вируссодержащего материала от больных животных и трупов.
- •62 Общие принципы и современные методы диагностики вирусных болезней.
- •63 Подготовка патологического материала для вирусологических исследований.
- •64 Индикация вирусов в патологическом материале путем обнаружения вирионов и вирусных телец – включений.
- •65 Использование лабораторных животных в вирусологической практике.
- •66 Отбор яиц для инкубации, условия инкубации, отбор куриных эмбрионов для заражения вирусами.
- •67 Цели и методы заражения куриных эмбрионов.
- •68 Обнаружение вирусов в зараженных куриных эмбрионах.
- •69 Основные солевые, диспегрирующие растворы и питательные среды, необходимые для культивирования клеток, и их компоненты.
- •70 Методика получения первично-трипсинизированной культуры клеток.
- •71 Индикация вирусов в зараженных культурах клеток.
- •72 Методика титрования вирусов по единичному эффекту.
- •73 Определение титра вируса. Методика расчета лд50 по Риду и Менчу.
- •74 Схема устройства и принцип действия люминесцентного микроскопа и люминесцентных осветителей.
- •75 Основные флуорохромы и их использование при диагностике инфекционных заболеваний.
- •76 Принципы изготовления флуоресцирующих сывороток. Виды флуоресцирующих сывороток и их назначение.
- •77 Подготовка препаратов для иммунолюминесцентной диагностики. Прямой метод флуоресцирующих антител (мфа).
- •78 Непрямой метод флуоресцирующих антител (мфа).
- •79 Прямой метод иммуноферментного анализа (ифа).
- •80 Непрямой метод иммуноферментного анализа (ифа).
- •81 Использование в вирусологии реакции гемагглютинации (рга).
- •82 Реакция торможения гемагглютинации (ртга) и её практическое использование в вирусологии, достоинства и недостатки.
- •83 Реакция непрямой (пассивной) гемагглютинации (рнга), достоинства и недостатки, практическое использование в вирусологии.
- •84 Реакция диффузной преципитации в агаровом деле (рдп) и её практическое использование в вирусологии.
- •85 Реакция встречного иммуноэлектроосмофареза (рвиэоф). Сущность реакции, применение.
- •86 Генетические методы диагностики вирусных болезней животных (пцр), использование в вирусологии.
- •87 Генетические методы диагностики вирусных болезней животных (днк-зонды), использование в вирусологии.
35 Иммуноглобулины и их роль в противовирусном иммунитете.
Иммунные глобулины – специфические факторы противовирусного иммунитета. Являются важным специфическим гуморальным фактором противовирусного иммунитета. Они образуются не только к целому вириону, но и к его отдельным компонентам. К вирусам образуются такие же виды антител, как и к бактериям – преципитины, агглютинины, комплемент связывающие и вируснейтрализующие антитела.
Антитела действуют на vi- и s–антигены в составе вирусной частицы, а не на клетки, зараженные вирусом. Вирус, находящийся внутри клеток, недоступен действию антител. Молекула антител присоединяется к поверхности вирусной частицы и изменяет её физико-химические свойства. В результате этого вирус теряет способность соединяться с рецепторами чувствительной клетки, что препятствует начальной стадии вирусной инфекции. Нейтрализация вируса антителами зависит от массы, количества этих систем, температуры и других факторов. В течение начального периода комплекс антитело + вирус обратим, но со временем он становится прочным.
Различные вирусы дают неодинаково стойкие комплексы с антителами. Это зависит от вирулентности вирусных частиц и от сложности структур вирусной частицы. Считают, что одна вирусная частица может нейтрализоваться одной молекулой антитела, хотя вирус может обладать несколькими адсорбционными связями. В этом случае свободной стороной вирус может вирус может связаться с восприимчивой клеткой и инфицировать её, если мало антител. В организме наблюдается неравномерное распределение противовирусных антител. В тканях, пораженных вирусом, их значительно больше, чем в сыворотке крови. Антитела концентрируются в местах репродукции вируса и нейтрализуют вирус, тем самым препятствуют распространению его по организму. Уровень антител в крови и сыворотке крови не отражает напряженность иммунитета. Антитела против вирусов начинают формироваться весьма рано – уже на 2 – 3 сутки после заражения. Но они отличаются по целому ряду признаков от поздних антител. Они термолабильны и разрушаются при температуре 58-600С за 30 минут. Таким образом, при вирусных инфекциях защитная функция организма реализуется по 3м линиям защиты: у места входных ворот, на пути продвижения вируса к чувствительной клетке и в пределах инфицированной клетки.
