Добавил:
Upload Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз: Предмет: Файл:
Окраска бактерий в мазках.doc
Скачиваний:
26
Добавлен:
26.08.2019
Размер:
157.18 Кб
Скачать

Метод Меллера

1. Фиксированные мазки помещают на 2 мин. в хлороформ.

2. Переносят в 5 % водный раствор хромовой кислоты на 2 — 10 мин.

3. Промывают в проточной воде и окрашивают карболовым фуксином 1 мин (стекло при этом подогревают на горелке до появления паров).

4. Дифференцируют в 5 % серной кислоте 5 с.

5. Хорошо промывают в проточной воде и подкрашивают водным раствором метиленового синего 3 мин.

6. Промывают в проточной воде, сушат и изучают при иммерсии.

Результат: опоры окрашиваются в красный цвет, бактерии — в синий.

Окраска малахитовым зеленым Шеффера-Фултона

1. Мазки, фиксированные над огнем, окрашивают 5 % водным раствором малахитового зеленого 5—10 мин.

2. Промывают в проточной воде.

3. Докрашивают 1 % водным раствором сафранина 30 с.

4. Промывают водой, сушат и изучают при масляной иммерсии.

Результат: споры окрашиваются в зеленый цвет, бактерии — в красный.

Метод Ожешки

На нефиксированный мазок наливают 0,5 % раствор соляной кислоты и подогревают над огнем 1 — 2 мин. С препарата сливают кислоту, тщательно промывают проточной водой, высушивают и после высыхания фиксируют на пламени. Фиксированный препарат окрашивают по методу Циля — Нильсена.

Результат: тела бактерий окрашиваются в синий цвет, споры — в красный.

Метод Битгера

Нефиксированный мазок обрабатывают 10 % формалином 10 мин, промывают проточной водой и высушивают. Окрашивают 3 мин аммиачным метиленовым синим (20 мл насыщенного спиртового раствора метиленового синего + 3 мл 98 % раствора аммиака + 80 мл дистиллированной воды), нагревая стекло над огнем до закипания красителя. Промывают проточной водой, докрашивают 0,5 % раствором сафранина 3—5 мин, промывают водой, высушивают и изучают при масляной иммерсии.

Результат: бактерии красные, споры синие.

 

Выявление возбудителей сыпного тифа и других риккетсий Выявление риккетсий в мазках (метод Маккиавелло)

1. Тонкие мазки фиксируют над пламенем (3 раза).

2. Окрашивают в предварительно профильтрованной смеси, состоящей из 0,5 г основного фуксина (насыщенного), 3,6 мл 0,1 М гидроортофосфата натрия, 1,4 мл 0,1 М дигидроортофосфата натрия и 55 мл дистиллированной воды (рН 7,2) 5 мин.

3. Окунают на 5 с в 0,5 % водный раствор лимонной кислоты.

4. Тщательно промывают в водопроводной воде.

5. Докрашивают 0,1 % водным раствором метиленового синего 1—2 мин или 1% раствором 10 с.

6. Ополаскивают в воде, высушивают и исследуют при иммерсии.

Результат: риккетсий окрашиваются в красный цвет, клетки и бактерии — в синий различных оттенков.

Часто используют также красящую смесь Гимзы. Ею можно окрашивать при рН 7,2-7,4, а затем дифференцировать в подкисленной воде до тех пор, пока эритроциты не станут розовыми, или при рН 6,5-6,0 с последующим промыванием и высушиванием мазков.

Выявление риккетсий в срезах (метод Ника)

Материал фиксируют 10 % нейтральным формалином, заливают в парафин, депарафинированные срезы доводят до воды.

1. Окрашивают водным раствором метилового фиолетового (1:10 000) 30-60 мин.

2. Дифференцируют в слабой уксусной кислоте (две капли ледяной уксусной кислоты на 100 мл дистиллированной воды) до тех пор, пока цитоплазма не обесцветится.

3. Докрашивают водным раствором метилового желтого (1:10 000) несколько секунд.

4. Обезвоживают и просветляют в ацетоне и ксилоле.

5. Заключают в синтетическую смолу.

Результат: риккетсий пурпурно-фиолетовые, ядра клеток желтые.