1.7 Просветление
В качестве просветляющей среды рекомендуется диметилфталат (ДМФ) – диметиловый эфир фталиевой кислоты. Он доступен, хорошо просветляет, не делает объекты ломкими, как большинство других просветляющих сред. В ДМФ объекты могут долго находиться без снижения прозрачности, что позволяет перенести монтаж и заливку на более поздний срок, что удобно, особенно в полевых условиях. В капле ДМФ можно рассматривать объекты под покровным стеклом в виде временного препарата, до заливки его в бальзам.
Рис. 6 -
ДМФ – жидкость консистенции глицерина, более тяжелого удаленного веса, чем спирт, поэтому перенесенные в ДМФ объекты держаться на поверхности жидкости, но по мере просветления опускаются на дно и становятся прозрачными. Если объекты полностью не просветлились, значит, были плохо обезвожены. В этом случае их из ДМФ вновь переносят в 100-градустный спирт и доводят до полного обезвоживания, затем переносят в ДМФ.
Заливка в бальзам
Просветленные объекты прямо из ДМФ переносят в каплю бальзама или пихтовая масло на предметном стекле и накрывают покровным стеклом. На стекле пишут или наклеивают этикетку и препарат оставляют в горизонтальном положении до полного высыхания.
Окраску, обезвоживание и просветление объектов удобнее вести в солонках или чашечках, нарезанных из плоскодонных пробирок или флаконов из-под пенициллина, поскольку здесь не требуется больших объектов жидкости. При этом можно переносить объект из сосуда в сосуд, стараясь не заносить избытка жидкости, но можно под контролем бинокуляра отсасывать жидкость пипеткой с тонко оттянутым концов и тот час же наливать следующий реактив.
Рис. 7 - Готовый препарат
Физиологический раствор.
Так же меня научили разводить физиологический раствор, красители и другие реактивы.
Физиологический раствор – это растворением 7,5 грамм поваренной соли в 1литр воды. Метацеркарии трематод и другие гельминты в этом растворе остаются живыми дольше, чем в воде. Это не исключает применения физиологических растворов более сложного состава, разработанных для холоднокровных животных.
Фиксаторы.
Жидкость Корнула. Спирт этиловый 100° берут 6 объемных частей, хлороформ 3 частей, уксусная кислота (ледяная) 1 часть. Жидкость фиксирует быстро, хорошо проникает сквозь стенку цист. Продолжительности фиксации метацеркарий не более часа. После фиксации объекты переносят в 100-градустный спирт для хранения.
Смесь Буэна. Насыщенный раствор пикриновой кислоты 15 частей, формалин 5 частей, уксусная кислота (ледяная) 1 часть. Смесь хорошо фиксирует метацеркарий, но плохо проникает внутрь цист, что вызывает деформацию тела метацеркарий, поэтому не может быть рекомендована для фиксации инцистированных форм. Фиксация в смеси продолжается около часа. Затем объект отмывается от желтой окраски 70-градустным спиртом, который сменяется несколько раз. После отмывки объекты помещаются в 70-градустный спирт для хранения. Фиксированный материал удовлетворительно красит уксусно-кислый кармин.
Фиксатор Ван – Клива. Спирт этиловый 85° 85- частей, формалин 10- частей, уксусная кислота (ледяная) 5- частей. Продолжительность фиксации до 0,5 часа. После этого объекты переносятся в 70-градусный спирт для хранения или после отмывания в воде в уксусно-кислый кармин для окраски.