Вирусы обладают разнообразными свойствами защиты от распознавания их антителами.
Они меняют антигенные свойства – постепенное изменение, антигенный дрейф. Он характеризуется постепенным изменением антигенных свойств вируса. Гуморальный иммунитет к этим вирусам сохраняется лишь до появления нового сероварианта возбудителя. Это не позволяет рассчитывать на долговременный эффект вакцинации;
Некоторые вирусы могут противодействовать интерферону;
Многие вирусы способны вызывать у макрофагов выработку супрессирующих цитокинов, которые подавляют развитие иммунного ответа.
36 Живые противовирусные вакцины. Принцип получения и контроль живых вакцин. Основные достоинства и недостатки.
Живые вакцины - это биологические препараты, содержащие штаммы вирусов, утратившие способность вызывать клинически выраженное заболевание, но сохранившие способность репродуцироваться в организме восприимчивого животного и стимулировать выработку специфических факторов противовирусного иммунитета (антител).
Основной этап - получение аттенуированных (слабовирулентных) штаммов вирусов. Основные трудности связаны с получением стабильного иммуногенного вакцинного штамма вируса и разработкой методов его контроля.
Для изготовления живых вакцин используют селекционированные естественные, аттенуированные и гетерологические штаммы вирусов. Естественные (выделенные из природы) авирулентные или слабовирулентные штаммы - это спонтанные мутанты, утратившие способность вызывать заболевание, но сохранившие иммуногенные свойства. Аттенуированные, т. е. ослабленные экспериментатором штаммы это индуцированные мутанты. Их обычно получают в лабораториях путем целенаправленного воздействия на эпизоотические штаммы различными физическими и химическими мутагенами или чаше путем пассажей вирулентного вируса через гетерологические (маловосприимчивые) биологические системы. В принципе, живые вакцины могут содержать и «дикий» тип вируса, т. е. неослабленный вирус, но в таком случае его вводят в организм неестественным путем, в результате чего ограничивается репликация вируса в месте введения, вызывается лишь бессимптомная инфекция, заканчивающаяся выработкой иммунитета.
Любой вакцинный штамм должен быть хорошо изучен, классифицирован, клонирован и паспортизирован. В паспорте указываются основные генетические признаки, выявляемые, постоянно воспроизводимые и контролируемые в процессе поддержания его жизнеспособности и хранения (остаточная вирулентность, способность репродуцироваться, активность в конкретной биологической системе, особенности проявления инфекционного действия, спектр гемагглютинации, степень чувствительности к физическим и химическим факторам). Вакцинные вирусные штаммы должны обладать генетической и фенотипической стабильностью. Их приживаемость в привитом организме должна быть выраженной, а способность к репродукции ограниченной. Эти признаки должны быть наследственно закрепленными. Вакцинные штаммы не должны подвергаться реверсии (возврату в исходное состояние) в том числе и при пассажах на естественно восприимчивых животных. Они не должны вызывать специфического инфекционного процесса у животных после введения им массивных доз вакцинного штамма (в 5—10 раз превышающих иммунизирующую дозу). Живые вакцины должны создавать напряженный иммунитет не менее чем у 70% однократно вакцинированных животных, этого достаточно для создания условий, препятствующих дальнейшему распространению болезни в неблагополучном стаде. Вакцинные штаммы размножаются в привитом организме до тех пор, пока его защитные механизмы не затормозят их развитие.
Технология изготовления живых вакцин сводится к культивированию вакцинного штамма в какой-либо биологической системе, накоплению вируса, очистке и концентрации, расфасовке, лиофилизации и контролю готового препарата.
