- •Полимеразная цепная реакция: принципы и практические рекомендации по использованию в клинической практике врача
- •Введение
- •Принцип метода пцр
- •Преимущества пцр как метода диагностики
- •Недостатки метода пцр
- •Общеклиническое и практическое значение пцр
- •Общий методический подход к проведению пцр
- •Диагностика частной патологии методом пцр
- •Вирусные гепатиты (вг)
- •Общие характеристики вирусных гепатитов
- •Вирусный гепатит в (hbv - от англ. Hepatitis b Virus)
- •Маркеры вируса в в репликативную и интегративную фазы развития hbv-инфекции
- •Вирусный гепатит c (hc - от англ. Hepatitis c Virus)
- •Вирусный гепатит d (нd V - от англ. Hepatitis d Virus)
- •Вирусный гепатит g (нg V - от англ. Hepatitis g Virus)
- •Герпетическая инфекция
- •Цитомегаловирус (цмв)
- •Вирус Эпштейна-Барр (вэб)
- •Папилломавирусная инфекция человека
- •Типы hpv, обнаруженные при различных поражениях кожи и слизистых оболочек (VilMers e.M., 1989)
- •Хламидиозная инфекция
- •Число микроорганизмов в пробе
- •Относительный предел измерения (аналитическая чувствительность) прямых методов диагностики c. Trachomatis (Carolyn m. Black, 1997). Микоплазменная инфекция
- •Хеликобактерная инфекция
- •Туберкулёз
- •Результаты анализа клинических образцов на наличие возбудителей туберкулеза микробиологическими методами и методом пцр
- •Онкологические заболевания
- •Опухоли и прогностические днк-маркеры или их рнк продукты
- •Наследственные заболевания и пренатальная диагностика
- •Принципиальная схема пренатальной диагностики наследственных болезней. Институт акушерства и гинекологии им. Д.О.Отта рамн
- •Судебно-медицинская практика
- •Транспланталогия
- •Заключение
- •Литература
Туберкулёз
Туберкулёз по-прежнему остается проблемой планетарного масштаба для современного общества. Это обусловлено целым рядом социально-экономических (бедность, недоступность медицинской помощи, предрассудки и т.п.) и медицинских (прежде всего эпидемией ВИЧ-инфекции) проблем. По данным ВОЗ от туберкулёза ежегодно умирает около 3 млн. человек.
Для лабораторной диагностики туберкулёза используется комплексный подход, который включает в себя специфические и неспецифические методы. Специфические методы лабораторной верификации туберкулёза состоят из четырёх этапов:
Бактериологический.
Молекулярно-генетический
Цитогистологический
Иммунологический.
Внедрение в практическую фтизиатрию молекулярно-генетических методов обследования стало решительным прорывом в диагностике различных форм туберкулёза (табл. 7). Применение ПЦР, как главного молекулярно-генетического метода исследования, позволяет в короткие сроки (до 48 часов) выявить микобактерии в любом биологическом материале. Это особенно важно, т.к. микобактерии отличаются замедленным ростом при культивировании на питательных средах. Так, аналитическая чувствительность коммерческих амплификационных тест-систем позволяет идентифицировать единичные колонии (до 10 клеток). Метод ПЦР позволяет избирательно проводить амплификацию фрагментов НК микобактерий, что позволяет добиться 100% специфичности и 97% чувствительности анализа.
Результаты анализа клинических образцов на наличие возбудителей туберкулеза микробиологическими методами и методом пцр
Результаты анализа |
Количество образцов |
Клинический диагноз |
|||||
Посев |
Микроскопия |
ПЦР N1/N2 |
Мокрота |
Моча |
Лаважная жидкость |
Кровь |
|
– – |
– – |
– – |
4 |
|
|
|
Неспецифические заболевания легких |
– – – |
– – – |
– – – |
8 |
1 |
2 |
|
Различные формы туберкулеза у пациентов, получающих регулярное лечение в течение 3-6 мес |
+ + н |
+ + н |
+ + + 6/2 |
5 |
|
1 |
2 |
Инфильтративный либо диссименированный туберкулез в фазе распада; фиброзно-кавернозный туберкулез |
– н н |
– – н |
+ + + 12/1 |
3 |
|
1 |
9 |
Туберкулез внутригрудных лимфоузлов; первичный туберкулезный комплекс; туберкулезный плеврит |
Примечание: (+) - положительный результат анализа; (-) - отрицательный результат анализа, (н) - анализ не проводился, N1-образцы с идентифицированной M.tuberculosis N2-образцы с идентифицированной M.bovis.
Кроме того, необходимо подчеркнуть ещё два достоинства метода ПЦР. Во-первых, возможности определения внелегочных форм. Во-вторых, идентификация химиорезистентности микобактерий, что резко повышает эффективность терапии.
Таким образом, метод ПЦР позволяет на 30% повысить выявляемость микобактерий туберкулёза при значительном (в 10 раз) сокращении времени исследования.