Лабораторная работа №7

КАЧЕСТВЕННЫЕ РЕАКЦИИ НА КОМПОНЕНТЫ НУКЛЕИНОВЫХ КИСЛОТ

Цель работы – закрепить теоретические знания по теме «Нуклеиновые кислоты и нуклеопротеиды» и приобрести навыки качественного определения компонентов нуклеиновых кислот, образующихся в результате гидролиза нуклеопротеидов.

Для изучения состава нуклеопротеидов проводят кислотный гидролиз дрожжей в присутствии серной кислоты. При непродолжительном гидролизе нуклеопротеиды распадаются на белок и нуклеиновые кислоты. При продолжительном гидролизе наступает полный распад нуклеопротеидов. С помощью специальных реакций можно открыть в гидролизате составные части нуклеопротеидов. Биуретовой реакцией устанавливают наличие полипептидов. Пуриновые основания обнаруживают по осадку серебряных солей, фосфорную кислоту – по реакции с молибдатом аммония, а пентозу – пробой Троммера.

Исследуемый материал: пекарские дрожжи.

Реактивы:

1. 10% раствор серной кислоты.

2. Аммиак концентрированный.

3. 2% аммиачный раствор нитрата серебра (к 2% раствору нитрата серебра добавляют концентрированный раствор аммиака до растворения осадка).

4. 10% раствор NaOH.

5. 7% раствор CuSO₄.

6. 1% раствор CuSO₄.

7. Молибдат аммония в азотной кислоте (7,5 г молибдата аммония растворяют в 100 мл воды и добавляют 100 мл 32% раствора азотной кислоты; полное растворение молибдата аммония происходит после добавления азотной кислоты).

8. 1% раствор аскорбиновой кислоты на 1М растворе HCl.

Оборудование:

1. Большая пробирка или круглодонная колба с пробкой, в которую вставлена длинная стеклянная трубка.

2. Песчаная баня.

3. Штатив с пробирками.

4. Пипетки.

5. Индикаторная бумага.

Ход работы. Помещают 1 г пекарских дрожжей в большую пробирку или круглодонную колбу, добавляют 20 мл 10% раствора серной кислоты и 20 мл дистиллированной воды, закрывают пробкой с длинной стеклянной трубкой и кипятят под тягой в течение часа. После прекращения кипячения охлаждают, фильтруют. С фильтратом проделывают качественные реакции на определение составных частей нуклеопротеидов.

1. Серебряная проба на пуриновые основания

Метод основан на способности пуриновых оснований с аммиачным раствором нитрата серебра образовывать осадок серебряных солей пуриновых оснований, окрашенных в светло-коричневый цвет.

гуанин серебряная соль гуанина

Нейтрализуют 10 капель гидролизата 1 каплей концентрированного аммиака и добавляют 5 капель 2% аммиачного раствора нитрата серебра. При стоянии через 3–5 минут выпадает небольшой бурый осадок серебряных производных пуриновых оснований.

2. Проба Троммера на пентозы

Метод основан на окислении альдегидной группы рибозы и дезоксирибозы до карбоксильной, при этом гидроксид меди (II) восстанавливается в гидроксид или оксид меди (I) и выпадает в осадок.

К 10 каплям гидролизата добавляют 5 капель 10 % раствора NaOH до щелочной среды и добавляют по каплям 7% раствор сульфата меди CuSO₄ до появления голубой мути, далее пробирку нагревают до кипения, при этом выпадает желтый осадок CuOH или образуется осадок меди Cu₂O красного цвета. Внимание! Избыток CuSO₄ мешает реакции, так как образующийся при нагревании Cu(OH)₂ дает оксид меди (II) CuO черного цвета.

CuSO₄ + 2NaOH → Na₂SO₄ + Cu(OH)₂

рибоза рибоновая кислота

2CuOH → H₂O + Cu₂O↓