Распределительная хроматография.
Сущность. Основана на различном коэффициенте распределения компонентов анализируемой жидкости между двумя фазами.
Одна фаза – подвижная
Вторая фаза – неподвижная
Частными случаями распределительной хроматографии являются:
Бумажная хроматография
Тонкослойная хроматография
Распределительная хроматография используется для проведения качественного и количественного анализа.
Качественной характеристикой является Rf пятна, т.е. отношение между расстоянием от стартовой линии до центра пятна и расстоянием пройденным элюентом.
Количественной характеристикой является или площадь пятна, или масса пятна, или высота следа.
Проведение анализа.
Качественный анализ:
Берут серию растворов различных по природе. На бумаге (пластине) аккуратно карандашом наносят стартовую линию.
стартовая
линия
С помощью шприца или капилляра на стартовую линию наносят (капают) по одной капле различных по природе растворов и одну каплю контрольного раствора (раствора неизвестной природы). Бумагу помещают в камеру с элюентом. Неподвижной фазой - является бумага (пластина) а подвижной фазой будет элюент, который будет распределяться (подниматься) по бумаге
1 2 3 кр
крышка
со скрепками к которой
крепится бумага
(пластине) вместе с каплями растворов. После того как элюент поднимется до верхнего края бумаги, ее вынимают из камеры и высушивают. Далее бумагу помещают в проявитель – вещество которое проявляет пятна. Высушивают бумагу и облучают УФ – светом до явного проявления пятен. Теперь необходимо расшифровать полученную хроматограмму. Для этого необходимо рассчитать Rf пятен.
в
а
1 2 3 кр
а а – расстояние от стартовой линии
Rf = ------------ до центра пятна
в в – расстояние пройденное элюентом
Рассчитав Rf каждого стандартного пятна сравнивают со значением Rf контрольного пятна и по близости значений делают вывод о природе вещества.
Количественный анализ бесцветных растворов.
Готовят серию стандартных растворов (растворов с известной концентрацией). На стартовую линию хроматографической бумаги (пластины) с помощью шприца или капилляра наносят по одной капле стандартные растворы и контрольный раствор. Далее бумагу (пластину) помещают в камеру с элюентом и ждут пока элюент поднимется до скрепок. Далее бумагу просушивают, помещают в проявитель, и облучают под УФ – светом до явного появления пятен. Теперь необходимо расшифровать хроматограмму, для этого переносят все пятна на миллиметровку и рассчитывают площадь пятна как сумму всех клеток. По полученным данным строят график в координатах (√S – lg C)
√S
√Sx
1 2 3 кр
lg Cx lg C
На графике откладывают площадь контрольного раствора и по графику находят концентрацию контрольного раствора.
Также можно вместо площади пятен рассчитать их массу, для этого необходимо аккуратно вырезать пятна, взвесить их на аналитических весах и по полученным данным построить график в координатах (m – c) (масса пятна – концентрация)
m
mx
Cx C
Количественный анализ окрашенных растворов.
Готовят серию стандартных растворов (растворов с известной концентрацией). Также необходимо подготовить хроматографическую бумагу. Заранее ее пропитывают проявителем и высушивают бумагу перед нанесением на нее пятен. На стартовую линию хроматографической бумаги с помощью шприца или капилляра наносят по одной капле стандартные растворы и контрольный раствор. При нанесении капли раствор будет сразу взаимодействовать с проявителем, тем самым сразу образуя окрашенное пятно. Далее бумагу помещают в камеру с элюентом и ждут пока элюент поднимется до скрепок. Вместе с элюентом будут распределятся и наши растворы, оставляя окрашенный след на бумаге. Далее бумагу просушивают. Теперь необходимо расшифровать хроматограмму, для этого измеряют высоту следа. По полученным данным строят график в координатах (h – C)
h
hx
1 2 3 кр
Cx C
На графике откладывают высоту контрольного раствора и по графику находят концентрацию контрольного раствора.