Современная теория
Для наших целей более удобна следующая классификация, разделяющая красители на субстантивные и аджективные; первые могут окрашивать текстильные волокна сами, вторые окрашивают только с помощью протравы. Таким образом, мы различаем: I Красители субстантивные (красители основные, кислые, нейтральные, индифферентные). П Красители аджективные (лаки). Некоторые исследователи считают, что красители лучше разделять на прогрессивные и регрессивные. Первыми объект окрашивают только до желаемой степени, вторыми же объект c Viepsa окрашивают, возможно, интенсивнее, а затем уже ослабляют окраску или, как говорят, дифференцируют ее до желаемого тона. Можно думать, что обе классификации должны быть сохранены, так как они связаны с двумя совершенно разными идеями.
Красители субстантивные так же хорошо, как и аджективные, могуг употребляться и регрессивно, и прогрессивно. Чаще всего субстантивными красителями окрашивают прогрессивно, аджективными — регрессивно. Но это дело навыков и не имеет принципиального значения. Так, например, железный лак гематеина чаще всего употребляется по способу регрессивному (железный гематоксилин Гейденгайна), но может употребляться по способу прогрессивному (гематоксилин Гансена). По своим химическим свойствам красители разделяются на основные и кислые. Так как многие красители, как кислые, так и основные, содержат одновременно основные и кислые ауксохромные группы, то не всегда легко решить вопрос об их кислой или основной природе. Для решения подобных случаев приходится прибегать к методу катафореза. Основные красители представляют собой соли красящих оснований, чаще всего это хлоргидраты. Основные их свойства зависят от аминогруппы, замещенной или не замещенной, которую они содержат. Но можно одинаково употреблять и другие соли, кроме хлоридов. Кислотная природа радикала, соединенного с основанием красителя, по-видимому, не играет никакой роли в явлениях окрашивания. Гистологические образования, элективно окрашивающиеся основными красителями, называются базофильными. Такие методы в наше время часто применяются в текстильной промышленности.
К теории импрегнации серебром
В микроскопической технике наряду с окрасками нередко пользуются импрегнацией металлами: золотом, осмием и, наиболее часто, серебром, особенно при изучении нервной и соединительной ткани. Методы серебрения столь разнообразны, что не может быть единой теории импрегнации. Можно лишь дать теоретическое обоснование отдельным звеньям процесса импрегнации. Импрегнация может проводиться двумя различными способами.
В первом случае импрегнация зависит от редуцирующего действия некоторых тканевых компонентов на соли серебра. Так, например, если обработать свежую или предварительно фиксированную ткань раствором азотнокислого серебра (слегка подкисленным азотной или уксусной кислотой), то металлическое серебро может восстанавливаться из солей серебра в виде мелких зерен такими компонентами тканей, как аскорбиновая кислота, адреналин, креатин, глютатион. С помощью легко редуцирующегося раствора аммиачного серебра могут черниться многие элементы, встречающиеся в тканях (причем осадок выпадает почти всегда в виде зерен), как, например, меланин, липофусцин, гранулы ретикуло-эндотелиальных клеток, эозинофильные гранулы и, наконец, митохондрии. Этот способ импрегнации не используется при изучении тонкого строения нервной системы, однако гистолог, применяющий соли серебра для решения тех или иных морфологических задач, не должен упускать его из вида, так как он может повлиять на конечные результаты импрегнации или же дать повод к несколько поспешным заключениям.
Второй способ импрегнации заключается в том, что ткань предварительно пропитывают солями серебра, а затем обрабатывают редуцирующими реактивами. Этот способ наиболее распространен в гистологической технике. Он сводится к тому, что свежую или фиксированную ткань сначала обрабатывают раствором азотнокислого или аммиачного серебра, а затем подвергают действию редуцирующего реактива, чаще всего формалина; при этом при определенных условиях можно достигнуть элективного почернения элементов нервной ткани. В процессе импрегнации важную роль играют размеры межмицеллярных пространств тканевых элементов и частиц серебра.
Исследованиями Секи (1940) и Липпа (1951) показано значение структурной плотности тех или иных тканевых элементов, подвергающихся импрегнации серебром. Контрастность выявления тех или иных тканевых элементов при импрегнации достигается тем, что восстанавливающееся из солей серебра металлическое серебро откладывается в этих элементах более интенсивно, чем в других. В начале этого процесса образуются мельчайшие участки («зародыши») серебра, которые затем более или менее быстро увеличиваются за счет вновь восстановленного серебра. Этим путем получаются значительные агрегаты частиц серебра. Такие серебряные частицы могут образоваться как в микроскопических, так и в субмикроскопических порах тканевых элементов, и, откладываясь по их стенкам, чернить их.
В различных методах импрегнации — серебрения особое значение имеет процесс фиксации и выбор фиксатора. В различных методах импрегнации серебром рекомендуется предварительно фиксировать ткань формалином. Под влиянием формалина в клетках происходят химические и физико-химические изменения, которые необходимо учитывать. Наблюдения показывают, что в тканях, фиксированных формалином, постепенно, хотя и весьма медленно, уменьшается содержание липоидов, так как имеющаяся в клетках липаза не разрушается этим реактивом.
Важную роль в процессах серебрения играют электростатические явления. Электростатическая адсорбция тканевыми элементами каких-либо ионов будет тем резче выражена, чем больше различия между положением изоэлектрической точки субстрата и рН примененного раствора.
Из приведенных данных следует, что для научного анализа картин нервной ткани, изучаемых на импрегнированных серебром препаратах, далеко не достаточен чисто морфологический подход. Только сочетание морфологических данных с результатами физиологических, гистохимических, биохимических, коллоидно-химических и других исследований позволит достигнуть новых успехов в области нейрогистологипа.