Для предупреждения размножения бактерий, случайно попавших во время сбора и расфасовки вируссодержащего материала, в состав живых вакцин иногда включают антибиотики. Для профилактики контаминации живых авианизированных вакцин микоплазмами и вирусами применяют прединкубационную термообработку яиц при 42—45°С в течение 4 - 7 часов с последующим переводом их на обычный режим инкубации, кроме того, для инактивации вирусов лейкозов готовые вакцины выдерживают при 4°С не менее 4 педель. Наиболее желательно для изготовления живых вакцин использовать чистые биологические системы: эмбрионы и эмбриональные культуры клеток японских перепелок или кур, свободных от специфических патогенных факторов. Выпускаются живые вакцины, как правило, в лиофильно высушенном виде. В процессе высушивания активность вирусов не должна снижаться более чем в 10-15 раз, что обеспечивается за счет добавок стабилизирующих веществ.
В живой вакцине вирус сохраняет потенциальную способность изменяться в сторону снижения антигенности или повышения реактогенности, или даже вирулентности.
Преимущества и недостатки живых вакцин.
Технология изготовления живых вакцин, как правило, проста, они относительно дешевы, выпускаются чаще в сухом виде, поэтому удобны для применения. Вызывают активацию всех компонентов иммунной системы, стимулируют общий (системный) и местный иммунный ответ на каждый из защитных антигенов. Создают продолжительный и напряженный иммунитет за счет приживаемости, размножения и диссеминации в организме вакцинного штамма, при этом иммунитет формируется быстро, на первых этапах обычно за счет интерференции, а затем обусловливается накоплением вируснейтрализующих антител. Их можно вводить подкожно, внутримышечно, интраназально, а также аэрозольным (аэрогенным) и энтеральным (с кормом или водой) способом.
В зависимости от физиологического состояния животных живые вакцины могут вызвать поствакцинальные реакции. У животных может быть лихорадка, активация хронических и латентных инфекций, снижение продуктивности, избыточная смертность, аборты, аллергические реакции, врожденные уродства, низкая устойчивость к заражению. При использовании живых вакцин необходимо учитывать уровень остаточной вирулентности вакцинного штамма. Живые вакцины хранят в себе потенциальную опасность, связанную с возможной реверсией, т, е; возвратом вакцинного штамма в исходное (вирулентное) состояние. При культивировании вакцинных штаммов в эмбрионах птиц, культуре клеток или в организме животных имеется потенциальная опасность контаминации, что усложняет контроль и сдерживает широкое применение живых вакцин. Может наблюдаться длительная персистенция вакцинного штамма в организме животного. Чтобы сохранить жизнеспособность вакцинного штамма, необходимо соблюдать условия хранения и транспортировки живых вакцин (не выше 8°С) и применять в соответствии с инструкцией, прилагаемой к препаратам. Нарушение вакуума и попадание влаги в ампулу с вакциной, воздействие света и тепла инактивирует штамм, утрачиваются его иммуногенные свойства. Ввиду отсутствия в большинстве живых вакцин консервантов при вскрытии ампул и растворении содержимого необходимо строго соблюдать правила асептики. Место введения препарата в организм животного нельзя обрабатывать дезинфицирующими веществами. Разведенную живую вакцину необходимо быстро использовать (в течение 2 часов), остатки уничтожать сжиганием или кипячением
Контроль живых вакцин
Контроль на чистоту, т. е. отсутствие контаминирующих агентов проводят путём посева вакцины на питательные среды (МПА, МПБ с глюкозой, бульон и агар Мартена, МППБ под вазелиновым маслом, бульон и агар Сабуро или Чапека). Посевы их выдерживают при 36—37°С до 15 дней. При отсутствии роста через 5—6 дней делают пересевы на аналогичные среды, их выдерживают до 10 дней. Роста микробов не должно быть.
Контроль на пирогенность и реактогенность вакцин определяют по наличию у привитых животных температуры, местной воспалительной реакции, вовлечению в процесс регионарных лимфоузлов, реже с помощью лабораторных анализов крови и мочи.
Контроль на иммуногенность проводят на восприимчивых лабораторных или сельскохозяйственных животных. Заражение вакцинированных животных проводят вирулентным штаммом в дозе от 5 до 200 полулетальных или инфицирующих доз при одновременном заражении равного количества равноценных невакцинированных животных. Между вакцинацией и заражением должен быть срок, достаточный для формирования иммунитета, - он зависит от вакцины - от двух суток до двух недель.
Кроме того, вакцины не должны вызывать аллергических реакций и образования опухолей, обладать эпизоотической и эпидемиологической безопасностью (для вакцин против болезней, свойственных человеку и животным).