- •Полимеразная цепная реакция: принципы и практические рекомендации по использованию в клинической практике врача
- •Введение
- •Принцип метода пцр
- •Преимущества пцр как метода диагностики
- •Недостатки метода пцр
- •Общеклиническое и практическое значение пцр
- •Общий методический подход к проведению пцр
- •Диагностика частной патологии методом пцр
- •Вирусные гепатиты (вг)
- •Общие характеристики вирусных гепатитов
- •Вирусный гепатит в (hbv - от англ. Hepatitis b Virus)
- •Маркеры вируса в в репликативную и интегративную фазы развития hbv-инфекции
- •Вирусный гепатит c (hc - от англ. Hepatitis c Virus)
- •Вирусный гепатит d (нd V - от англ. Hepatitis d Virus)
- •Вирусный гепатит g (нg V - от англ. Hepatitis g Virus)
- •Герпетическая инфекция
- •Цитомегаловирус (цмв)
- •Вирус Эпштейна-Барр (вэб)
- •Папилломавирусная инфекция человека
- •Типы hpv, обнаруженные при различных поражениях кожи и слизистых оболочек (VilMers e.M., 1989)
- •Хламидиозная инфекция
- •Число микроорганизмов в пробе
- •Относительный предел измерения (аналитическая чувствительность) прямых методов диагностики c. Trachomatis (Carolyn m. Black, 1997). Микоплазменная инфекция
- •Хеликобактерная инфекция
- •Туберкулёз
- •Результаты анализа клинических образцов на наличие возбудителей туберкулеза микробиологическими методами и методом пцр
- •Онкологические заболевания
- •Опухоли и прогностические днк-маркеры или их рнк продукты
- •Наследственные заболевания и пренатальная диагностика
- •Принципиальная схема пренатальной диагностики наследственных болезней. Институт акушерства и гинекологии им. Д.О.Отта рамн
- •Судебно-медицинская практика
- •Транспланталогия
- •Заключение
- •Литература
Цитомегаловирус (цмв)
ЦМВ может быть причиной многих серьёзных заболеваний с летальным исходом. Темпы роста заражения ЦМВ составляют 1% в год, при этом к пятидесятилетнему возрасту инфицированность людей приближается к 100% показателю. Эти факты не позволяют однозначно ответить на вопрос о степени патогенности вируса. С одной стороны, ЦМВ редко вызывает клинически манифестные заболевания у иммунокомпетентных людей. С другой стороны, у иммунодефицитных пациентов отмечено развитие таких ЦМВ-обусловленных заболеваний, как мононуклеоз (гетерофильнонегативный вариант), хориоретинит, ретардация ментальных функций, глухота и т.п. Как и любая другая герпетическая инфекция при первичном инфицировании ЦМВ возникает пожизненная латенция. Реактивация ЦМВ-инфекции зависит от состояния иммунной системы организма, срыв которой приводит к возможности патологического влияния вируса на организм.
Лабораторная диагностика ЦМВ-инфекции включает в себя несколько подходов:
выявление инфекционных вирусных частиц или антигенов,
определение вирусной ДНК,
определение иммунного ответа организма,
выявление прямого цитопатического действия вируса, выделенного из в биологических субстратов пациента, на перевиваемую культуру клеток.
Серологические тесты на ЦМВ являются основными для установления инфицирования данным вирусом. Однако это отнюдь не является основанием для заключения о том, что болезнь действительно вызвана ЦМВ. Показано, что высокие титры анти-ЦМВ-антител обнаружены как у здоровых носителей, так и у больных с острым течением инфекции. Селективное определение специфических антител против ЦМВ класса М и G также не позволяет с полной уверенностью дифференцировать острую инфекцию, от реактивации хронической. Поэтому определение вирусных антигенов и ДНК ЦМВ становится важным тестом для диагностики заболевания этим вирусом.
Метод ПЦР широко используется для диагностики ЦМВ в любых биологических тканях и жидкостях, в том числе и биопсийном материале, фиксированном формалином. Этот метод превышает по своей чувствительности все имеющиеся аналоги. Для увеличения диагностической и прогностической значимости разрабатываются количественные методы исследования, создаются праймеры к сверхранним, ранним и поздним генам вируса. Кроме того, апробируются новые технологии ПЦР основанные на определении РНК-зависимой ДНК-полимеразы. Это позволит выявлять мРНК реплицирующегося ЦМВ. Во многих работах показано, что прямая детекция ДНК ЦМВ в плазме методом ПЦР коррелирует с повышенным риском развития манифестной формы ЦМВ или связанными с ней осложнениями. Кроме того, определение вирусной нагрузки ЦМВ в крови позволяет оценить эффективность противовирусной терапии.
Вирус Эпштейна-Барр (вэб)
Инфекция названная так в честь учёных Мишеля Эпштейна и Эвелины Барр, выделивших в 1964 г патоген из опухоли (лимфомы) Беркитта. ВЭБ широко распространённая инфекция, контаминация которой происходит обычно в молодом возрасте. При этом ВЭБ-инфекция, как и любая герпетическая инфекция, может протекать в форме первичного заражения или реактивации латентного процесса (табл. 4) . Как видно из представленной таблицы, ВЭБ - это потенциально онкогенная инфекция.
Тип инфекции |
Заболевание |
• Первичная инфекция • Хроническая инфекция • Реактивация хронической инфекции |
• Инфекционный мононуклеоз • Лимфома Беркитта • Болезнь Ходжкина • Синдром Дункана • Назофарингиальная карцинома • Лимфомы у ВИЧ-инфицированных |
Таблица 4. Клинические варианты ВЭБ-ассоциированных лимфопролиферативных заболеваний
Лабораторная диагностика ВЭБ-инфекции базируется на цитологическом исследовании крови или костного мозга, серологических исследованиях (определение гетерофильных и противовирусных антител) и ПЦР. Алгоритм лабораторной диагностики представлен в таблице 5. Вирус ЭБ может быть обнаружен методом ПЦР в сыворотке крови, слюне, ткани опухоли и костном мозге. При этом важно сопоставление результатов клинических, серологических и молекулярных обследований в определении ВЭБ-инфекции, как причины имеющегося заболевания.
Маркер ВЭБ-инфекции |
Время возникновения |
Клиническое значение |
Гетерофильный тест |
С момента развития болезни до нескольких месяцев |
Острая стадия ИМ, отражает темпы реконвалесценции, дифференцирование между первичной и реактивацией хронической ВЕБ-инфекции |
VСА - Ig М |
С момента развития болезни до двух месяцев |
Острая стадия ИМ |
ЕА - Ig G |
С первой недели болезни до нескольких лет (в норме) |
Острая стадия ИМ, коррелирует с тяжестью болезни, при персистировании более двух-трёх лет указывает на хроническую форму ВЭБ-инфекции |
ЕВNА -Ig G |
Через несколько недель после клинических проявлений с последующим пожизненным персистированием |
Стадия реконвалесценции, анамнестические антитела |
ДНК в плазме |
До клинических проявлений болезни |
Репликация вируса в организме, показание к противовирусной терапии и критерии эффективности проведенного лечения |
Таблица 5. Лабораторная диагностика и клиническая значимость маркеров ВЭБ-инфекции
