
- •Окраска бактерий в мазках
- •Для обнаружения возбудителей используют различные методы и группы методов.
- •Окраска метиленовым синим Лефлера Методика окраски.
- •Окраска основным фуксином по Пфейферу
- •Окраска генциановым или метиловым фиолетовым
- •Окраска карболовым тионином Николя
- •Окраска акридиновым оранжевым по Дарту-Тернеру
- •Окраска по Граму Красящие растворы.
- •Красящие смеси для грамположительных бактерий:
- •Красящие смеси для грамотрицательных бактерий:
- •Методика окраски.
- •Окраска по Романовскому-Гимзе Приготовление красителя
- •Методика окраски
- •Окраска плазмодиев малярии в мазках по Романовскому-Гимза
- •Методика окраски «толстой капли».
- •Метод Френкеля
- •Флюоресцентное окрашивание мазков мокроты (метод Хагеманна) ,
- •Метод Киньуна (для срезов)
- •Метод Файта (для срезов)
- •Серебрение бактерий в мазках — метод Фонтана
- •Выявление жгутиков и ресничек Метод Леффлера
- •Метод Лайфзона
- •Метод Меллера
- •Окраска малахитовым зеленым Шеффера-Фултона
- •Метод Ожешки
- •Метод Битгера
- •Выявление возбудителей сыпного тифа и других риккетсий Выявление риккетсий в мазках (метод Маккиавелло)
- •Выявление риккетсий в срезах (метод Ника)
- •Выявление коринебактерий дифтерии
- •Выявление стрептококков
- •Выявление стафилококков
- •Выявление пневмококков
- •Выявление менингококков
- •Выявление гонококков
- •Выявление возбудителей чумы
- •Выявление анаэробных спорообразующих бактерий группы клостридии
- •Выявление возбудителей сибирской язвы
- •Выявление возбудителей кишечной инфекции
- •Выявление спирохет и других спиралевидных бактерий
- •Выявление возбудителей возвратного тифа
- •Выявление лептоспир
Метод Меллера
1. Фиксированные мазки помещают на 2 мин. в хлороформ.
2. Переносят в 5 % водный раствор хромовой кислоты на 2 — 10 мин.
3. Промывают в проточной воде и окрашивают карболовым фуксином 1 мин (стекло при этом подогревают на горелке до появления паров).
4. Дифференцируют в 5 % серной кислоте 5 с.
5. Хорошо промывают в проточной воде и подкрашивают водным раствором метиленового синего 3 мин.
6. Промывают в проточной воде, сушат и изучают при иммерсии.
Результат: опоры окрашиваются в красный цвет, бактерии — в синий.
Окраска малахитовым зеленым Шеффера-Фултона
1. Мазки, фиксированные над огнем, окрашивают 5 % водным раствором малахитового зеленого 5—10 мин.
2. Промывают в проточной воде.
3. Докрашивают 1 % водным раствором сафранина 30 с.
4. Промывают водой, сушат и изучают при масляной иммерсии.
Результат: споры окрашиваются в зеленый цвет, бактерии — в красный.
Метод Ожешки
На нефиксированный мазок наливают 0,5 % раствор соляной кислоты и подогревают над огнем 1 — 2 мин. С препарата сливают кислоту, тщательно промывают проточной водой, высушивают и после высыхания фиксируют на пламени. Фиксированный препарат окрашивают по методу Циля — Нильсена.
Результат: тела бактерий окрашиваются в синий цвет, споры — в красный.
Метод Битгера
Нефиксированный мазок обрабатывают 10 % формалином 10 мин, промывают проточной водой и высушивают. Окрашивают 3 мин аммиачным метиленовым синим (20 мл насыщенного спиртового раствора метиленового синего + 3 мл 98 % раствора аммиака + 80 мл дистиллированной воды), нагревая стекло над огнем до закипания красителя. Промывают проточной водой, докрашивают 0,5 % раствором сафранина 3—5 мин, промывают водой, высушивают и изучают при масляной иммерсии.
Результат: бактерии красные, споры синие.
Выявление возбудителей сыпного тифа и других риккетсий Выявление риккетсий в мазках (метод Маккиавелло)
1. Тонкие мазки фиксируют над пламенем (3 раза).
2. Окрашивают в предварительно профильтрованной смеси, состоящей из 0,5 г основного фуксина (насыщенного), 3,6 мл 0,1 М гидроортофосфата натрия, 1,4 мл 0,1 М дигидроортофосфата натрия и 55 мл дистиллированной воды (рН 7,2) 5 мин.
3. Окунают на 5 с в 0,5 % водный раствор лимонной кислоты.
4. Тщательно промывают в водопроводной воде.
5. Докрашивают 0,1 % водным раствором метиленового синего 1—2 мин или 1% раствором 10 с.
6. Ополаскивают в воде, высушивают и исследуют при иммерсии.
Результат: риккетсий окрашиваются в красный цвет, клетки и бактерии — в синий различных оттенков.
Часто используют также красящую смесь Гимзы. Ею можно окрашивать при рН 7,2-7,4, а затем дифференцировать в подкисленной воде до тех пор, пока эритроциты не станут розовыми, или при рН 6,5-6,0 с последующим промыванием и высушиванием мазков.
Выявление риккетсий в срезах (метод Ника)
Материал фиксируют 10 % нейтральным формалином, заливают в парафин, депарафинированные срезы доводят до воды.
1. Окрашивают водным раствором метилового фиолетового (1:10 000) 30-60 мин.
2. Дифференцируют в слабой уксусной кислоте (две капли ледяной уксусной кислоты на 100 мл дистиллированной воды) до тех пор, пока цитоплазма не обесцветится.
3. Докрашивают водным раствором метилового желтого (1:10 000) несколько секунд.
4. Обезвоживают и просветляют в ацетоне и ксилоле.
5. Заключают в синтетическую смолу.
Результат: риккетсий пурпурно-фиолетовые, ядра клеток желтые.