Метод Френкеля

Окрашивают мазок с нагреванием на пламени горелки раствором фуксина иди генцианового фиолетового на анилиновой воде и затем обесцвечивают 1 —2 мин смесью (50 мл спирта + 20 мл 15 % азотной кислоты + 30 мл воды). В этой смеси растворяют до насыщения метиленовый синий или основной коричневый. Затем мазок промывают в проточной воде, сушат и изучают при иммерсии.

Результат: микобактерии окрашиваются в красный цвет (при окраске фуксином) или в фиолетовый (при окраске генциановым фиолетовым).

Флюоресцентное окрашивание мазков мокроты (метод Хагеманна) ,

Фиксированные нагреванием мазки окрашивают в течение 8 — 10 мин при комнатной температуре в растворе аурамина (1 г аурамина в 100 мл 5 % фенола). Тщательно промывают проточной водой, дифференцируют в 2 сменах 2 % солянокислого спирта по 2 мин. Затем снова хорошо промывают в проточной воде, обрабатывают 0,1 % раствором перманганата натрия 20 с, снова промывают в воде, сушат и исследуют при иммерсии (2 мл концентрированной соляной кислоты на 98 мл спирта).

Результат: микобактерий имеют вид ярко-жёлтых палочек.

Метод Киньуна (для срезов)

1. Депарафинированные срезы доводят до воды.

2. Окрашивают любым карбол-фуксином при 70 °С 10 мин, при 55 °С - 30 мин, при 37 °С - 2 мин или при 20-25 °С 4-16 мин.

3. Промывают в воде.

4. Обесцвечивают в смеси 2 мл концентрированной соляной кислоты и 98 мл 95 — 70 % спирта от 20 с до нескольких минут (до обесцвечивания).

5. Докрашивают кислым квасцовым гематоксилином 2 —5 мин или 1 % раствором метиленового синего либо януса зеленого В в 1 % уксусной кислоте и 20 % спирте 3 мин (два последних красителя пригодны и для мазков).

6. Промывают в проточной воде.

7. Обезвоживают, просветляют (не следует пользоваться карбол-ксилолом, который обесцвечивает почти все микобактерии) и заключают в полистирол, капрат целлюлозы или депекс, но не в бальзам.

Результат: кислотоустойчивые микробы и цероид окрашиваются в красный цвет, ядра клеток — в синий или зелёный, гранулы лаброцитов (тучных клеток) при окрашивании метиленовым синим приобретают синё-фиолетовый цвет, но не окрашиваются гематоксилином. В материале, фиксированном формалином, эритроциты часто окрашиваются в розовый цвет, а стержни волос и кератогиалин — в красный различных оттенков.

Метод Файта (для срезов)

1. Депарафинированные срезы доводят до воды и окрашивают 30 — 60 мин при комнатной температуре смесью, в состав которой входят 5 г фенола, 10 мл этилового или метилового спирта и 1 г основного фуксина (растворить и долить до 100 мл дистиллированной воды).

2. Переносят срезы в концентрированный раствор формалина на 5 мин.

3. Диференцируют почти до полного обесцвечивания в 2- % солянокислом спирте.

4. Переносят в концентрированный раствор формалина на несколько секунд и промывают в воде.

5. Докрашивают пикрофуксином Ван-Гизона и гематоксилином 10—15 мин, промывают в воде.

6. Дифференцируют и просветляют в спиртах возрастающей концентрации (от 95 % до 100 %), спирт-ксилоле и двух сменах ксилола, заключают в полистирол или пермаунт.

Результат: кислотоустойчивые микобактерии окрашиваются в фиолетовый цвет.