- •1 Роль ветеринарной вирусологии в подготовке ветеринарного врача. Основные причины преобладания вирусных болезней над инфекционными болезнями животных невирусной этиологии.
- •2 Состояние биологии и медицины конца XIX века. Открытие вирусов. Д.И. Ивановский – основоположник вирусологии.
- •3 Основные этапы в истории вирусологии и превращение вирусологии в одну из фундаментальных биологических наук.
- •4 Вклад отечественных ученых в развитие вирусологии.
- •5 Основные достижения, современное состояние и задачи медицинской и ветеринарной вирусологии.
- •6 Происхождение и природа вирусов.
- •7 Кардинальные свойства вирусов. Физическая структура вирусов.
- •8 Характеристика вирусных нуклеиновых кислот.
- •9 Характеристика вирусных белков.
- •10 Номенклатура вирусов.
- •19 Репродукция вирусов. Схема основных процессов, обеспечивающих реализацию генетической информации.
- •20 Синтез вирусных компонентов.
- •21 Основные типы (формы) взаимодействия вирусов с клеткой. Роль отдельных компонентов вирусной частицы.
- •27 Понятие о гене и геноме. Генотип и фенотип вирусов. Генетические признаки (маркеры) и их использование в характеристике штаммов.
- •28 Мутации и их механизмы. Практическое использование вирусных мутантов.
- •29 Генетические взаимодействия вирусов.
- •30 Негенетические взаимодействия вирусов.
- •11 Пикорнавирусы.
- •16 Реовирусы.
- •12 Тогавирусы и флавивирусы.
- •13 Коронавирусы.
- •14 Рабдовирусы.
- •15 Ретровирусы.
- •17 Парвовирусы.
- •18 Герпесвирусы и поксвирусы.
- •22 Виды культур клеток и их использование. Переживающие и плазменные культуры.
- •23 Первично-трипсинизированные культуры клеток и субкультуры, их использование.
- •24 Перевиваемые и диплоидные культуры клеток, их использование.
- •25 Роллерные и суспензионные культуры клеток, их использование.
- •26 Контаминанты клеточных культур и куриных эмбрионов, методы деконтаминации. Пути создания чистых биологических систем.
- •31 Факторы неспецифической противовирусной защиты животных.
- •32 Противовирусные ингибиторы и их роль в противовирусном иммунитете. Ингибиторы
- •Механизм действия ингибиторов
- •33 Интерферон, его природа, свойства, механизм действия, получение и применение.
- •34 Иммунная система организма и её роль в специфическом противовирусном иммунитете.
- •35 Иммуноглобулины и их роль в противовирусном иммунитете.
- •36 Живые противовирусные вакцины. Принцип получения и контроль живых вакцин. Основные достоинства и недостатки.
- •37 Инактивированные противовирусные вакцины. Принципы получения и контроль инактивированных вакцин. Основные достоинства и недостатки.
- •38 Химические вакцины. Использование методов генной инженерии для получения противовирусных вакцин.
- •39 Препараты для специфической терапии вирусных болезней животных.
- •40 Препараты для неспецифической терапии вирусных болезней. Проблема химиотерапии вирусных болезней животных.
- •41 Вирус ящура. Краткая характеристика заболевания, история открытия и основные свойства вируса.
- •42 Методы лабораторной диагностики ящура. Биопрепараты для специфической профилактики и терапии.
- •43 Вирус бешенства. Краткая характеристика заболевания и основные свойства вируса.
- •44 Методы лабораторной диагностики бешенства. Биопрепараты для специфической профилактики.
- •45 Вирус болезни Ауески. Краткая характеристика заболевания и основные свойства вируса.
- •46 Методы лабораторной диагностики болезни Ауески. Биопрепараты для специфической профилактики и терапии.
- •47 Вирус оспы животных и птиц.
- •48 Вирус диареи крупного рогатого скота.
- •49 Вирус гриппа человека и животных.
- •50 Вирус чумы крупного рогатого скота.
- •51 Вирус инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота.
- •52 Вирус парагриппа-3 крупного рогатого скота.
- •53 Современные методы диагностики лейкоза крупного рогатого скота.
- •54 Вирус классической чумы свиней.
- •55 Вирус африканской чумы свиней.
- •56 Вирус болезни Тешена.
- •57 Вирус болезни Ньюкасла.
- •58 Вирус гриппа (классической чумы) кур.
- •59 Вирус болезни Марека.
- •60 Правила работы с вируссодержащими материалами. Техника безопасности. Оборудование и аппаратура, необходимые для проведения вирусологических исследований.
- •61 Правила отбора, консервирования и транспортировки вируссодержащего материала от больных животных и трупов.
- •62 Общие принципы и современные методы диагностики вирусных болезней.
- •63 Подготовка патологического материала для вирусологических исследований.
- •64 Индикация вирусов в патологическом материале путем обнаружения вирионов и вирусных телец – включений.
- •65 Использование лабораторных животных в вирусологической практике.
- •66 Отбор яиц для инкубации, условия инкубации, отбор куриных эмбрионов для заражения вирусами.
- •67 Цели и методы заражения куриных эмбрионов.
- •68 Обнаружение вирусов в зараженных куриных эмбрионах.
- •69 Основные солевые, диспегрирующие растворы и питательные среды, необходимые для культивирования клеток, и их компоненты.
