Частная методика работы метацеркарии и приготовление препаратов
Методика работы с метацеркариями трематод не имеет принципиальных отличий от методов изучения их половозрелых форм – марит. Сходны методы фиксации, приготовления постоянных и временных препаратов, применение витальных красителей. Но существует некоторая специфика в работе с метацеркариями. Это метод эксцистирования, то есть выделения метацеркарий из цист, поскольку метацеркарии, за небольшими исключениями, – формы инцистированные. Мариты в эксцистировании не нуждаются, за исключением редких случаев, когда трематод приходится извлекать из прочной соединительнотканной капсулы.
Метацеркарии трематод извлекаются из тканей рыб при их вскрытии. Трудно назвать такой орган в теле рыбы, в котором не могли бы паразитировать метацеркарии. Исключение составляет лишь просвет кишечника, где паразитируют мариты, в то время как в стенке кишечника могут локализоваться метацеркарии.
Рис. 1 - локализация трематод Stephanostomum sp. метацеркарии
Обнаружить и извлечь цисты метацеркарий можно еще до вскрытия рыбы, при ее наружном осмотре. Так, можно обнаружить беловатые цисты возбудителя «жемчужной болезни», метацеркарий метагонимуса в толще чешуй, метацеркарий других видов в толще кожных покровов, под чешуей, внутри лучей хвостового плавника. При вскрытии рыб из - под серозных покровов и перикарда метацеркарии выделяются механически с помощью препаровальных игл. Собранные метацеркарии вместе с остатками тканей и в капсулах собираются в часовое стекло или в другой сосуд с физраствором или водой для дальнейшей обработки. Метацеркарии из мышц и паренхиматозных органов выявляются путем компрессования мелких кусочков ткани между двух стекол. Можно пользоваться и винтовым компрессором. Кусочек ткани сдавливается между стекол так, чтобы он стал прозрачным. Наблюдения ведут под бинокуляром марки МБС-1 или аналогичной системы при увеличении до 25×. При обнаружении цисты верхнее стекло осторожно сдвигают, пока циста не окажется за его пределами. Отсюда иглой или пипеткой с оттянутым концом ее переносят в физраствор. Верхнее стекло при компрессовании не должно быть большим, оптимально вдвое большое по площади предметного стекла.
Рис. 2 - бинокуляра марка МБС-1
Собранные цисты освобождают иглами от кусочков ткани и вылущивают из капсул, образованных соединительной тканью хозяина. При этом следует учитывать, что иногда при наличии плотной капсулы собственно оболочка цисты может быть очень тонкой и непрочной.
Порядок поведения и исследования.
Наилучшие результаты дает изучение свежевыделенных цист. При фиксации наблюдается деформация как тела метацеркарии, так и оболочек цисты.
Рис. 3 - Paragonimus- метацеркарии в цисте
При изучении инцистированных форм следует обращать внимание на форму цисты, ее размеры, характер оболочек цист, толщину составляющих ее слоев, положение тела метацеркарии внутри цисты. При изучении цист иногда полезно применять витальные красители – слабый раствор нейтрального красного. Краситель сначала окрашивает оболочки цисты, затем проникает внутрь цисты и спустя некоторые время концентрируется в просвете кишечника и некоторых железах. Затем краска исчезает, но этого времени достаточно, что бы сделать зарисовки и измерения.