- •70 Методика получения первично-трипсинизированной культуры клеток.
- •71 Индикация вирусов в зараженных культурах клеток.
- •72 Методика титрования вирусов по единичному эффекту.
- •73 Определение титра вируса. Методика расчета лд50 по Риду и Менчу.
- •74 Схема устройства и принцип действия люминесцентного микроскопа и люминесцентных осветителей.
- •75 Основные флуорохромы и их использование при диагностике инфекционных заболеваний.
- •76 Принципы изготовления флуоресцирующих сывороток. Виды флуоресцирующих сывороток и их назначение.
- •77 Подготовка препаратов для иммунолюминесцентной диагностики. Прямой метод флуоресцирующих антител (мфа).
- •78 Непрямой метод флуоресцирующих антител (мфа).
- •79 Прямой метод иммуноферментного анализа (ифа).
- •80 Непрямой метод иммуноферментного анализа (ифа).
- •81 Использование в вирусологии реакции гемагглютинации (рга).
- •82 Реакция торможения гемагглютинации (ртга) и её практическое использование в вирусологии, достоинства и недостатки.
- •83 Реакция непрямой (пассивной) гемагглютинации (рнга), достоинства и недостатки, практическое использование в вирусологии.
- •84 Реакция диффузной преципитации в агаровом деле (рдп) и её практическое использование в вирусологии.
- •85 Реакция встречного иммуноэлектроосмофареза (рвиэоф). Сущность реакции, применение.
- •86 Генетические методы диагностики вирусных болезней животных (пцр), использование в вирусологии.
- •87 Генетические методы диагностики вирусных болезней животных (днк-зонды), использование в вирусологии.
25 Роллерные и суспензионные культуры клеток, их использование.
Роллерные клеточные культуры
Для получения большого количества клеточного материала культуры выращивают во вращающихся сосудах, которые помещают в барабаны с гнездами. Рост клеток происходит по всей внутренней поверхности сосуда, выход клеток возрастает в 10-20 раз. Их используют для получения (бройлерных???) биопрепаратов.
Суспензионные клеточные культуры
Клетки выращивают в суспензии при постоянном помешивании питательной среды в специальных ферментах, суспензию аэрируют (+СО2, +О2), воздух пропускают через бактериальный фильтр. Чтобы клетки не прикреплялись к стенкам сосуда, имеются специальные лопасти. При выращивании клетки проходят 4 стадии роста: латентную, фазу логарифмического роста, стационарную фазу, фазу разрушения. Длительность этих фаз зависит от вида клеток и особенностей культивирования. При непрерывном культивировании поддерживают размножение клеток в логарифмической фазе. Этот метод наиболее часто применяется в биотехнологии для получения иммунных препаратов. Для увеличения выхода клеток используют различные методы клеток.
26 Контаминанты клеточных культур и куриных эмбрионов, методы деконтаминации. Пути создания чистых биологических систем.
В вирусологической практике часто используемые биологические модели бывают загрязнены различной микрофлорой, агентами, такими, как бактерии, грибы, микоплазмы, вирусы. Присутствие каких-либо живых агентов в незараженных лабораторных моделях называют контаминацией или скрытым носительством. Свыше 20 различных контаминантов способны поражать эмбрионы птиц и культуры клеток млекопитающих.
Бактерии
Сальмонеллы, синегнойная палочка, вульгарный протей, эшерихия…
Вирусы
Лейкозосаркоматозный комплекс, вирус болезни Марека, парагриппа-2, инфекционного бронхита
Микоплазмы, Л-формы бактерий.
Контаминирующие агенты вступают в различные взаимодействия с теми возбудителями, которыми заражают биологические модели, что приводит к ложным результатам. Может происходить интерференция – подавление одного другим, и экзальтация – усиление одного другим.
Контаминанты представляют очень большую опасность при изготовлении живых вакцин из куриных эмбрионов.
В куриные эмбрионы они попадают от кур, через скорлупу, в клеточные культуры - из исходных тканей, с компонентами питательных сред. Также в процессе работы с питательными средами возможна их контаминация.
Выявить контаминанты сложно, так как видимых изменений в культуре они не вызывают. При их обнаружении проводят деконтаминацию.
От бактерий – антибиотиками, от микоплазм – тимам, катамицин, иммунная сыворотка
Яйца перед инкубацией обрабатывают нагреванием до 42градусов Цельсия в течение 4-5 часов, от вирусов – 430C 7,5 часов, при 450C 4 часа (вирус лейкоза). От многих вирусов помогает пятикратный прогрев яиц по 1-3 часа при 0C с последующим охлаждением до 10-120C. Живые вакцины выдерживают при 40C 4 недели.
В настоящее время с целью получения живых вакцин стали искать другую птицу.
Пути создания чистых биологических моделей
Эмбрионы японских перепелок не контаминированы микробами и вирусами, они экологически чистые. Сейчас их используют для получения некоторых противовирусных вакцин. Например, ЭПМ – вакцина против чумы плотоядных, получена на перепелиных эмбрионах, не содержащих вирус саркомы;
Получение СПФ-животных (свободных от патогенных факторов). Безлейкозные куры, проводят жесткий контроль и отбор, исследования, исключающие возможность контаминации куриных эмбрионов. Создание специализированных ферм, свободных от патогенных факторов.
Противовирусная защита